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文档简介

1、实验八、重组转化子的快速鉴定实验八、重组转化子的快速鉴定掌握快速鉴定重组转化子的方法掌握快速鉴定重组转化子的方法一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理本鉴定方法是用碱性裂解液把转化子菌体裂解，然后直接用琼本鉴定方法是用碱性裂解液把转化子菌体裂解，然后直接用琼脂糖凝胶分离，通过比较白色和脂糖凝胶分离，通过比较白色和蓝蓝色转化子质粒的迁移率，鉴色转化子质粒的迁移率，鉴定出重组转化子。定出重组转化子。三、实验材料三、实验材料菌落菌落PCR检测增殖的菌落检测增殖的菌落该质粒载体用的是该质粒载体用的是pUC的复制子，拷的复制子，拷贝数能达到贝数能达到500-700个。个。四、仪器设备四、仪器设

2、备五、实验用具五、实验用具微波炉微波炉 电泳仪电泳仪 微型电泳槽微型电泳槽 紫外透射检测仪紫外透射检测仪 凝胶成像仪凝胶成像仪移液器移液器 吸管头若干吸管头若干 加样板加样板96孔培养板孔培养板 牙签牙签六、试剂六、试剂七、实验步骤七、实验步骤1、用牙签从转化选择平板选取几十个白色和几个蓝色菌落，殖在LB平板上（添加Amp），37倒置过夜培养。2、在96孔平板每孔加入20 ul 10mM EDTA。3、用牙签挑取少量菌体（不能太不能太少，也不能太多）少，也不能太多），悬浮于各孔中（其中1-2孔是蓝色菌落作为对照），将平板接触旋涡器几秒钟。4 、加入20 ul裂解液，将平板接触旋涡器几秒钟，静置5分钟。5 、将等量的1M KCl和载样缓冲液混合，各孔中加入6 ul，将平板接触旋涡器几秒钟。6 、按蓝色菌落，白色菌落.最后蓝色菌落的顺序，各取20 ul点样。7 、1.2%的琼脂糖凝胶电泳后观察。与蓝色菌落质粒迁移率比较，可判别白色菌落的重组质粒是否含有插入子。挑取菌落勿太少，也不能太多。此外，裂解后菌液较粘，点样时吸管头勿垂直拉出以免带出点样孔内的菌液样品。注意事项注意事项1、你知道哪些重

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