R2A培养基适用性检查方案

1、计数培养基适用性验证方案登 记 号： 生效日期： 2015.12.01 前 版 本： N/AJSALPHARMR2A培养基Page 1 of 9题目计数培养基适用性验证方案方案号版本号01计数培养基适用性验证方案登 记 号： 生效日期： 2015.12.01 前 版 本： N/AJSALPHARMR2A培养基Page 2 of 9批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理计数培养基适用性验证方案登 记 号： 生效日期： 2015.12.01 前 版 本： N/AJSALPHARMR2A培养基Page 3 of 9目录1. 验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5

2、. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查10. 阴性对照附件 1. 检测记录计数培养基适用性验证方案登 记 号： 生效日期： 2015.12.01 前 版 本： N/AJSALPHARMR2A培养基Page 4 of 91. 验证目的 纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的目的 是确认 R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。2. 参照标准2015 版中国药典二部 1105 微生物限度检查法。3. 验证项目R2A 培 养基 的适用性检查。4. 验证小组人员及职责 ：4.1 验证小组人员 :小组人员职务姓名所在部门组长质量部组员质量部组员质

3、量部4.2 验证人员职责及要求4.2.1 按验证方案及相关文件实施验证。4.2.2 认真观察并做好验证原始记录。4.2.3 对实施验证的结果负责。4.3 验证中各部门的职责4.3.1 验证领导组职责4.3.1.1 制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理4.3.1.2 确定验证项目及验证项目负责人。计数培养基适用性验证方案登 记 号： 生效日期： 2015.12.01 前 版 本： N/AJSALPHARMR2A培养基Page 5 of 94.3.1.3 负责验证方案的批准工作。4.3.1.4 负责验证资料及结果的审核工作。4.3.1.5 负责验证报告的批准工作。4.3.2 验证工作小组职责4

4、.3.2.1 负责验证方案的起草工作。4.3.2.2 参与验证方案的讨论、确认工作。4.3.2.3 负责验证方案的实施。4.3.2.4 负责验证结果的分析、统计、报告工作。4.3.2.5 参与验证结果的评价工作。4.3.3 质量部职责4.3.3.1 负责公司验证日常管理工作。4.3.3.2 负责验证方案的审核工作。4.3.3.3 负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。4.3.3.4 负责检验仪器及检验方法的验证。4.3.3.5 负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验 证过程中的各项检验工作负责。4.3.3.6 负责对验证人员的培训、考核工作。4.3.3.7 负责验证

5、资料和报告的审核工作。4.3.3.8 负责验证文件回收、归档管理工作。5. 判定标准被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2 的范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。6. 试验材料6.1 被验证产品： R2A琼脂培养基计数培养基适用性验证方案登 记 号： 生效日期： 2015.12.01 前 版 本： N/AJSALPHARMR2A培养基Page 6 of 96.2 仪器设备6.2.1 压力蒸汽灭菌器6.2.2 HF1200LC 型生物安全柜6.2.3 DNP-9160BS 型培养箱6.2.4 DHG90 型鼓风干燥箱6.2.5 微波炉6.3. 验证用培

6、养基名称生产厂家批号R2A琼脂培养基6.4. 验证用菌株： （ 第 代）试验菌株增菌培养基培养温度培养时间枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨液体培养基303518-24h铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养基232818-24h7. 菌液制备分别取铜绿假胞杆菌、 与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基 中，于 3035培养不超过 18-24h 。取经 3035培养 18-24h 的铜绿假单胞 菌、与枯草芽孢杆菌的新鲜培养物 1ml 加入到 9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，倍稀 释获得约为 50100cfu ml 的菌悬液备用。8. 菌液计数：（每种菌液接种 2 个平皿）分别取铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌

7、菌悬液 1ml 分别注入无菌平皿中， 立即倾 注 R2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，置 30 35培养不少于 5 天；计数培养基适用性验证方案登 记 号： 生效日期： 2015.12.01 前 版 本： N/AJSALPHARMR2A培养基Page 7 of 9菌落计数结果（ 2 个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（ cfu ml）试验次数10-5 稀释10-6 稀释10-7 稀释12平均值12平均值12平均值枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌9. 适用性检查分别取铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌菌悬液 1ml 分别注入无菌平皿中， 立即 倾注 R2A琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备 2

8、 个平皿，置 30 35培养不 不少于 5 天；菌落计数结果（ 2 个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（ cfu ml）试验次数10-5 稀释10-6 稀释10-7稀释12平均值12平均值12平均值枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌10. 阴性对照为确认试验条件是否符合要求， 应进行阴性对照试验， 阴性对照试验应无计数培养基适用性验证方案登 记 号： 生效日期： 2015.12.01 前 版 本： N/AJSALPHARMR2A培养基Page 8 of 9菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。附表 1： 计数培养基适用性检查验证记录 试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日验证菌株平皿号供试品组 cfu ml对照培养基组 cfu ml菌落比值枯草芽孢杆菌（ 培养