蛋白翻译后修饰研究生高级生化

1、.蛋白翻译后修饰（齐以涛老师）上课老师没说重点1. 蛋白的概念：由许多氨基酸通过肽键相连形成的高分子含氮化合物。2. 蛋白后修饰概念和意义 （ppt4-5）3. 蛋白后修饰种类1. 切除加工2. 糖基化3. 羟基化4. 甲基化5. 磷酸化6. 乙酰化7. 泛素化8. 类泛素化9. 200. 磷酸化修饰1.概念：磷酸化是通过蛋白质磷酸化激酶将atp的磷酸基转移到蛋白的特定位点上的过程。大部分细胞过程实际上是被可逆的蛋白磷酸化所调控的，至少有30%的蛋白被磷酸化修饰精品.2.作用位点：丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸是主要的磷酸化氨基酸，大多数磷酸化蛋白质都有多个磷酸化位点，并且其磷酸化位点是可变的。3.实

2、例(mapk途径)：分裂原活化的蛋白激酶（mapk）、分裂原活化的蛋白激酶的激酶（ mapkk）、分裂原活化的蛋白激酶的激酶之激酶（mapkkk）。在真核细胞中，这3种类型的激酶构成一个mapk级联系统（mapk cascade），通过mapkkk-mapkk-mapk逐级磷酸化，将外来信号级联放大并传递下去。具体过程如下： mapkkk位于级联系统的最上游，能够通过胁迫信号感受器或者信号分子的受体，或者其本身就直接感受胞外信号刺激而发生磷酸化 mapkkk磷酸化后变为活化状态，可以使mapkk磷酸化 mapkk始终存在于细胞质中，mapkk磷酸化以后通过双重磷酸化作用将mapk激活精品. m

3、apk被磷酸化后有3种可能的去向：（1）停留在细胞质中，激活一系列其它的蛋白激酶（2）在细胞质中使细胞骨架成分磷酸化（3）进入细胞核，通过磷酸化转录因子，调控基因的表达4.功能和意义: 一：调节酶蛋白及生理代谢 糖分解代谢中糖原磷酸化酶活性的调节，被磷酸化的酶具有活性，去磷酸化的酶无活性 磷酸化或去磷酸化使胞内已存在酶的活性被激活或失活，调节胞内活性酶的含量 二: 调节转录因子活性转录因子通常包含dna结合结构域和转录激活结构域. 转录因子在转录激活结构域或调控结构域发生磷酸化，直接影响其转录活性. c-jun转录激活结构域的两个丝氨酸残基磷酸化，正调控c-jun的转录活性.三：调节转录因子核

4、转位 tgf-b与其i型、ii型受体结合，结合后的tgf-b i型受体识别r-smad包括smad2和smad3，作用于c末端的丝氨酸使其磷酸化而被激活，激活后的r-smad与smad4结合转入细胞核内，发挥转录调节活性 nf-kb与其抑制因子ikb形成复合体时存在于胞质。当ikb磷酸化、泛素化后，与nf-kb解离后，nf-kb失去其抑制，得以转入核内，间接调节基因转录活性精品.。四：调节转录因子与dna结合活性 atf/creb家族成员atf-1（activating transcription factor 1）和creb（camp response element binging pro

5、tein）都可以与dna序列tgacg结合。atf-1在ser残基上磷酸化可以增强其与dna位点的结合，从而增强转录因子dna结合活性 紫外线照射激活p53的dna结合活性，主要通过p38蛋白激酶磷酸化p53的ser残基 c-jun dna结合结构域附件的3个氨基酸磷酸化，就不能与dna结合。5.功能和意义总结： 蛋白质磷酸化是生物体内普遍存在的一种调节方式，几乎涉及所有生理及病理过程 尤其对细胞因子、生长因子的信号转导及细胞生长、分化和凋亡有重要作用 包括细胞信号转导、肿瘤发生、新陈代谢、神经活动、肌肉收缩、细胞增殖、发育和分化，细胞骨架调控和细胞凋亡等。乙酰化修饰1.概念： 在乙酰化酶催化

6、下将乙酰基团转移到底物蛋白质赖氨酸残基上的过程。其逆反应由蛋白质脱乙酰酶催化，称为蛋白质的脱乙酰化。首次发现组蛋白被乙酰化修饰。精品.2.意义和功能；一：刺激dna转录 组蛋白n端包裹于dna外使dna无法暴露，乙酰化后组蛋白与dna结合减弱，dna得以暴露，从而刺激dna的转录二：调节转录因子与dna结合活性 1.刺激转录因子与dna结合:p53, e2f1, gata1和eklf(erythroid kruppel like factor)的乙酰化位点靠近其dna结合结构域 2.阻止转录因子与dna结合: hmg1(high mobility group 1)乙酰化的赖氨酸残基位于dna结

7、合结构域内。三：调节蛋白质间相互作用 1.tcf(t-cell specific transcription factor)与其共刺激因子armadillo的结合可被tcf的乙酰化干扰 2. 核受体的乙酰化影响其与共刺激因子actr(activator of the thyroid and retinoicacid receptor)的结合。四：影响蛋白质稳定性 e2f1乙酰化延长其半衰期 a-微管蛋白乙酰化影响微管稳定性五组蛋白乙酰化精品. 组蛋白低乙酰化，由于组蛋白n末端富含正电荷的氨基酸，与带负电的dna靠静电招募结合紧密，因此转录因子很难与dna的启动区域结合，基因表达被抑制 组蛋白乙

8、酰化时，乙酰化中和了组蛋白赖氨酸和精氨酸残基的正电荷，降低了与dna相互作用的能力，转录因子可以很容易的与dna的启动子区域结合，介导基因表达。六乙酰化与疾病 组蛋白乙酰化酶p300/cbp(creb binding protein)广泛参与涉及白血病的染色体移位，导致多种包含hat（histone acetyltransferase）活性的融合蛋白产生，与白血病的发生发展密切相关 组蛋白去乙酰基酶亦通过多种机制参与癌症进程 多聚谷氨酰胺疾病是一种神经退行性遗传病，是由致病基因cag重复片段的扩大引起的。在扩大的多谷氨酰胺诱导的疾病中，蛋白的乙酰化和去乙酰化的失衡是一个关键的过程。泛素化修饰1

9、.概念： 泛素化是一种高度保守的翻译后水平的蛋白质修饰过程，可以将泛素共价结合到目的底物蛋白质的赖氨酸残基上。也是一种可逆性的过程，可由去泛素化酶将泛素从蛋白质上除去。 泛素由76个氨基酸组成，高度保守，普遍存在于真核细胞内，故名泛素精品. 共价结合泛素的蛋白质能被蛋白酶识别并降解，这是细胞内短寿命蛋白和一些异常蛋白降解的普遍途径 与消化道内进行的蛋白质水解不同，从泛素与蛋白的结合到将蛋白水解成小的肽段，整个水解过程需要能量参与 20世纪70年代中期，首次从牛胸腺中分理出泛素 1977年，h.busch首次发现泛素可以共价结合在h2a上，形成h2a单泛素化2.泛素化（泛素化介导的蛋白质降解途径

10、）过程：(图示如下) 泛素-蛋白酶系统存在于所有真核生物细胞的调控系统，需要三种酶的参与：激活酶e1、结合酶e2和连接酶e3 在atp酶作用下，e1在其半胱氨酸（cys）和泛素羧基端的甘氨酸（gly）之间形成巯酯键（thiol ester bond），即e1-sh-ub，激活泛素 在e2酶作用下，泛素从e1转移到e2，同样以巯酯键的方式结合（e2-sh-ub） e3可特异性识别底物蛋白质，并与之结合。与此同时，e2将激活的泛素直接转移到e3结合的底物上，经过多次重复，多个泛素之间通过k48相互连接，在底物上形成多泛素链（polyubiquitin chain）。 26s蛋白酶体可以特异性识别多

11、泛素化的蛋白质，并将之完全水解为小多肽片段精品. 去泛素酶可以重新回收泛素3.功能和意义:一 介导蛋白质降解 调节细胞周期：cdc34是e2酶，cyclina, cyclinb,cycline, p21和p27可被泛素化修饰降解 与dna修复、肿瘤和凋亡有关：p53降解受泛素介导的蛋白酶解调节，mdm2是其e3酶。 与免疫炎症反应有关：nf-kb与其抑制蛋白ikb结合，无活性状态存在于胞浆内。感染或收到某种信号，ikb被泛素化降解，nf-kb进入核内激活靶基因 泛素为mhc-i类分子提供多肽，提呈给t淋巴细胞抗病毒感染 调节基因转录水平：（ppt 33-35）精品. 影响转录因子在细胞内定位：

12、 控制转录共刺激因子活性： 3. 调整转录因子蛋白水平：二 泛素化的非蛋白酶解功能 k63泛素化的蛋白质与细胞表面受体的胞吞、dna损伤后修复、核糖体功能、应激反应及蛋白激酶的激活有关 组蛋白h2a的单泛素化与基因转录激活有关，并不导致其降4.功能和意义总结： cells are continually building proteins, using them for asingle task, and then discarding them signaling or controlling proteins (eg. transcription regulators and the cy

13、clins) - lead very brief lives, carrying their messages and then being thrown away specialized enzymes - built just when they are needed,allowing cells to keep up with their minute-by-minute synthetic needs the approach may seem wasteful, but it allows each cell to respond quickly to constantly chan

14、ging requirements.sumoylation（sumo化修饰）1.概念：精品.sumo（小泛素样修饰）：是泛素和泛素样的家族成员。sumo的氨基酸序列和空间结构高度相似，与泛酸具有相同的功能。共有四个成员，分别为sumo1-4。2.sumo化修饰（ppt44）和去sumo化修饰（ppt 47）过程： 3.sumo连接酶 e3的种类和底物 (ppt 45)4.senp(sumo特异性蛋白酶)特征和种类 ppt 46 senp是去sumo化酶5.sumo修饰的蛋白（底物）:ppt 506.sumo 和 ubiquitin异同 （ppt 51）：这两种蛋白质具有非常相似的二级和三级结构

15、。精品.泛素和sumo1的比对表明只有18的氨基酸序列是相同的。与泛素系统不同，sumo系统主要针对底物蛋白的蛋白酶，sumo1缀合有不同的细胞功能。7.sumo化的功能 （ppt 56 表格） ppt 52-588.senp2的作用一senp2在肌肉的发生 中的作用senp2去sumo化修饰mef2a，在骨骼肌中促进肌肉生成抑制素的表达并且抑制肌细胞的生成。senp2在调节肌肉生成抑制素以诱导肌细胞生成中发挥关键作用senp2是骨骼肌再生的潜在的治疗靶标。二 senp2对于神经元的功能至关重要 多种蛋白修饰 各种翻译后修饰的过程不是孤立存在的，在很多细胞活动中，需要各种翻译后修饰的蛋白共同作用 同一个蛋白可以拥有一种以上的后修饰过程 各种翻译后修饰形式相互影响和协调精品. 翻译后修饰的蛋白质组学 由于蛋白质翻译后修饰并不是直接由基因决定的，研究蛋白质翻译后修饰对蛋白组学的研究具有更重要的意义，因此诞生了翻译后修饰的蛋白质组学 蛋白质翻译后修饰在体内是一个动态的变化过程，有效探明细胞和组织内蛋白质修饰谱的“翻