体外放射分析技术课件

1、体外放射分析技术体外放射分析技术体外分析发展史体外放射分析技术 体外放射分析技术一、定义一、定义以放射性核素或其他非放射性物以放射性核素或其他非放射性物质标记的配体质标记的配体(Ligand)(Ligand)为示踪剂，为示踪剂，以配体和结合体的结合反应为基以配体和结合体的结合反应为基础，在试管内进行的微量生物活础，在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。性物质的检测技术。体外放射分析技术体外分析技术体外放射分析体外放射分析体外非放射分析体外非放射分析放射性竞争放射性竞争结合分析结合分析放射性非竞放射性非竞争结合分析争结合分析radioimmunoassay,radioimmunoassay,

2、 immunoradiometric immunoradiometric assay,assay, 体外放射分析技术体外放射分析技术一、一、RIARIA的基本原理的基本原理（一）竞争抑制结合反应：（一）竞争抑制结合反应： 放射免疫分析是在体外条件下，由足放射免疫分析是在体外条件下，由足量的非标记抗原（量的非标记抗原（AgAg）与定量的标记抗原）与定量的标记抗原（* *AgAg）对限量的特异性抗体（）对限量的特异性抗体（AbAb）的竞）的竞争抑制结合反应。争抑制结合反应。体外放射分析技术分析原理分析原理*Ag + AbAg+*Ag-Ab + *AgAg-Ab + Ag条件：*Ag与Ag免疫活性相

3、同*Ag与Ab恒量1. *Ag与Ag总量大于Ab有效结合位点体外放射分析技术 A Ag g + + * *A Ag g + + A Ab b * *A Ag gA Ab b + + A Ag gA Ab b + + f fr re ee e * *A Ag g + + + + + + + + + + + + + + + + 体外放射分析技术体外放射分析技术（二）剂量反应曲线（二）剂量反应曲线：标准曲线标准曲线 标记物与被测物之间的函数关系可以用剂标记物与被测物之间的函数关系可以用剂量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列量反应曲线来表示。剂量反应曲线是用一系列标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫

4、标准曲标准抗原反应而绘制出来的，所以又叫标准曲线。线。标准抗原标准抗原( (标准品标准品) )是厂家在试剂盒中提供的已知剂量是厂家在试剂盒中提供的已知剂量的非标记抗原。的非标记抗原。 体外放射分析技术标准曲线的绘制方法标准曲线的绘制方法用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在用一系列已知浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一定条件下同限量的特异性抗体进行反应；一定条件下同限量的特异性抗体进行反应；在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离在反应达到平衡后，利用适当的分离方法分离B B和和F F；分别测量分别测量B B和和F F的放射性；的放射性；用反应变量（如用反应变量（如B/FB/F）作为

5、纵坐标，反应剂量作为横）作为纵坐标，反应剂量作为横坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得到不同坐标（即一系列标准抗原）作一条曲线，就得到不同浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是浓度的标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线，这就是剂量反应曲线。剂量反应曲线。 体外放射分析技术标标 准准 曲曲 线线体外放射分析技术体外放射分析技术 体外放射分析技术 体外放射分析技术体外放射分析技术体外放射分析技术体外放射分析技术体外放射分析技术体外放射分析技术体外放射分析技术体外放射分析技术体外放射分析技术体外放射分析技术 体外放射分析技术1. 1. 2. 2. 3. 3. 4. 4. 5. 5. 体外放射

6、分析技术RIA: 非标记 标记 抗体 抗原抗体 抗原 抗原 复合物IRMA:非标记 标记 抗体 抗原抗体 抗原 抗原 复合物+或体外放射分析技术 体外放射分析技术非放射标记的免疫分析法 化学发光分析 时间分辨荧光分析 酶免疫分析体外放射分析技术体外放射分析技术ECL反应原理：反应原理：化学发光反应导致光的发射是来自钌（化学发光反应导致光的发射是来自钌（Ru）化合物的电的）化合物的电的激发，而不是化学的激发。激发，而不是化学的激发。体外放射分析技术二二. .时间分辨荧光免疫时间分辨荧光免疫（time-resolved fluorescence immunossaytime-resolved fl

7、uorescence immunossay TRFIA TRFIA）稀土族中的镧系元素（稀土族中的镧系元素（EuEu、TbTb、SmSm、DyDy等）以离子价态时，等）以离子价态时，受到紫外光或激光等激发后，会以荧光的形式发射光谱，其受到紫外光或激光等激发后，会以荧光的形式发射光谱，其激发光光谱的波长和发射荧光的强度因离子不同而有差异，激发光光谱的波长和发射荧光的强度因离子不同而有差异，而且具有相当长的衰减时间，这样就为时间分辨荧光而且具有相当长的衰减时间，这样就为时间分辨荧光 (TRF)(TRF)所发射的信号采集和多标记的应用提供了条件。所发射的信号采集和多标记的应用提供了条件。TRFIAT

8、RFIA是一种以镧系元素是一种以镧系元素螯合物标记抗体或抗原，螯合物标记抗体或抗原，利用时间分辨荧光光度利用时间分辨荧光光度计测量法排除检品中非计测量法排除检品中非特异性荧光干扰的测量特异性荧光干扰的测量技术。技术。铕：铕： （Eueuropium）铽铽： （Tbterbium）钐钐： （Smsamarium）镝：镝： （Dydysprosium）体外放射分析技术原理：原理： TRFIATRFIA的标记物由镧系元素的标记物由镧系元素螯合物螯合物与与AbAb或或AgAg组成。待测物组成。待测物通过免疫反应形成的复合物上，标有镧系元素（通过免疫反应形成的复合物上，标有镧系元素（ EuEu3+3+）

9、，经），经紫外线激发后会发出荧光。但连接在复合物上的紫外线激发后会发出荧光。但连接在复合物上的EuEu发射的荧光发射的荧光很弱，需要将其游离出来再形成一个能发射强荧光的络合物。很弱，需要将其游离出来再形成一个能发射强荧光的络合物。因此在免疫反应结束后，需向体系中加入一种因此在免疫反应结束后，需向体系中加入一种“荧光荧光增强剂增强剂”，大大增加信号，所以该技术有时也称为解离增强镧系荧光免疫大大增加信号，所以该技术有时也称为解离增强镧系荧光免疫分析（分析（DELFIADELFIA）。）。 所谓时间分辨是指所谓时间分辨是指EuEu3+3+受激活后产生寿命较长的荧光，而受激活后产生寿命较长的荧光，而一般干扰荧光寿命较短，固可用仪器把测量时间定在每次激发一般干扰荧光寿命较短，固可用仪器把测量时间定在每次激发后的数百后的数百 s s之后才开始，干扰荧光已衰减到很低水平，所取之后才开始，干扰荧光已衰减到很低水平，所取荧光信号是荧光衰减过程的中间一段。荧光信号是荧光衰减过程的中间一段。螯合剂：螯合剂：异硫氰酸苯基异硫氰酸苯基-EDTA-EDTA（ICB-EDTAIC