论文-酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究

1、课外学术科技作品竞赛论 文作品名称： 酒精对小白鼠肝脏的损伤及其机理研究 摘 要 目的:对酒精对小白鼠肝脏的损伤及其可能的影响机理进行研究.方法:用体重为18-22g的小白鼠40只,随机分为四组第，1，2，3组分别用10%,30%和50%的酒精灌，每天一次；第4组为对照组，用0.9%的生理盐水进行灌胃，每天一次持，续5wk。每周测量和记录一次各组小白鼠的体重，观察和记录小白鼠的精神状态， 同时测量小白鼠的血清ALT、AST的含量。5wk后，处死小白鼠，取每只小白鼠相同部位的肝脏，观察其形态。结果:(1)各组小鼠平均体重均有增加，第1组增加最多，第3组增加最少;(2) 第1，4组小白鼠食欲正常，

2、精神状态好，第2，3组小白鼠有醉酒现象;(3)光镜下实验动物肝脏脂肪沉积，肝细胞病理损伤及肝组织炎症反应程度加重，纤维化不明显;(4) ALT，AST水平升高。结论:酒精可以导致肝细胞物质代谢障碍，使肝细胞变性，坏死。关键词:酒精 灌胃 肝细胞病理损伤 肝细胞变性1. 实验材料1.1 药物与试剂NaH2PO4 .2H2O 24g ，Na2HPO4 .12H2O 240g ，丙酮酸钠 176mg, 酮戊二酸 240mg，DL丙氨酸8mg，2,4二硝基苯肼160mg，NaOH，纯盐酸，DL门冬氨酸12mg，酒精。1.2仪器分光光度计，烧杯，100ml容量瓶2个，1000ml容量瓶2个水浴锅，量筒，

3、冰箱。1.3 动物40只体重为18-22g的wister小白鼠2. 实验2.1 取材从南华生命科学院购买小白鼠40只2.2 酒精灌胃处理将40只体重为18-20g的小白鼠,随机分为四组，将四组小白鼠先适应性地喂养1wk，随后将第1，2，3组分别用10%,30%和50%的酒精灌胃, 每天一次；第4组为对照组，用0.9%的生理盐水进行灌胃，每天一次，持续5wk。2.3 测体重及记录精神状态每周测量和记录一次各组小白鼠的体重，观察和记录小白鼠的精神状态。2.4 赖氏法检测小鼠血清ALT，AST含量2.4.1 ALT含量测定2.4.1.1试剂配制1）0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）称取NaH2

4、PO4 .2H2O 2.96495g ，Na2HPO4 .12H2O 29.0142g ，溶解，定容到1000ml。2） 20umol/L 丙酮酸钠标准液称取22mg丙酮酸钠溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）100ml中，现配先用。3）ALT基质液称取酮戊二酸29.2mg，DL丙氨酸1.78mg溶解于30ml 0.1mol/L磷酸缓冲液中（PH7.4），溶解后校正PH至7.4，再用PH7.4的磷酸缓冲液定容至100ml。置冰箱中保存备用（可保存一周）。4）0.02% 2,4二硝基苯肼溶液称取20mg 2,4二硝基苯肼先溶解于10ml纯盐酸中，电炉加热助溶，待全部溶解后，稀释至100

5、ml，过滤后盛于棕色瓶中，置冰箱中备用。5）1mol/L NaOH溶液称取4g NaOH溶解于蒸馏瓶后，定容到100ml。6）0.4 mol/L NaOH溶液称取16g NaOH溶解，定容到1000ml。2.4.1.2 实验方法1） ALT曲线的制作（1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温37然后使用，取6支试管按表1进行配制。表1 ALT标准曲线的制作 管号 试剂（ml） 01234520umol/L 丙酮酸钠标准液0.000.050.100.150.200.25ALT基质液0.500.450.400.350.300.250.1mol/L磷酸缓冲液0.010.010.010

6、.010.010.01混匀，将各管置37水浴中保温60min2,4二硝基苯肼0.50.50.50.50.50.5混匀，将各管置37水浴中保温20min0.4 mol/L NaOH溶液555555混匀，将各管置37水浴中保温10min（2）冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。（3）以丙酮酸含量为纵坐标，吸光值OD520nm为横坐标绘制标准曲线。2）小鼠肝组织ALT含量的测定（1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温至然后使用，取2支试管按表2进行配制。表2 ALT含量测定 管号试剂（ml）01样品0.100.10ALT基质液0.50混匀，将各管置37水浴中保

7、温60minALT基质液0.502,4二硝基苯肼0.50.5混匀，将各管置37水浴中保温20min0.4 mol/L NaOH溶液55混匀，将各管置37水浴中保温10min（2） 冷却后以0为对照用分光光度计比色测定吸光值OD520nm。 （3）在标准曲线中读出样品丙酮酸的生成量。2.4.2 AST含量测定 2.4.2.1试剂配制1）0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）称取NaH2PO4 .2H2O 2.96495g ，Na2HPO4.12H2O 29.0142g ，溶解，定容到100ml。2） 20umol/L 丙酮酸钠标准液称取22mg丙酮酸钠溶解于0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.

8、4）100ml中，现配先用。3）AST基质液称取酮戊二酸29.2mg，DL门冬氨酸2.66g，置于小烧杯中，加入NaOH溶解，后校正PH至7.4，再用PH7.4的磷酸缓冲液定容至100ml。置冰箱中保存备用（可保存一周）。4）0.02% 2,4二硝基苯肼溶液称取20mg2,4二硝基苯肼先溶解于10ml纯盐酸中，电炉加热助溶，待全部溶解后，稀释至100ml，过滤后盛于棕色瓶中，置冰箱中备用。5）1mol/L NaOH溶液称取4g NaOH溶解于蒸馏瓶后，定容到100ml。6）0.4 mol/L NaOH溶液称取16g NaOH溶解，定容到1000ml。2.4.2.2实验方法1）ALT曲线的制作（

9、1）将测定所用试剂除NaOH溶液外全部置于水浴箱中，预温37然后使用，取6支试管按表3进行配制。表3 ALT标准曲线的制作试剂（ml）01234520umol/L 丙酮酸钠标准液0.000.050.100.150.200.25AST基质液0.500.450.400.350.300.250.1mol/L磷酸缓冲液0.010.010.010.010.010.01混匀，将各管置37水浴中保温60min2,4二硝基苯肼0.50.50.50.50.50.5混匀，将各管置37水浴中保温20min0.4 mol/L NaOH溶液555555混匀，将各管置37水浴中保温10min（2）冷却后以0为对照用分光光

10、度计比色测定吸光值OD520nm。（3）以丙酮酸含量为纵坐标，吸光值OD520nm为横坐标绘制标准曲线。2）样品AST测定测定方法同AST含量的测定。2.5 结果 2.5.1 小白鼠的体重变化 体重 (g) 实验前实验后第一周第二周第三周第四周第1组19.2519.5720.1421.1622.24第2组19.3719.5219.9620.8321.69第3组19.3419.4319.8820.5721.15第4组19.4219.5220.0520.5621.032.5.2 精神状态 小白鼠在适应期间都比较紧张,四处躁动实。验开始后，灌酒后的实验组的小白鼠都表现的非常兴奋，四处乱蹿第，3组的小

11、白鼠有醉酒现象，而且随着灌酒时间的增长小，鼠的醉酒时间越来越长。2.5.3 小白鼠的ALT和AST的含量 ALT的含量 ALT含量 (u/L)实验前实验后第一周第二周第三周第四周第1组52.2057.4558.3759.0859.96第2组50.2356.8758.2659.6260.88第3组52.3562.0465.1367.4269.98第4组54.0053.9654.8855.0054.72 AST的含量 AST含 量 (u/L)实验前实验后第一周第二周第三周第四周第1组189.50194.32196.56195.87197.06第2组192.27199.58204.36206.962

12、09.71第3组196.46208.04216.00222.62228.27第4组187.96187.50188.07186.99188.372.5.4 肝组织镜检 对照组的肝脏组织正常，三组实验组的肝脏都出现不同程度的炎症。其中第3组的炎症最严重，肝脏明显的出现脂肪沉积现象，肝细胞病理性损伤，但是肝脏纤维化不明显。3论文结果 长期饮酒对小白鼠的体重，精神状态，血液中ALT,AST的含量和肝脏都会有一定的影响。特别是灌酒后小白鼠的精神状态会处在一个兴奋的状态，并且灌酒时间越长，这种持续兴奋的状态也延续的越长。随着灌酒的时间长短和酒精的浓度不同，肝脏的损伤程度及炎症程度也不一样。时间越长，对肝脏

13、的损伤越严重。另外，小白鼠血液中的ALT和AST含量也随灌酒历史的增长而在不短升高。参考文献1 丁霞 .酒精性肝损伤动物模型研究近况(综述) ，北京中医药大学学报1998年第05期2 黄娟娟 李兵 曹力波等.酒精对HVB转基因小鼠肝脏的损伤作用及其机制，中国药理学通报2010，3：26（3）3723 酗酒者增多酒精性肝病ALD发病率悄然上升 ， 百姓健康新闻网2010-04-264 厉有名 陈卫星 虞朝辉等. 浙江省酒精性肝病流行病学调查概况，中华肝脏病杂志 2003 ，11 ：164-1665 鲁小兰 陶明 罗金燕等.饮酒与肝病流行病调查，中华肝脏病杂志 2002 ，10；467-4686 厉有名 . 中国酒精性肝病研究现状，现代消化及介入诊疗2007年04期7 戴水奇,黄顺