分子技术模板试卷

1、博士班分子生物学实验技术课模拟试卷1、你想采用pcr技术扩增pegfp-n1中绿荧光蛋白（gfp）的序列，通过基因a中的bamh1位点将gfp序列插入基因a的编码序列中，并保证全长融合蛋白的表达。请根据下列信息设计用于扩增gfp的引物。 a b .gccagtgggatcctgattgcc. ala ser gly ilu arg ilu ala ggatcc为bamh1位点2、 你在做一个dna连接反应。经酶切回收的质粒载体大小为5055 bp、1:50稀释后测od2600.2；插入dna片段大小为675 bp、1:40稀释后测od2600.1。请按载体dna与插入dna片段克分子数比为1:

2、3和载体dna总量约0.15 x 10-12 mole计算，完成下列工作表（每个核苷酸残基的平均分子量以330计）：10x buffervector dnainsert dnah2ot4 ligasetotal volume2 ml ml ml ml1 ml20 ml3、下图是一个质粒图谱，标明其主要构件和作用。并根据构建特征，指出该载体的类型和功能特征。提示：pires-egfp contains the internal ribosome entry site (ires) of the encephalomyocarditis virus (ecmv) between the mcs a

3、nd the egfp (enhanced green fluorescent protein) coding region. this permits both the gene of interest (cloned into the mcs) and the egfp gene to be translated from a single bicistronic mrna.4、 你从大鼠脑组织中克隆了一个新基因，并已知是一种膜蛋白，根据cdna序列得知氨基酸残基为882个，同时你已制备了特异性单克隆抗体。下图分别是针对原核细胞表达产物、真核细胞表达产物和大鼠组织样本的免疫印迹结果：1、

4、原核细胞表达产物2、 原核细胞对照3、 真核细胞表达产物4、 真核细胞对照5、 大鼠脑皮层组织6、 大鼠心脏组织请解释结果，并设计实验来验证你的判断。5、 sars病毒全基因组测序和相关蛋白的鉴定已完成。你想利用petblue-2载体表达sars棘蛋白（surface spike glycoprotein）作进一步研究。你已有sars病毒rna、原核表达载体petblue-2、其他相关试剂和实验设备；并知道以下相关信息如下：sars棘蛋白的编码序列（下列为sars基因组部分序列，棘蛋白序列从21492到25259 bp）：21421 gtaggcttat cattagagaa aacaacag

5、ag ttgtggtttc aagtgatatt cttgttaaca21481 actaaacgaa catgtttatt ttcttattat ttcttactct cactagtggt agtgaccttg 21541 accggtgcac cacttttgat gatgttcaag ctcctaatta cactcaacat acttcatcta 21601 tgaggggggt ttactatcct gatgaaattt ttagatcaga cactctttat ttaactcagg 21661 atttatttct tccattttat tctaatgtta cagggtttca

6、 tactattaat catacgtttg 21721 gcaaccctgt catacctttt aaggatggta tttattttgc tgccacagag aaatcaaatg 21781 ttgtccgtgg ttgggttttt ggttctacca tgaacaacaa gtcacagtcg gtgattatta 21841 ttaacaattc tactaatgtt gttatacgag catgtaactt tgaattgtgt gacaaccctt 21901 tctttgctgt ttctaaaccc atgggtacac agacacatac tatgatattc

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8、2201 ccttttcacc tgctcaagac atttggggca cgtcagctgc agcctatttt gttggctatt 22261 taaagccaac tacatttatg ctcaagtatg atgaaaatgg tacaatcaca gatgctgttg 22321 attgttctca aaatccactt gctgaactca aatgctctgt taagagcttt gagattgaca 22381 aaggaattta ccagacctct aatttcaggg ttgttccctc aggagatgtt gtgagattcc 22441 ctaatat

9、tac aaacttgtgt ccttttggag aggtttttaa tgctactaaa ttcccttctg 22501 tctatgcatg ggagagaaaa aaaatttcta attgtgttgc tgattactct gtgctctaca 22561 actcaacatt tttttcaacc tttaagtgct atggcgtttc tgccactaag ttgaatgatc 22621 tttgcttctc caatgtctat gcagattctt ttgtagtcaa gggagatgat gtaagacaaa 22681 tagcgccagg acaaactg

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19、attaacgctt 24961 ctgtcgtcaa cattcaaaaa gaaattgacc gcctcaatga ggtcgctaaa aatttaaatg 25021 aatcactcat tgaccttcaa gaattgggaa aatatgagca atatattaaa tggccttggt 25081 atgtttggct cggcttcatt gctggactaa ttgccatcgt catggttaca atcttgcttt 25141 gttgcatgac tagttgttgc agttgcctca agggtgcatg ctcttgtggt tcttgctgca 25201 agtttgatga ggatgactct gagccagttc tcaagggtgt caaattacat tacacataaa25261 cgaacttatg gatttgttta tgagattttt tactcttgga tcaattactg cacagccagtpetblue-2载体图谱和mcs区的序列细节（提示：这是一个克隆和表达型载体，插入基因的表达靠t7启动子驱动，与用于重组子筛选的e.coli启动子方向相反。因而，插入多克隆位