氨基酸代谢ppt课件

1、氨基酸代谢氨基酸代谢The metabolism of amino acid1;.联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式。联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式。氨基酸分解代谢的主要途径是脱氨基作用，生成氨氨基酸分解代谢的主要途径是脱氨基作用，生成氨(ammonia)和相应的和相应的-酮酸；酮酸； 氧化脱氨基、联合脱氨基和非氧化脱氨基氧化脱氨基、联合脱氨基和非氧化脱氨基 是氨基酸的三种脱氨基方式。是氨基酸的三种脱氨基方式。背景知识背景知识2;.白化病白化病苯丙酮尿症苯丙酮尿症氨基酸的代谢异常与疾病氨基酸的代谢异常与疾病苯丙氨酸羟化酶遗传性缺陷可致苯丙酮酸尿症，酪氨酸酶遗传性缺陷可致白化

2、病苯丙氨酸羟化酶遗传性缺陷可致苯丙酮酸尿症，酪氨酸酶遗传性缺陷可致白化病 3;. 了解氨基酸代谢的方式。了解氨基酸代谢的方式。 掌握联合脱氨基作用的检定方法。掌握联合脱氨基作用的检定方法。实验目的实验目的4;.a 丙氨酸丙氨酸a 酮戊二酸酮戊二酸 谷丙转氨酶谷丙转氨酶 （GPT）丙酮酸丙酮酸谷氨酸谷氨酸NADH（NADPH)+NH3+H+谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶NAD + （NADP +)+H20苯肼为转氨酶的抑制剂，可以阻断联合脱氨基。苯肼为转氨酶的抑制剂，可以阻断联合脱氨基。本实验以谷丙转氨酶为底物，以苯肼为抑制剂，观察抑制剂对氨生成的影响。本实验以谷丙转氨酶为底物，以苯肼为抑制剂，观察抑

3、制剂对氨生成的影响。联合脱氨基，是指氨基酸的转氨基作用和氧化脱氨基作用的联合，其过程是氨基酸首联合脱氨基，是指氨基酸的转氨基作用和氧化脱氨基作用的联合，其过程是氨基酸首先与先与酮戊二酸在转氨酶催化下生成相应的酮戊二酸在转氨酶催化下生成相应的酮酸和谷氨酸，谷氨酸在酮酸和谷氨酸，谷氨酸在L-L-谷氨酸谷氨酸脱氢酶作用下生成脱氢酶作用下生成酮戊二酸和氨，酮戊二酸和氨，酮戊二酸再继续参与转氨基作用。酮戊二酸再继续参与转氨基作用。 实验原理实验原理5;.ConwayConway扩散皿扩散皿 内室放稀盐酸，外室放一侧放氢氧化钠溶液，内室放稀盐酸，外室放一侧放氢氧化钠溶液，另一侧放反应后溶液。另一侧放反应后

4、溶液。盖上玻璃片，将反应液混合后置于温箱内反盖上玻璃片，将反应液混合后置于温箱内反应。应。6;.实验步骤实验步骤 1 肝匀浆的制备肝匀浆的制备 2 联合脱氨基作用的反应体系联合脱氨基作用的反应体系 3 等温蒸馏等温蒸馏4 显色显色5 计算计算7;.取取0.50.5克肝组织，加入克肝组织，加入4.5%4.5%预冷的预冷的PH4.0PH4.0的磷酸盐缓冲液，制成的磷酸盐缓冲液，制成10%10%的肝匀浆。的肝匀浆。玻璃匀浆器玻璃匀浆器使用时注意事项使用时注意事项 用力但不要用力过猛，以免管子被捣破。用力但不要用力过猛，以免管子被捣破。 动作要迅速，以免酶活性丧失。动作要迅速，以免酶活性丧失。 用后要

5、立即清洗管子。用后要立即清洗管子。 1 肝匀浆的制备肝匀浆的制备8;.2 联合脱氨基作用的反应体系联合脱氨基作用的反应体系取三支试管，按顺序在各个管中加入以下试剂。取三支试管，按顺序在各个管中加入以下试剂。1 对照管对照管2 测定管测定管3 抑制管抑制管谷丙转氨酶底物液（谷丙转氨酶底物液（ml）1% NAD溶液（溶液（ml）1% 苯肼溶液（苯肼溶液（ml)10 % 三氯醋酸（三氯醋酸（ml)0.80.80.80.10.10.10.10.10.59;.10 % 三氯醋酸（三氯醋酸（ml)1% 苯肼溶液（苯肼溶液（ml)1 对照管对照管2 测定管测定管3 抑制管抑制管0.50.50.1 将以上反应

6、体系于将以上反应体系于3737水浴中预温水浴中预温5 5分钟。各管加入分钟。各管加入10%10%肝匀浆液肝匀浆液0.5ml, 370.5ml, 37水浴中保温水浴中保温4545分钟。按顺序在各个管中加入以下试剂。分钟。按顺序在各个管中加入以下试剂。10;.3 等温蒸馏等温蒸馏 取取3 3只只conwayconway扩散皿，内室加入扩散皿，内室加入0.01mol/L HCL, 0.01mol/L HCL, 外室两侧分别加入外室两侧分别加入1.0 ml1.0 ml的联合脱氨基反应液和的联合脱氨基反应液和0.5ml0.5ml的的0.5%0.5%的的NaOHNaOH液。密封，摇动扩散皿，液。密封，摇动

7、扩散皿，3737温箱中温箱中保温保温4545分钟。分钟。11;.4 显色显色 分别取扩散皿内室液分别取扩散皿内室液0.5ml0.5ml，各加蒸馏水，各加蒸馏水2.5ml2.5ml及阿拉伯胶液及阿拉伯胶液2 2滴，滴，混均后，再加混均后，再加NesslerNessler试剂试剂0.75ml,0.75ml,立即于立即于480nm480nm波长比色测定，读取波长比色测定，读取吸光度。吸光度。12;.5 计算计算按硫酸盐标准曲线，计算每克肝每小时释放的氨量。按硫酸盐标准曲线，计算每克肝每小时释放的氨量。6045NH3/g.h =测得值测得值220.5 10%13;.思考题思考题1 肝细胞中谷丙转氨酶在体内有哪些生理意义？临床上测定谷丙转氨酶有何诊断价