生化试剂的基础知识

1、生化试剂的根本知识一、生化试剂的分类2一按照化学性质分类2二按照临床应用分类2二、反响速度特性2一终点法试剂2二动力学法试剂3三、显色原理4一NAD-NADH 和 NADP-NADPH 系统5二p-NP 和 p-NA 系统5三H2O2偶联的指示系统5四抗原抗体反响指示系统5五其它显色反响6四、性能评价方法6一主要性能指标：6二性能评价方法6一、生化试剂的分类一按照化学性质分类1. 酶类：包括 ALT,AST,ALP,ACP,r-Gl a -HBDH丄DH,CK,CK-MB, a -AM%MSO,ADA,ChE 等。2. 底物/代谢产物类：包括 TG,TC,HDLCLDLC,UA,UREA,Cr

2、,Glu,TBAIb,T-Bil,TBA,NH4+,CO2 等。3. 无机离子类：包括Ca,P,Mg,CI等。4. 特种蛋白类：包括 apoAI,apoB,Lpa,C3,C4,PFBB 因子，lgG,lgA，lgM 等。二按照临床应用分类1. 无机离子：包ISCa, P, Mg, Cl等。2. 肝功能：包扌iSALT, AST, r-GT, ALP, MSO, T-BiL D-Bil, TBA. TP, Alb 等。3. 肾功能：UA, UREA, Cr等。4. 心肌酶谱：CK, CK-MB, LDH, a-HBDH, AST, MSOo5. 糖尿病：GLU等。6. 前列腺疾病：ACP, p-

3、ACP等。7. 胰腺炎：a -AMYo8. 血脂：TC» TG, HDL-C, LDL-C, apoAl, apoB» Lpa。9. 痛风：UAo10. 有机磷中毒:ChEo11. 免疫性疾病:C3, C4. PFBB 因子,IgG, IgA, IgM, Kappa 链,Lambda 链。二、反响速度特性按照反响速度，町以分为终点法试剂和动力学试剂。而动力学试剂又可再分为零级动力 学扛和一级动力学法。一终点法试剂终点法，指经过一段时间一般为几分钟的反响，反响进行到完全，使全部底物被测物 转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。如图1。幣个反响到达平

4、衡，由于正向反响的平衡常数很人，町认为所白的被测定物已转变为产 物，反响液的吸光度不再増加或降低，吸光度的增加或降低程度与被测定物的浓度成正 比。终点法对反响条件如酶最、pH、温度小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时 间内反响到达平衡即町，是最理想的反响模型。图(1)属于终点法的试剂主要有：TG. TC, HDL-C LDL-C, UA. Glu, TP. Alb. T-Bil. D-Bil, Cr (氧化酶法)，NHZ C02 , Ca, P, Mg, Cl , apoAl, apoB, Lp(a), C3, C4. PFB(B 因子)，IgG, IgA, IgM 等。(二)动力学法试

5、剂1. 零级动力学法零级动力学法，指反响过程中反响速度维持不变，到达最大，与底物浓度无关，因此, 在整个反响过程中，反响物可以匀速地牛成某个产物，导致被测定溶液在某一波长卜吸光度 均匀地减小或增加，减小或增加的速度(AA/min)与被测物的活性或浓度成正比，主要用 于酶活性的测定。如图(2)o实际上，由于底物浓度不町能足够人，随着反响的进行，底物消耗到一定程度后，反响 速度不再维持不变，同样从启动反响到到达最人速度需要-定时间。因此，零级动力学法是 针对特定时间而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。tl t2 t3tn属于零级动力学法的试剂主要有：ALT, AST, ALP, ACP, r-G

6、T, a -HBDH, LDH, CK, CK-MB, a -AMY, MSO, ADA, ChE , TBA 等。2. 一级动力学法在一定的反响时间内，反响速度与底物浓度的一次方成正比，由于底物在不断的消耗, 因此幣个反响的速度在不断的减少，表现为吸光度的増加或降低速度越来越小，这类反 应到达平衡的时间很长，理论上可以在任总时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反响刚 启动时反响较复杂，杂反响较多，经过一段延迟时间才能进入稳定反响期，必需在特定时间 段内进行监测，备试剂商対这段时间有严格规定。如图3。在一固定时间间隔中，底物浓度的变化量正比于底物的初浓度，这是一级反响的同性。 该段时间内吸光度

7、的增加或降低与被测物的浓度成止比。属于一级动力学法的试剂主要有：Cr 苦味酸法,UREA 紫外监测法三、显色原理显色系统主要有以卜几种：> NAD-NADH 和 NADP-NADPH 系统> p-NP和p-NA系统> H2O2偶联的指示系统>抗原抗体反响指示系统>其它显色反响NAD-NADH 和 NADP-NADPH 系统NADH和NADPH在340nm右特征性吸收峰，而NAD和NADP在340nm无特征性吸收 峰，利用其偶联的脱氢酶工具酶反响，根据340nm吸光度的变化，町以测定物质的浓度或 活性。作为该指示系统常用的工只酶有LDH、MDH、GLDH和G6PDH

8、目前利用此指示系统进行测定的临床工程有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、a -HBDH、Glu、UREA、NH4+、C02 等。二pNP和pNA系统p-NP和p-NA在405nm冇特征性吸收峰，根据405nm吸光度的变化，町以测定物质的 浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床工程有ALP、ACP、r-GT、AMY等。三H2O2偶联的指不系统H2O2在过氧化物酶的作用下，町使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素， 导致某一波长吸光度的增加，肉此可用来测定物质的浓度或活性用于此指示系统的单一色素原冇TMB、ABTS等：成对色素原冇酚和4AA、M盯H和DMA 等。目前利用此指示

9、系统进行测定的临床工程有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu、Cr、UA等。四抗原抗体反响指示系统特异性抗体与抗原待测物质在相应的缓冲坏境下反响生成抗原抗体复合物，形成一定 的浊度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前捉卜，改变程度与抗原浓度成正比。目前利用此指示系统进行测定的临床工程有apoAk apoB、Lp、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP 等。五其它显色反响蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，在一定浓度范闱内颜 色反响强度与蛋白质的浓度成正比。用于TP的测定。漠甲酚绿BCG在非离子去污剂Brij-35的存在卜，町与白蛋白形成紧密结合的绿色复 合

10、物。用于Alb的测定。重氮苯碳酸盐与胆红素生成红紫色偶氮胆红素。用于总胆红素和II接胆红素的测定。甲基麝香草酚兰MTB在碱性条件卜FJ与Ca、Mg形成有色络合物。用于Ca、Mg的测 定。四、性能评价方法一主要性能指标：1. 稳定性：指在规定条件下经过一段时间的保存，刃能到达相应的性能指标，如试剂空白 吸光度、线性范闌、灵敏度等。2. 反响灵敏度：指单位浓度或活性的测定物反响所产生的反响度，反响度越高，灵敏度 越大。3. 精密度：结果间相互符合的一致程度4. 准确度：与参考测定程序结果的一致性5. 线性范围；在规定的重复性和线性偏差下，测得的浓度或活性值与设定的浓度或活性值 Z间的比例关系的范用。6. 基质效应：基质指的是样品中被分析物以外的组分。基质常常对分析物的分析过程有显 著的干扰，并影响分析结果的准确性。例如，溶液的离子强度会对分析物活度系数有影 响，这些影响和干扰被称为基质效应matrixeffect。7. 抗干扰性：8. 其它：试剂/样本比例、反响时间、价格等。二性能评价方法