细胞HE染色的标准操作规程(SOP)

1、细胞HE染色的标准操作规程（SOP）SOP编号：SOP-YK-QT-019-1页数：4制定人： 审核人： 批准人： （签名、日期）（签名、日期）（签名、日期）生效日期： 颁发日期：修订登记:编号页码修订内容修订依据签名/日期审查登记:审查日期签名修订依据签名/日期142536一、目的是细胞水平的实验研究的基础。二、准备1. 器材：手术刀、剪、镊、止血钳、空针、解剖针和不锈钢或泥龙筛网、培养皿、小烧杯、吸管、离心管、三角瓶、棉球、血细胞计数板。2. 消毒：2.1工作台的消毒：操作前用紫外线照射30分或消毒液、酒精棉球擦拭消毒。2.2器材的消毒：对解剖器械和器具高温高压消毒，对取材过程中要用到的培

2、养液、平衡盐溶液以及蛋白酶消化液等用微孔滤膜过滤除菌2.3 操作者的消毒： 按外科手术要求洗手和着装。 肥皂水洗手后，消毒液洛本清擦拭，穿衣，戴帽子口罩和手套。实 验过程中怀疑被污染可用酒精擦拭。3. 取材及制备培养材料的基本步骤：3.1 切取或摘取欲培养的动物器官或大块组织， 在培养液或 平衡盐溶液中洗涤去除血污，剔除附带的脂肪组织、被膜 结蒂组织及坏死组织。必要时可借助显微镜，操作过程中 不断给组织块滴加培养液或平衡盐溶液以保持湿润。3.2 将所取的组织块放在盛有培养液的培养皿中， 解剖显微 镜下将组织切成 1mm3 左右的小块用于植块培养。 3.3分离细胞培养，先在培养液或平衡盐溶液中剪

3、碎组织， 将组织连同培养液用吸管吸至离心管中静置，组织下沉后 吸去上清。 加蛋白酶消化液密封， 置 37 度或其他温度条件 下消化1545分，中途用手摇匀数次。消化结束后吸去含 酶溶液，加蛋白酶抑制剂或含血清的培养液终止蛋白酶活 性。用吸管或空针吸取液体吹打组织，以组织块刚好消散为宜3.4将制备好的细胞悬液用不锈钢网筛过滤， 收集滤液。 如果未滤过的组织过多，可重复上述步骤3）然后再次过滤。3.5离心滤过液，转速为8001000r/min，时间为510min3.6 弃上清，将细胞沉淀用少量细胞培养液重新制备为细 胞悬液。3.7 细胞计数板计数细胞密度。3.8 用培养液调节细胞密度至期望值，准备

4、接种。三、接种与培养操作步骤1. 根据培养的细胞类型和实验的具体要求，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶皿或培养板的各孔内。对于需要特定生长基质的细胞如神经细胞，要事先用生长基质包被培养瓶皿底壁或培养板，然后接种细胞。细胞悬液的量 乘以细胞密度即为接种的细胞总数。2. 加足培养液，加盖封口。3. 培养皿送入恒温箱或 CO2培养箱内，静置。4. 每隔 23 天更换一次培养液，或根据培养液颜色变化决定 更换时间。5.培养结果：一般培养1天以内，细胞即可贴壁生长23天后，细胞恢复增殖活动，细胞数开始增加。随着培养时间的延长，细胞数量越来越多，需要更换培养液的时间也缩短。细胞逐渐长满底壁成为单层细胞。随后细胞间相互接触、联系，产生接触抑制，生长速度减慢。当培养物最后形成一完整的细胞单层时，生长几乎停止，此时需传代培养。四、注意事项1. 为了让细胞尽早贴壁，建议接种后先将培养皿送入培养箱 内 35 小时，待细胞