樟树鸡新城疫病血清学调查报告(1)

1、江西农业工程职业学院调 查 报 告樟树市鸡新城疫病血清学调查报告学 生 郭 何 根 指导教师 朱钱龙(副教授) 专 业 畜牧兽医 层 次 大专 班 级 12牧医1班 学 号 1202132 日 期 2015年4月 江西农业工程职业学院科研处制原 创 性 声 明本人声明所呈交的毕业论文（设计）是我个人进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文（设计）中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，已在毕业论文（设计）中作了明确的说明并表示了谢意。学生签名： 时间： 年 月 日关于论文（设计）使用授权的说明本人完全了解江西农业

2、工程职业学院本、专科毕业论文（设计）工作条例（暂行规定）对：“成绩为优秀毕业论文（设计），江西农业工程职业学院将有权选取部分论文（设计）全文汇编成集或者在网上公开发布。如因著作权发生纠纷，由学生本人负责”完全认可，并同意江西农业工程职业学院可以以不同方式在不同媒体上发表、传播毕业论文（设计）的全部或部分内容。江西农业工程职业有权保留送交论文（设计）的复印件和磁盘，允许论文（设计）被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编论文（设计）。保密的毕业论文（设计）在解密后应遵守此协议学生签名： 时间： 年 月 日密级： 摘 要新城疫（ND）是指由新城疫病毒所引起的一种禽类的急性、高度接

3、触性传染病。樟树市曾经发生过鸡新城疫疫情,给当地养禽业造成了巨大损失。当地兽医部门针对当地鸡新城疫免疫情况进行了详细的调查,并为当地预防该病提出了新的防治措施和免疫程序。2015年,为了验证新的措施和免疫程序被使用后的效果,以及为了对樟树市分散的养殖户所养鸡群的抗体水平有个大概的了解，特此对樟树市的的四个乡镇的鸡血清样本,用血凝(HA)试验与血凝抑制(HI)试验法进行了鸡新城疫抗体检测,并对以上结果进行了分析，结果表明所采取新的综合卫生管理措施是可行的,对当地鸡新城疫的免疫效果是比较好的。但是农村散养户还是不够重视，对本地采取的卫生管理措施执行力度不够，抱着侥幸心理。但是，鸡新城疫病的危害，依

4、然不可忽视。本次实验调查采用的是兽医实验室常用的方法，血凝实验(HA)和血凝抑制实验(HI)，新城疫抗体水平检测使用该方法特异性好，操作方便，可同时进行大量的样品检测，对实验环境要求不高等特点。关键词：樟树市 鸡新城疫 抗体水平目 录（要有页码等相关格式）前言1材料和方法1.1 被检血清1.2检测试剂及1.3检测方法2结果2.1不同鸡场新城疫血清阳性率2.2.不同日龄鸡群的抗体水平3讨论与分析4建议4.1把好免疫关4.2把好疫苗质量和操作技术操作关4.3 把好鸡种关附录参考文献致谢调查报告成绩评定表前言鸡新城疫（ND）俗称鸡瘟，是由鸡新城疫病毒引起的鸡的一种高度接触性、急性、烈性传染病。常呈现

5、败血症经过，主要特征是呼吸困难，下痢，神经机能紊乱，黏膜和浆膜出血。各种鸡和各种年龄的鸡都能感染，幼鸡和中鸡更易感染，两年以上的老鸡易感性降低。本病的主要传染源是病鸡和带毒鸡，其分泌物，粪便，以及被污染的饲料、饮水，非易感的野禽、外寄生虫、人畜等均可传播本病，传播途径主要是消化道和呼吸道，也可经损伤的皮肤、黏膜侵入体内。一年四季均可发生。在非免疫区或免疫低下的鸡群，一旦有速发型毒株侵入，可迅速传播,呈毁灭性流行。  鸡新城疫，发病率和死亡率可达90%以上。在大中型养鸡场，鸡群有一定的抵抗力的情况下，鸡新城疫主要是以一种非典型的形式出现，应引起重视。樟树市是生鸡消费比较大的一个县市，樟

6、树市本地及周边地区从事生鸡饲养的主要就是一些散户，没有专业化规模化的大型养殖场。由于樟树市供不应求，每年都从广东广西输入大量的肉鸡。再加上散户过多，管理又不规范，技术操作也不够到位，给散户带来的疾病压力更大！甚至有些农户从活禽市场购买活禽回家饲养。这就无意之间把外源性新城疫病毒带入，这给樟树市养殖户做新城疫防控带来一定压力！本调查报告就是对樟树市四个乡镇的一些散户，通过血清学实验检测鸡群抗体水平的高低！血凝实验(HA)和血凝抑制实验(HI)是兽医实验室常用的方法之一，新城疫抗体水平检测使用该方法特异性好，操作方便，可同时进行大量的样品检测，对实验环境要求不高等特点。但是，HA与HI实验也受很多

7、因素的影响，由于影响因素复杂，不可能完全排除，但是，本次实验结果数据都是每个样品进行反复多次实验得出的数据。本次调查结果仅对调查鸡场及所在地区负责，也可作为樟树市新城疫疾病的预防和控制的参考资料。因材料和场地的局限性，本次调查采集样品是分点集中采集，分别在吴城乡，刘公庙镇，经楼镇，观上镇的小养殖户场里或农户家里采集。可能病原存在差异性，也可能在一定程度上影响实验结果。1 材料和方法1.1 被检血清从樟树市4个乡镇，分别在吴城乡，刘公庙镇，经楼镇，观上镇的小养殖户场里或农户家里20个养鸡场（户）共计150只鸡进行血液采集，其中快大肉鸡30只，圈养土鸡30只，林下放养土鸡60只，农户散养土鸡30只

8、。采集后的血液样品静置凝固后自然析出血清，析出血清少的，用离心机进行离心后把血清离心出来。1.2检测材料标准抗原(HA抗原)、1%RBC悬液、生理盐水、96孔V型板、微量移液器1.3检测方法 本次实验方法是使用已知抗原检测未知抗体，通过HA实验和HI实验测出被检血清中的抗体滴度。1.3.1HA实验先用HA实验，测出标准抗原的血凝价单位。25ul生理盐水标准抗原25ul25ul生理盐水1%RBC悬液25ul震荡后静置25分钟等待结果表一:血凝实验孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 病毒稀 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:5

9、12 1:1024 1:2048 红细胞对照 释度生理盐水 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25病毒 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 -弃251%红细胞 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 恒温箱37 25分钟判定结果 + + - -1.3.2配制4HAU抗原通过HA实验测定，标准抗原为8log2，那么配制4HAU抗原需要稀释倍数为（8-2）2倍。1.3.3 HI实验接着HA实验，继续做下一检测步骤。生理盐水25ul(24孔50ul)第一孔加入25ul, 反复吸取68次，取25ul加入第二孔

10、,第二孔反复吸取68次，取25ul加入第三孔，如此依次至22孔，22孔取25ul丢弃。加入4HAU抗原25ul，从第一孔加至23孔。震荡1分钟，静置培养20分钟。加入RBC悬液25ul，加至24孔，震荡20S，静置培养等待结果。表二：HI实验孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12待检血清 1:2 1:4 1：8 1:16 1:32 1：64 1:128 1:256 1:512 1:1024 病毒对照 盐水对照稀释度生理盐水 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 50 待检血清 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 - - 弃

11、去254单位病毒 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 -震荡一分钟，放入37恒温箱培养反应15分钟1%红细胞 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25震荡30秒，放入37恒温箱作用25分钟观察结果判定结果2结果2.1不同鸡场新城疫血清阳性率 通过HA和HI实验对不同鸡场采集的血清进行检测，结果表明，被检测的20个养鸡场（户）中，只有一户呈现阴性（抗体滴度2log2为阴性），其余19户全部呈阳性，鸡场阳性率为95%，不同的养鸡场（户）鸡只的血清新城疫阳性率为0100%。在被检测的150个血清样品中，共检出阳性数为139份，阳性率为92.

12、67%，其中快大肉鸡阳性率100%，圈养土鸡100%，林下放养土鸡阳性率100%，农户散养土鸡阳性率63.3%。见下表三 表三：样品抗体分布情况统计表养殖类型项目快大肉鸡圈养土鸡林下放养土鸡农户散养土鸡阳性数30306019阴性数00011阳性百分比100%100%100%63.3%2.2.不同日龄鸡群的抗体水平 在被检测的150个血清样品中，共检出阳性139份。抗体水平滴度高的达到12log2，低的为0 ，大多数都在610log2之间。02log2占7.3%，35log2占10%，610log2占77.3% ,11log2以上的占5.4%。见下表四 表四：样品抗体滴度统计表抗体滴度项目鸡群类

13、型02log235log2610log210log2以上此范围数/样品数此范围数/样品数此范围数/样品数此范围数/样品数快大肉鸡0/300/3030/300/30圈养土鸡0/300/3022/308/30林下放养土鸡0/6011/6049/600/60农户散养土鸡11/304/3015/300/303讨论与分析分析检测结果，发现这些鸡场鸡新城疫抗体水平不整齐，特别是农户散养土鸡，抗体滴度差距大，抗体保护力高低不等。圈养土鸡抗体滴度明显过高，经询问养户，得知该鸡群采取的免疫是饮水免疫（系）和颈部皮下（新城疫油乳灭火苗Lasota株）注射同时做，所以抗体水平处于高位水平也属正常，但是同群鸡只之间存

14、在个体差异，可能存在野毒感染或者免疫过程存在缺陷。林下放养土鸡，存在抗体水平高低不齐的状态，近20%的鸡只抗体水平属于偏低，不具有足够的保护力。快大肉鸡由于其养殖周期比较短，抗体水平基本处于中等水平，但是其保护力还是存在缺陷。经养户同意，随机解剖两只发病鸡只，其临床表现为精神呆滞，食欲较差，轻微咳嗽，拉黄绿色粪便。解剖病变为肝脏肿大，气囊轻微浑浊，表现为气囊炎症状，腹腔有纤维样分泌物，盲肠扁桃体肿胀出血，气管粘膜充血，有粘液性分泌物！初步诊断为鸡新城疫感染继发大肠杆菌病。3.1注射的疫苗没有达到理想的保护效果，存在发生鸡新城疫的隐患。分析原因如下：3.1.1疫苗来源 在免疫过程中，疫苗质量是免

15、疫成败的关键。伪劣疫苗不但达不到免疫力效果，反而影响免疫程序，甚至导致机体发病，因此要选用正规厂家和正规渠道购买的疫苗。3.1.2在疫苗保存方面冻干苗要求在-15以下冷冻保存，温度越低则保存时间越长，而油乳剂疫苗则需要在2-8保存。多数养殖户没有有专业的恒温冰箱，只是用家庭用冰箱进行疫苗保存。忽视了疫苗保存温度与免疫效果之间的关系，尤其是稀释后的疫苗在常温下放置时间越长，免疫所产生的效价也就降低，免疫效果也越差。3.1.3运输原因疫苗在运输过程中，运输时间越长、周转次数越多，疫苗质量越难以保障。在运输中，应尽量避免高温、阳光直射，应用专用冷藏车运输，运输过程中减少疫苗周转次数。在樟树市，由于大

16、型规模化的养鸡场少，所以销售鸡新城疫疫苗的少之又少，养户买疫苗必须从大老远进入市区购买，对疫苗的保存仅靠几块碎冰，特别是夏天，若不及时使用，对疫苗的影响很大。3.1.4操作原因在免疫过程中，质量是免疫成败的关键，使用了伪劣的疫苗不但起不到免疫力效果，反而影响免疫程序，因此要选用正规厂家和正规渠道购买的，再有正确处理好剩余疫苗及容器，以防污染环境造成免疫失败。另外，进行饮水免疫要注意水的质量，避免使用深井水。3.1.5免疫方式在免疫过程中，免疫注射的方式方法也是免疫成功的关键。此外，防疫苗污染造成免疫失败。3.1.6野毒环境中存在野毒，鸡群存在野毒感染。免疫前感染造成免疫失败，免疫后感染造成抗体

17、水平偏高。4建议4.1把好免疫关 从实验结果来看，樟树市多地存在新城疫野毒，不管是养殖土鸡还是快大的肉鸡，都应做好免疫。免疫要到位，不能听闻疫情一来就免疫，没疫情就抱着侥幸的心理不进行免疫。4.2把好疫苗质量和技术操作关做好疫苗运输工作，保证其生物学活性。运输过程中用冰块包装以保障疫苗储运的环境，尽量做到使稀释后的疫苗在气温不高于15时，6h以内用完，在15-27时在3h内用完。进行颈部皮下接种时，坚持一禽一针，避免交叉感染，注射针头长度要适宜，注射方法在妥当，以利于刺激机体。禁止使用过期、失效、无标签、稀释后不溶解或保藏时间过长的疫苗。在进行饮水免疫时，不用深井水，使用摊凉的开水或使用纯净水

18、！免疫前记得停水，秋冬季节24小时，春夏季节12小时，遇上酷暑时，可不停水。进行鸡新城疫免疫抗体水平监测，可以掌握鸡群的抗体水平和注射鸡新城疫疫苗后的免疫效果，从而估测鸡群免疫注射日期范围，进一步完善免疫程序。4.3 把好鸡苗购买关引进鸡苗时注意先了解种源地是否发生疫情,以及途经地的疫情情况。避免从活禽市场买活鸡回家再行饲养，以免带入病原！参考文献1陈怀涛.兽医病理学.北京：中国农民行业出版社.20052汪诚天.兽医实验检验手册.上海：上海科学技术出版社.19843吴延功，丁国义，宋翠萍等.新城疫的流行特点与防控措施.中国家禽，2012,34（5）：574乐涛等.动物微生物.北京：中国农业大学

19、出版社.20075许家玉，童飞等.血凝抑制实验技术要点分析.中国家禽，2012，34（10）:55566苏战强，张健平等.鸡新城疫病毒的分离与初步鉴定.中国家禽，2012,34（21）:56577郑杰，孙丰廷等.几株鸡新城疫病毒的分离鉴定及其基因型分析.中国畜牧兽医，2012,39（10）：76808陈鹏举.鸡病诊治原色图谱.郑州：河南科学技术出版社.20109辛朝安.禽病学.北京：中国农业出版社.200610甘孟侯.中国禽病学.北京：中国农业出版社.2003致 谢在调查报告完成之际，我要特别感谢我的指导老师朱钱龙老师的热情关怀和悉心指导。在我调查和实验室检验的过程中，朱钱龙老师倾注了大量的心血和汗水，无论是在调查