菊花组织培养

1、菊花的组织培养植物的组织培养植物的组织培养是指在人工培养基上，是指在人工培养基上，离离体培养体培养植物的器官、组织、细胞，植物的器官、组织、细胞，并使其生长、增殖、分化以及再并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术生植株的技术。 组织培养组织培养：思考思考( (一一).).植物组织培养的基本过程植物组织培养的基本过程1.1.植物体在个体发育过程中将形植物体在个体发育过程中将形成不同的细胞和组织原因是？成不同的细胞和组织原因是？细胞分化细胞分化2.2.植物组织培养的原理是什么？植物组织培养的原理是什么？植物细胞具有全能性植物细胞具有全能性概念：概念： 在在个体发育个体发育中，中，相同细胞相同细胞

2、的后代在的后代在形态、结构、生理功能上发生形态、结构、生理功能上发生稳定稳定性差异性差异的过程的过程 . .特点：特点：原因原因：持久性、稳定性、全能性持久性、稳定性、全能性基因在特定的时间和空间条件下的选基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果择性表达的结果. .2.2.细胞的全能性细胞的全能性定义：定义： 生物体的细胞具有使后代细胞形成生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性完整个体的潜能的特性. .原理：原理： 生物体的生物体的每一个细胞都包含有该物种每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质所特有的全套遗传物质（全套基因）（全套基因）10 个个14200多种多种生物体

3、的每一个体细胞都含有该物种所特有的全生物体的每一个体细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质（全套基因）套遗传物质（全套基因）基因的选择性表达基因的选择性表达植物组织培养的基本过程是怎样的？植物组织培养的基本过程是怎样的？离体的植物组织或细胞 (外植体)脱分化脱分化愈伤组织再分化再分化胚状体(根、芽)植物体外植体：外植体：从从活植物体活植物体上切下进行培养的上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官那部分细胞、组织或器官. .脱分化：脱分化：由由高度分化高度分化的植物器官、组织或细胞产生的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织愈伤组织的过程，又称去分化的过程，又称去分化。 愈伤组织：愈伤组织：离体的植物器官

4、、组织或细胞通过离体的植物器官、组织或细胞通过脱脱分化形成分化形成的的疏松而无规则疏松而无规则的，的，高度液泡化高度液泡化的呈的呈无定形无定形状态状态的的, ,未分化的薄壁细胞未分化的薄壁细胞2-3周，愈伤组织开始形成。周，愈伤组织开始形成。 再分化：再分化：愈伤组织愈伤组织继续培养，继续培养，重新分化成根和芽重新分化成根和芽等器官的过程。等器官的过程。3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。周之后，诱导出的新叶片和芽。( (二二) )影响影响植物组织培养的因素植物组织培养的因素1、外植体的选取、外植体的选取不同植物的组织培养难度不同植物的组织培养难度 _ 同一种植物的不同组织培养难度同一种植物的不

5、同组织培养难度_差别很大差别很大不同不同如菊花的组织培养，一般选择如菊花的组织培养，一般选择_植株植株茎茎_。未开花未开花上部新萌生的侧枝上部新萌生的侧枝对于同一种植物材料，材料的对于同一种植物材料，材料的_、 _等也会影响实验结果。等也会影响实验结果。年龄年龄保存时间的长短保存时间的长短阅读教材，思考影响植物组织培养阅读教材，思考影响植物组织培养的因素有哪些？的因素有哪些？2、培养基的配制、培养基的配制常用的一种培养基为常用的一种培养基为_其其主要成分包括：主要成分包括： ：C C、H H、O O、N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S S ：B B、MnMn、CuCu、ZnZn、F

6、eFe、MoMo、I I、CoCo _ _ ：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等等 _ _ ：生长素、细胞分裂素、赤霉素等：生长素、细胞分裂素、赤霉素等MS培养基培养基大量元素大量元素微量元素微量元素有机物有机物植物激素植物激素使用顺序使用顺序实验结果实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于有利于_，但，但_先使用细胞分裂素，后使用生长素先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞既分裂又分化细胞既分裂又分化同时使用同时使用_提高提高3、不同植物激素使用顺序和使用量、不同植物激素使用顺序和使用量不同植物激素使用顺序不同植物激素使用顺序细

7、胞分裂细胞分裂细胞不分化细胞不分化分化频率分化频率不同植物激素使用量不同植物激素使用量生长素用量比细胞分裂素用量生长素用量比细胞分裂素用量植物细胞的发育方向植物细胞的发育方向比值高比值高时时有利于根有利于根的分化、抑制芽的形成的分化、抑制芽的形成比值低比值低时时有利于芽有利于芽的分化、抑制根的形成的分化、抑制根的形成比值适中比值适中时时促进促进愈伤组织愈伤组织的生长的生长4、环境因素：、环境因素：不同的植物对各种条件的要求往往不同的植物对各种条件的要求往往 不同不同 。 如进行菊花的组织培养，一般将如进行菊花的组织培养，一般将pHpH控制在控制在_左右；左右；温度控制在温度控制在_ ；并且每天

8、用日光灯照射并且每天用日光灯照射_ 。 5.8181822 22 12h12h5、消毒、消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境。在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境。1、实验操作流程、实验操作流程制备制备MS固固体培养基体培养基外植体外植体消毒消毒接接 种种培培 养养栽栽 培培移移 栽栽二、实验操作二、实验操作2、实验具体操作、实验具体操作（1）.制备制备MS固体培养基固体培养基实验室一般使用实验室一般使用_保存的配制好的培养基母液保存的配制好的培养基母液来制备来制备配制各种母液配制各种母液配制母液时，大量元素浓缩配制母液时，大量元素浓缩_ _ ，微量元，微量元素浓缩素浓缩_ _ 。

9、常温保存。激素类、维生素。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照类以及用量比较小的有机物可以按照_的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。1mg/ml410倍倍100倍倍配制培养基。配制培养基。按配方称取琼脂、按配方称取琼脂、蔗糖蔗糖以及各种母液，配制以及各种母液，配制MS培培养基。养基。植物激素植物激素在菊花组织培养中，可以不添加在菊花组织培养中，可以不添加_ ，原因是菊花茎段组织培养原因是菊花茎段组织培养_ 。比较容易比较容易灭菌灭菌将分装好的培养基

10、连同其他器械一起进行将分装好的培养基连同其他器械一起进行_。高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 此时的组织或细胞为离体的，即此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液体有机物营养细胞所生活的环境为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物体的环境，而不是能体现其整个植物体的光能自养。光能自养。 高等植物是光能自养型生物，为高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？供有机物培养基？思思 考考（2）.外植体消毒外植体消毒 选取菊花茎段时，要取选取菊花茎段时，要取 _。流水流水冲洗冲洗酒精酒精无菌水无菌水氯化汞氯化汞无菌水无菌水消毒流程：

11、消毒流程：浓度浓度_摇动摇动_次次时间时间_s浓度浓度_时间时间_min至少清洗至少清洗_次次漂净漂净_生长旺盛的嫩枝生长旺盛的嫩枝70%23670.1%123消毒水消毒水 外植体的生理状态是成功进行组织培养的重外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。诱导脱分化和再分化。思思 考考 在选取菊花茎段的时候，为什么要在选取菊花茎段的时候，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？选取生长旺盛的嫩枝？ 不是。对外植体进行表面消毒时，不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植既要考虑到消毒效果，

12、又要考虑到植物的耐受能力。物的耐受能力。 在外植体消毒过程中，是不是强在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？度越大越好，为什么？ 思思 考考（3）.接种接种 前期准备：用前期准备：用_消毒工作台，点燃酒精灯。所有消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用械使用前后都要用_灭菌。灭菌。接种操作：插入外植体时接种操作：插入外植体时_端朝上，端朝上，每个锥形瓶接种每个锥形瓶接种_个外植体。个外植体。70的酒精的酒精火焰灼烧火焰灼烧形态学上形态学上68（4）.培养培养 接种后的锥形瓶最好放在接种后的锥形瓶最好放在_中中培养。培养期间定

13、期进行培养。培养期间定期进行_，温度控制，温度控制在在_，并且每天用日光灯光照，并且每天用日光灯光照_h h。无菌箱无菌箱182212消毒消毒在培养过程中，是脱分化、再分化的在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程演变过程培养过程中为什么需要进行光照？培养过程中为什么需要进行光照？思思 考考（5）.移栽移栽 移栽生根的试管苗之前，应移栽生根的试管苗之前，应先打开封口膜，在培养间生先打开封口膜，在培养间生长几日；然后用流水清洗长几日；然后用流水清洗_，将幼苗移植，将幼苗

14、移植到到_等环境中生活一段时间，进等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。行壮苗。最后进行露天栽培。根部培养基根部培养基消过毒的蛭石或珍珠岩消过毒的蛭石或珍珠岩（6 6）栽培）栽培幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花时浇水、施肥，直至开花. . 植物组织培养所利用的植物材料体积小、植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养生长，如

15、一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。思思 考考 在植物组织培养的过程中，为什么在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？无菌操作？1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一

16、段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？思思 考考2. 是否完成了对植物组织的脱分化和再分化是否完成了对植物组织的脱分化和再分化3. 是否进行了统计、对照与记录是否进行了统计、对照与记录4. 生根苗的移栽是否合格生根苗的移栽是否合格1. 外植体在培养过程中可能会被污染，外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？你认为造成污染的原因有哪些？培养基灭菌不彻底；外植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻底；外植体消毒不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。三、结果分析与评价三、结果分析与评价一般说来，容易进行一般说来，容易进行_繁殖的植物，繁殖的植物，也容易进行组织培养。也容易进行组织培养。 如芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季等。如芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季等。 无性无性四、课题延伸四、课题延伸例例1、 植