[临床医学]重组乙肝疫苗的研究2

1、重 组 乙 肝 疫 苗 的 研 究主讲人：赵芮彤5乙肝疫苗的发展1346乙肝疫苗的种类及现状 乙肝疫苗的工艺路线参与竞争的主要公司存在的问题及解决办法2乙肝疫苗的背景和研究历史 目 录乙肝的危害乙肝的危害 据统计，全球约全球约2020亿人曾感染过乙肝病毒，每年约有亿人曾感染过乙肝病毒，每年约有100100万人死于乙肝病毒感染所致肝脏衰竭、肝硬化和原发性万人死于乙肝病毒感染所致肝脏衰竭、肝硬化和原发性肝癌（肝癌（HCCHCC），全世界无症状乙肝病毒携带者超过亿,我国约占亿。目前我国有乙肝患者我国有乙肝患者30003000万万。 乙肝的特点为起病较缓，以亚临床型及慢性型较常见。本病主要通过血液血液

2、、母婴母婴和性接触性接触进行传播。什么是乙肝什么是乙肝呢呢？乙肝：是一种由乙型乙肝：是一种由乙型肝炎病毒（肝炎病毒（HBVHBV）感）感染机体后所引起的疾染机体后所引起的疾病，分急性和慢性两病，分急性和慢性两种。种。 HBVHBV不仅能引起急性肺炎、慢性不仅能引起急性肺炎、慢性肺炎，更为严重的是它与肝硬化、肺炎，更为严重的是它与肝硬化、肝癌的发生有密切关系。肝癌的发生有密切关系。临床表现为临床表现为食欲减退、恶心、厌油、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛食欲减退、恶心、厌油、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等等。HBV感染细胞的过程感染细胞的过程乙肝的防治乙肝的防治 乙肝的治疗乙肝的治疗 最

3、大限度地控制最大限度地控制HBVHBV，减轻肝细胞炎性坏死及肝纤维化，延缓和减少肝，减轻肝细胞炎性坏死及肝纤维化，延缓和减少肝脏失代偿、肝硬化、脏失代偿、肝硬化、HCCHCC及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。存活时间。 乙肝的预防乙肝的预防 接种接种 乙肝疫苗乙肝疫苗 是预防乙肝病毒感染最有效的方法。是预防乙肝病毒感染最有效的方法。 乙肝疫苗的研究历史血源性疫苗血源性疫苗此疫苗是用无症状的此疫苗是用无症状的HBsAg携带者的血液携带者的血液制成制成并提纯，然后采并提纯，然后采用胃酶、尿素、甲醛用胃酶、尿素、甲醛三步化学灭活制备三步化学灭活

4、制备而成而成重组乙肝重组乙肝疫苗疫苗由重组酵母或重组由重组酵母或重组CHO工程细胞表达的乙型肝炎工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成活及加入佐剂吸附制成的疫苗。的疫苗。联合疫苗联合疫苗治疗性疫苗治疗性疫苗 新型乙肝疫苗疫苗的发新型乙肝疫苗疫苗的发展方向展方向 乙肝疫苗的种类和现状重组乙肝疫苗酵母表达疫苗中国仓鼠卵巢细胞（CHO）表达疫苗 优点酵母为低等真核微生物，酵母为低等真核微生物，易于在营养成份简单的培易于在营养成份简单的培养基中高密中发酵培养，养基中高密中发酵培养，利用工业化生产，表达量利用工业化生产，表达量高，目前世界上大规模生高，目前世界

5、上大规模生产和上市的疫苗大多数由产和上市的疫苗大多数由该表达系统制备而成。该表达系统制备而成。重组酵母乙肝疫苗重组酵母乙肝疫苗重组酵母乙肝疫苗 缺点酵母不能模拟蛋白在人体酵母不能模拟蛋白在人体肝细胞中的翻译后修饰、肝细胞中的翻译后修饰、蛋白折叠、大分子组装以蛋白折叠、大分子组装以及糖基化。及糖基化。 定义重重组组酵母乙肝疫苗酵母乙肝疫苗是借助是借助基因工程技术，使酵母细基因工程技术，使酵母细胞表达重组的乙型肝炎病胞表达重组的乙型肝炎病毒表面抗原毒表面抗原(HbsAg)(HbsAg)，经，经纯化并加佐剂吸附而制成纯化并加佐剂吸附而制成的一种预防乙型肝炎的疫的一种预防乙型肝炎的疫苗苗 。重组酵母乙

6、肝疫苗重组酵母乙肝疫苗重组CHO表达乙肝疫苗 定义重组（重组（CHOCHO）乙肝疫苗）乙肝疫苗是是采用哺乳动物细胞表达系采用哺乳动物细胞表达系统建统建SFDASFDA的技术路线，的技术路线，2020世纪世纪8080年代国内外学者对年代国内外学者对其展开了研究，采用中国其展开了研究，采用中国仓鼠卵巢细胞，用基因工仓鼠卵巢细胞，用基因工程技术将乙型肝炎表面抗程技术将乙型肝炎表面抗原基因片段重组到中国仓原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞鼠卵巢细胞(CHO)(CHO)内，通内，通过一定工艺制成。过一定工艺制成。 优点CHOCHO细胞表达的重组细胞表达的重组HepBHepB是高等真核细胞表达产是高等真核细

7、胞表达产物，其天然结构较低等物，其天然结构较低等的真核细胞酵母表达的的真核细胞酵母表达的HBsAgHBsAg蛋白更适合人体吸蛋白更适合人体吸收，生产过程中不同于酵收，生产过程中不同于酵母使用硫氰酸盐处理，安母使用硫氰酸盐处理，安全性好。全性好。重组重组CHO表达乙肝疫苗表达乙肝疫苗重组重组CHO表达乙肝疫苗表达乙肝疫苗重组乙肝疫苗的工艺路线 重组酵母乙肝疫苗的工艺路线重组酵母乙肝疫苗的工艺路线原始菌种原始菌种生产菌种生产菌种一代扩增一代扩增逐级扩增逐级扩增接种接种发酵罐发酵罐收集细胞收集细胞三级发酵三级发酵菌种制备以及发酵过程分离纯化过程 重组重组CHOCHO乙肝疫苗的工艺路线乙肝疫苗的工艺路

8、线注：注：选取的细胞株是国家批准的重组选取的细胞株是国家批准的重组CHOCHO乙型肝炎疫苗的细胞株乙型肝炎疫苗的细胞株取细胞株取细胞株收集培养液收集培养液硫酸铵盐析硫酸铵盐析密度梯度离心密度梯度离心色谱纯化色谱纯化浓缩浓缩除菌过滤除菌过滤甲醛灭活甲醛灭活AL(OH)3吸附吸附分装分装 国 际全球约有全球约有20家企业家企业被世界卫生组织认被世界卫生组织认定为疫苗生商，然定为疫苗生商，然而疫苗市场实际上而疫苗市场实际上被被4家跨国企业所垄家跨国企业所垄断，这断，这4家公司掌握家公司掌握着全球约着全球约3/4的疫苗的疫苗市场。市场。参与竞争的主要公司 葛兰素史克的产品葛兰素史克公司葛兰素史克公司

9、Engerix-BEngerix-B Engerix-B 由由BiogenBiogen公司与英公司与英国的国的EdinburghEdinburgh大学共同研发酵大学共同研发酵母菌制造乙肝疫苗技术，并授母菌制造乙肝疫苗技术，并授权葛兰素史克公司销售其产品。权葛兰素史克公司销售其产品。 FendrixFendrixFendrix是葛兰素史克公司集乙是葛兰素史克公司集乙肝疫苗肝疫苗Engerix-B Engerix-B 超过超过1515年的年的经验的基础上研制而成的。本经验的基础上研制而成的。本品的几何平均滴度品的几何平均滴度(GMTs)(GMTs)更高，更高，抗体存在的时间更长。抗体存在的时间更长

10、。 。 塞洛菲巴斯德的产品HBvaxPROProcomvax赛诺菲巴斯德公司赛诺菲巴斯德公司默克公司默克公司默克公司Recombivax 由默克公司销售的乙肝疫苗技术来自由默克公司销售的乙肝疫苗技术来自Chiron公司，它是在美国推一能与公司，它是在美国推一能与EngerixB竞争的产品。竞争的产品。 1992年的年的Recombivax销售额为销售额为09亿亿美元，美元，1996年为年为44亿美元，其中重组酵亿美元，其中重组酵母菌乙肝疫苗和血源乙肝疫苗各占母菌乙肝疫苗和血源乙肝疫苗各占50，1999年为亿美元；在世界畅销的处方药中年为亿美元；在世界畅销的处方药中排字第排字第147位，销售额比

11、位，销售额比1998年增长年增长69。 Bio-Hep-BHepreeombeGen Hevac B法国巴斯德研究所法国巴斯德研究所以色列以色列 BTG公司公司瑞士瑞士其它竞争产品 重组乙型肝炎疫苗（酵母） 国内生产重组酵母乙肝疫苗技术主要由国内生产重组酵母乙肝疫苗技术主要由默克公司默克公司转让，具有工艺成熟、转让，具有工艺成熟、成本低、产量高的特点。成本低、产量高的特点。国内公司情况国内公司情况 主要制品是重组主要制品是重组乙肝疫苗（酿酒乙肝疫苗（酿酒酵母）的氢氧化酵母）的氢氧化铝混悬液注射剂铝混悬液注射剂主要制品是重组主要制品是重组乙肝疫苗（酿酒乙肝疫苗（酿酒酵母）的氢氧化酵母）的氢氧化铝

12、混悬液注射剂铝混悬液注射剂主要制品是主要制品是重组（汉逊酵母）重组（汉逊酵母）乙肝疫苗乙肝疫苗北京天坛生物深圳康泰生物大连高新生物主要制品是主要制品是重组（汉逊酵母）重组（汉逊酵母）乙肝疫苗乙肝疫苗华兰生物 北 京 天 坛 生 物 北京天坛生物是中国生物制品总公司所属六北京天坛生物是中国生物制品总公司所属六大生物制品企业之一，是深沪两市惟一主营生物制品大生物制品企业之一，是深沪两市惟一主营生物制品的上市公司，天坛生物开发了多种疫苗，企业的上市公司，天坛生物开发了多种疫苗，企业以上的收入和利润来源于疫苗制品。其主要品种是脊以上的收入和利润来源于疫苗制品。其主要品种是脊髓灰质炎疫苗、乙肝疫苗、乙脑

13、疫苗、流脑疫苗和风髓灰质炎疫苗、乙肝疫苗、乙脑疫苗、流脑疫苗和风疹疫苗，近年来，疹疫苗，近年来，乙肝疫苗占据了主导地位乙肝疫苗占据了主导地位。简介简介北京天坛生物在全国北京天坛生物在全国医药工业利润总额百医药工业利润总额百强中排名第位。强中排名第位。2002年年2003年年2004年年北京天坛生物乙肝疫苗的销售收入为亿元，乙肝疫苗的销售收入为亿元，占实现业务收入的，单品种在北占实现业务收入的，单品种在北京医药工业销售排序中居第位，由于京医药工业销售排序中居第位，由于疫苗产品整体毛利率平均达疫苗产品整体毛利率平均达，重组（酵母）乙肝重组（酵母）乙肝疫苗收入已占主营疫苗收入已占主营业务的，在业务的

14、，在全国乙肝疫苗份额全国乙肝疫苗份额中约占强。中约占强。重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞） 此种疫苗是此种疫苗是19911991年中国预防医学科学院病毒学研究所联年中国预防医学科学院病毒学研究所联合长春生物技术研究所等单位研制成功哺乳动物（合长春生物技术研究所等单位研制成功哺乳动物（CHOCHO）细胞表）细胞表达的基因工程疫苗，已有达的基因工程疫苗，已有长春生物技术研究所长春生物技术研究所、华北制药集团华北制药集团、北京华尔盾公司北京华尔盾公司、兰州生物技术研究所兰州生物技术研究所、武汉生物技术研究所武汉生物技术研究所和和成都生物技术研究成都生物技术研究所获得生产批文，这所获得生产批文，这6 6家

15、合计年产量估计约家合计年产量估计约为为 200200600600万支。从目前国内从事生产万支。从目前国内从事生产CHOCHO细胞乙肝疫苗的细胞乙肝疫苗的6 6家家生产单位中。生产单位中。华北制药华北制药的生产技术水平处于绝对领先地位。该企业的生产技术水平处于绝对领先地位。该企业 乙肝疫苗年产量居国内乙肝疫苗年产量居国内第第3位位。 现有乙肝疫苗存在的问题及优化改进的研究( (一一). ). 现有疫苗剂量和免疫策略函待改进现有疫苗剂量和免疫策略函待改进( (二二). ). 临床试验不规范临床试验不规范( (三三). ). 首针及时率和全程覆盖率急待提高首针及时率和全程覆盖率急待提高( (四四).

16、 ). 疫苗企业注册标准和说明书存在的问题疫苗企业注册标准和说明书存在的问题( (五五). ). 不良反应不良反应(SAE)(SAE)无有效的报告、无有效的报告、 鉴别、处理以及反馈制度鉴别、处理以及反馈制度( (六六). ). 加强科研加强科研图图. .成人成人5g/5g/剂国产酵母疫苗免疫效果剂国产酵母疫苗免疫效果( (检定所检定所) ) 应增加生产高剂量酵母乙肝疫苗以满足成人需要应增加生产高剂量酵母乙肝疫苗以满足成人需要成人乙肝疫苗免疫效果成人乙肝疫苗免疫效果 应加强计划免疫外人群的疫苗接种应加强计划免疫外人群的疫苗接种1 现有疫苗剂量和免疫策略函待改进现有疫苗剂量和免疫策略函待改进 成

17、人与儿童乙肝疫苗免疫持久性比较成人与儿童乙肝疫苗免疫持久性比较中国公共卫生杂志中国公共卫生杂志 乙肝疫苗免疫后抗乙肝疫苗免疫后抗HBs阳转率与年龄的关系阳转率与年龄的关系 免后免后 儿童儿童 成人成人 时间时间(月月) 阳转率（阳转率（%） 阳转率（阳转率（%） 12 24 36 成人乙肝疫苗免疫效果成人乙肝疫苗免疫效果中华预防医学杂志乙肝疫苗免疫后抗乙肝疫苗免疫后抗HBs阳转率与年龄的关系阳转率与年龄的关系 免疫后 35岁 35岁 时间（月）人数 阳转数（%） 人数 阳转数（%） 12 62 52 54 28 51.9* 24 54 21 53 14 36 50 14 46 6 2 临床试验

18、不规范临床试验不规范解决方法：解决方法：疫苗临床试验指导原则疫苗临床试验指导原则 2004年年10月执行月执行1.试验设计2.试剂质量水平低,统计分析方法不规范3.操作不规范4.未进行真正意义上的IV期临床试验3 计免疫苗首针及时率和全程覆盖率急待提高计免疫苗首针及时率和全程覆盖率急待提高 管理、宣传、组织 新型减少针刺、缓释、控释疫苗及联合疫苗的研发和推广4 疫苗企业注册标准和说明书存在的问题疫苗企业注册标准和说明书存在的问题 目前的企业标准以国家标准为最高标准 使用说明书缺乏信息5 不良反应管理制度亟待完善不良反应管理制度亟待完善加强科研函待深入研究病毒与函待深入研究病毒与宿主的相互作用机

19、制宿主的相互作用机制 病毒感染后的自病毒感染后的自然史然史 病毒变异和基因型与病毒变异和基因型与临床转归和疫苗效果临床转归和疫苗效果的关系的关系 影响现有乙肝疫苗效果因素分析影响现有乙肝疫苗效果因素分析; ;病毒体液免疫病毒体液免疫; ;细胞免疫位点变异的影响细胞免疫位点变异的影响; ;无应答人群的遗传背景研究无应答人群的遗传背景研究 研究新型佐剂和控释研究新型佐剂和控释系统，开发研制新型系统，开发研制新型减少针次的预防性疫减少针次的预防性疫苗和治疗性疫苗苗和治疗性疫苗 6 加强科研加强科研乙肝疫苗的发展传统疫苗传统疫苗受制作工艺的限制，其保存、使用和受制作工艺的限制，其保存、使用和接种副反应等方面都容易出现一些问题。其特点接种副反应等方面都容易出现一些问题。其特点主要有三点：以完整的病原体作为抗原、在身上主要有三点：以完整的病原体作为抗原、在身上容易获得抗原、灭活不好会导致感染。容易获得抗原、灭活不好会导致感染。如何解决呢？ 联合疫苗治疗性疫苗针对传统疫苗的不足，进一步研究，发展出针对传