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文档简介

1、本文目的：复制出 IL-4 基因片段一、查找基因序列1、进入 NCBI 主页，下拉选框选择 Nucleotide ，在搜索栏输入要查找的目的基 因，即 IL-4 ，点击搜索2 、在搜索结果选择灵长类( Homo sapiens )2、在灵长类IL-4基因中选择需要的mRN序列3、查看基因的相关信息外显子区域CDs区域4、点击FASTA格式，并将序列保存到文档二、使用 primer premier 设计引物1、建立新文件，将所得的序列复制进输入框内2、点击搜索按钮，搜索引物3、设置引物设计参数（因为在之前查找基因序列的时候获知，外显子区域分别 为：1-200、201-248、249-425、42

2、6-618，又知在引物设计时引物位置最好 跨越一个内含子，PCR产物长度通常为100-150bp，故设定上游引物位置为 201-248，下游引物位置为 249-425，产物长度为 100-150bp）4、确认条件后，显示搜索结果4、双击选中得分最高的引物查看引物情况（上图为上游引物情况，下图为下游引物情况）5、将设计的上下游引物复制出来，保存到文档中三、使用 oligo 对设计的引物进行评价1、建立新文件，将从cnki上获得的cDNA复制进输入框，并点击accept接收2、接收后显示出该序列的相关信息3、点击 edit 按钮录入用 primer 设计的上游引物， 每一次输入新数据后都需要 点击 accept 按钮接收4、同理，录入下游引物5、分析上下游引物二聚体形成情况6、分析上下游引物发卡形成情况7、分析上下游引物 GC%8、检测上下游引物与PCR莫板其它位置错配情况9、分析PCF整体情况四、引物特异性检验( primer blast )1、进入NCBI主页，并选择blast2、选择 primer blastget3、在输入框内输入莫板序列和上下游引物，并设定对比数据库，点击primer 进行对比4、查看 blast 结果3'端没有完全互Blast 结果显示，

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