从动物肝组织中分离、提取ppt课件

1、复进展。复进展。化学破碎法：常用的化学试剂有：化学破碎法：常用的化学试剂有： 有有机试剂甲苯、丙酮、丁醇、氯仿等；机试剂甲苯、丙酮、丁醇、氯仿等；外表活性剂外表活性剂TweenTween、特里顿、特里顿TritonTriton等；等； 螯合剂螯合剂EDTAEDTA：乙二胺四乙酸：乙二胺四乙酸等。他们都可以添加细胞膜的通透性，是酶等。他们都可以添加细胞膜的通透性，是酶容易释放。容易释放。酶溶法：因对此肝酶不了解故不采用此酶溶法：因对此肝酶不了解故不采用此方法。方法。 盐溶液提取：适用于大多数酶。盐溶景象：大多数盐溶液提取：适用于大多数酶。盐溶景象：大多数P P酶在低浓度的盐存在的条件下，酶的溶解

2、度随盐浓度的酶在低浓度的盐存在的条件下，酶的溶解度随盐浓度的升高而添加。盐析景象：在盐浓度到达某一界限后，酶升高而添加。盐析景象：在盐浓度到达某一界限后，酶的溶解度随盐浓度升高而降低。的溶解度随盐浓度升高而降低。l 影响酶提取的主要要素：影响酶提取的主要要素：l 酶在所运用溶剂中的溶解度；酶在所运用溶剂中的溶解度；l 酶向溶剂分散的速度：酶向溶剂分散的速度与温度酶向溶剂分散的速度：酶向溶剂分散的速度与温度、黏度、黏度、分散面积、分散面积、分散间隔、分散间隔及及两相间的浓度差两相间的浓度差有亲密关系；有亲密关系；l 温度：在不影响酶活性的条件下，适当提高温度，有利温度：在不影响酶活性的条件下，适

3、当提高温度，有利于酶的提取。适当提高温度，可以提高酶的溶解度，也可以于酶的提取。适当提高温度，可以提高酶的溶解度，也可以增大酶分子的分散速度，但是温度过高，易引起酶的变性失增大酶分子的分散速度，但是温度过高，易引起酶的变性失活，所以提取时温度不宜过高。活，所以提取时温度不宜过高。 pH pH值：提取时，溶液的值：提取时，溶液的pHpH值不宜过高或过低，值不宜过高或过低，以免引起酶的变性失活，并避开酶的等电点。当以免引起酶的变性失活，并避开酶的等电点。当pHpH值等于某酶的等电点时，酶分子的溶解度最小。值等于某酶的等电点时，酶分子的溶解度最小。 提取液的体积：添加提取液的用量，可以提高提取液的体

4、积：添加提取液的用量，可以提高酶的提取率。但是过量的提取液，会使酶的浓度降酶的提取率。但是过量的提取液，会使酶的浓度降低，对进一步的分别纯化不利。因此，控制提取液低，对进一步的分别纯化不利。因此，控制提取液的总量普通为原料体积的的总量普通为原料体积的3 35 5倍。倍。常用的酶分别方法有沉淀法、层析法、电泳法、离心法、过滤和膜分常用的酶分别方法有沉淀法、层析法、电泳法、离心法、过滤和膜分别法、萃取法等。别法、萃取法等。 因本实验中对此种酶的了解有限，故应采用等电点沉淀法。因本实验中对此种酶的了解有限，故应采用等电点沉淀法。知所需酶的知所需酶的pI=6.2pI=6.2，故适宜采用此种方法进展分别

5、。，故适宜采用此种方法进展分别。 等电点沉淀法：利用两性电解质在等电点时溶解度最低，及不同等电点沉淀法：利用两性电解质在等电点时溶解度最低，及不同两性电解质的等电点不同这一特性，经过调理溶液的两性电解质的等电点不同这一特性，经过调理溶液的pHpH值，使酶或杂值，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分别的方法。在溶液的质沉淀析出，从而使酶与杂质分别的方法。在溶液的pHpH值等于溶液中值等于溶液中某两性电解质的等电点时，该两性电解质分子的净电荷为零，分子间某两性电解质的等电点时，该两性电解质分子的净电荷为零，分子间的静电斥力消除，使分子能聚集在一同而沉淀下来。因此可以经过调的静电斥力消除，使分子能聚

6、集在一同而沉淀下来。因此可以经过调理介质的理介质的pHpH，把目的酶和杂蛋白分开。但由于蛋白质在，把目的酶和杂蛋白分开。但由于蛋白质在pIpI点附件一定点附件一定范围的范围的pHpH内都可发生沉淀，内都可发生沉淀，只是沉淀的程度很不一样，而且相当多的蛋白质的只是沉淀的程度很不一样，而且相当多的蛋白质的pIpI点很接近，所以该法的回收率和纯化倍数都不理想，点很接近，所以该法的回收率和纯化倍数都不理想，普通只用于酶的粗分别阶段。普通只用于酶的粗分别阶段。 其他沉淀法：盐析法、有机溶剂沉淀法、其他沉淀法：盐析法、有机溶剂沉淀法、复合沉淀法需根据酶的种类配置适宜浓度的溶复合沉淀法需根据酶的种类配置适宜

7、浓度的溶液，故无法采用。热处置沉淀法同样不宜。液，故无法采用。热处置沉淀法同样不宜。 电泳法：对该酶的带电量不了解。等点电泳法：对该酶的带电量不了解。等点凝胶电泳：会使该酶的亚基分开而不能采用。凝胶电泳：会使该酶的亚基分开而不能采用。 层析法：对酶和层析柱的吸附效果不了解，层析法：对酶和层析柱的吸附效果不了解，无法进展分别。无法进展分别。 离心法：对酶的大小密度不了解，无法知离心法：对酶的大小密度不了解，无法知道所需酶的位置。道所需酶的位置。 过滤法、膜分别法：对酶的大小不了解。过滤法、膜分别法：对酶的大小不了解。 萃取分别法：对酶的溶解度不了解。萃取分别法：对酶的溶解度不了解。及有机溶剂非常

8、敏感。用中性盐作为沉及有机溶剂非常敏感。用中性盐作为沉淀剂，平安、操作简单。盐析结晶法操淀剂，平安、操作简单。盐析结晶法操作包括：加固体盐法；饱和盐溶液；透作包括：加固体盐法；饱和盐溶液；透析分散法。析分散法。有机溶剂结晶法：针对小分子物质的结晶。有机溶剂结晶法：针对小分子物质的结晶。等电点结晶法：多用于一些两性物质。等电点结晶法：多用于一些两性物质。燥、气流枯燥和吸附枯燥等。本实验采燥、气流枯燥和吸附枯燥等。本实验采取任何一种均可。取任何一种均可。 真空枯燥：真空枯燥是在与真空系统相衔接的密闭真空枯燥：真空枯燥是在与真空系统相衔接的密闭枯燥器中，一边抽真空一边加热，使酶液在较低的温度条枯燥器

9、中，一边抽真空一边加热，使酶液在较低的温度条件下蒸发枯燥的过程。在真空泵之前需求设置水蒸气凝结件下蒸发枯燥的过程。在真空泵之前需求设置水蒸气凝结搜集器，以免汽化产生的水蒸气进入真空泵。酶液真空枯搜集器，以免汽化产生的水蒸气进入真空泵。酶液真空枯燥的温度普通控制在燥的温度普通控制在6060以下。以下。 冷冻枯燥：冷冻枯燥是先将酶液降温到冰点以下，冷冻枯燥：冷冻枯燥是先将酶液降温到冰点以下，使之冻结成固态，然后在低温下抽真空，使冰直接升华为使之冻结成固态，然后在低温下抽真空，使冰直接升华为气体，而得到枯燥的酶制剂。冷冻枯燥得到的酶质量较高，气体，而得到枯燥的酶制剂。冷冻枯燥得到的酶质量较高，构造坚

10、持完好，活力损失少，但是本钱较高。特别适用于构造坚持完好，活力损失少，但是本钱较高。特别适用于对热非常敏感而价值较高的酶类的枯燥。对热非常敏感而价值较高的酶类的枯燥。 喷雾枯燥：喷雾枯燥是经过喷雾安装将酶液喷成喷雾枯燥：喷雾枯燥是经过喷雾安装将酶液喷成直径仅为几十微米的雾滴，分散于热气流中，水直径仅为几十微米的雾滴，分散于热气流中，水分迅速蒸发而得到粉末状的枯燥酶制剂。喷雾枯分迅速蒸发而得到粉末状的枯燥酶制剂。喷雾枯燥由于酶液分散成为雾滴，直径小，外表积大，燥由于酶液分散成为雾滴，直径小，外表积大，水分迅速蒸发，只需几秒钟就可以到达枯燥。在水分迅速蒸发，只需几秒钟就可以到达枯燥。在于燥过程中，

11、由于水分迅速蒸发，吸收大量热量，于燥过程中，由于水分迅速蒸发，吸收大量热量，使雾滴及其周围的空气温度比气流进口处的温度使雾滴及其周围的空气温度比气流进口处的温度低，只需控制好气流进口温度，就可以减少酶在低，只需控制好气流进口温度，就可以减少酶在枯燥过程中的变性失活。枯燥过程中的变性失活。 气流枯燥：气流枯燥是在常压条件下，利气流枯燥：气流枯燥是在常压条件下，利用热气流直接与固体或半固体的物料接触，使用热气流直接与固体或半固体的物料接触，使物料的水分蒸发而得到枯燥制品的过程。气流物料的水分蒸发而得到枯燥制品的过程。气流枯燥设备简单，操作方便，但是枯燥时间较长，枯燥设备简单，操作方便，但是枯燥时间较长，酶活力损失较大。需求控制好气流温度、气流酶活力损失较大。需求控制好气流温度、气流速度和气流流向，同时要经常翻动物料，使之速度和气流流向，同时要经常翻动物料，使之枯燥均匀。枯燥均匀。 吸附枯燥：吸附枯燥是在密闭的容器中用吸附枯燥：吸附枯燥是在密闭的容器中用各种枯燥剂吸收物料中的水分，到达枯燥的目各种枯燥剂吸收物料中的水分，到达枯燥的目的。常用的吸附剂有硅胶、无水氯化钙、氧化的。常用的