大鼠被动型Heymann肾炎模型建立与抗体剂量关系的探讨

1、大鼠被动型heymann肾炎模型建立与抗体剂量关系的探讨【摘要】 目的：通过对被动型heymann肾炎模型的建 立与抗体剂量关系的研究，进一步探讨膜性肾病的发病机制。 方法：成年雄性sd大鼠分为a、b、c3组，分别经尾静脉注射抗fx1a抗血清lml/100g、ml/100g以及生理盐水lml/100g 1周后检测24h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清 三酰甘油以及总胆固醇，分别在普通光学显微镜和透射电子 显微镜下观察大鼠肾组织的病理学改变。结果：被动型 heymann肾炎模型的建立与s d大鼠尾静脉注射抗fx1a抗血 清的剂量存在正相关。结论：膜性肾病的发生可能与抗体剂 量有关。编辑。【

2、关键词】膜性肾病；被动型heymann肾炎；过破酸 银甲胺染色abstrac t objective：toinvestigatetherelationsofantibodydose- eymannnephritisanddenceformembranous genesis. methods：ma d)ratswererandomly oupsandwereinjecte m(lml/100g,ml/loogresponseinpassiveh trytoprovidetheevi nephropathyinpatho lesprague-dawley(s dividedintothreegrd

3、withanti-fxiaseru )andphysiologicalsaline(lml/loog)ind udalvein. afteraweeurineprotein,serum tinine,secrumtrigltaicholestorelwerely. glomerularlesio ghtandelectronicmi hesdratsdevelopedt ndpathologicalpatt toanoptimumdoseofaifferencethroughca k,twenty-fourhours albumin,secrumcrea ycerideandsecrumto

4、observedrespective nsweremeasuredby1i croscope. results：t hetypicalclinicala ernsofmninresponsenti一fxiaserum. conelusion： mngeneratio nmayberelatedwitha ntibodydoses. key words membranous nephropathy；passiveheymannnephritis； periodicacidsilver methanamine 膜性肾病(m embranousnephropat hy,mn)是成人肾病综合征常见的病

5、理类型之一，但其发病机理尚未明确。大鼠 heymann肾炎(heymann nephritis，hn)模型的病理改变及表 现与人类膜性肾病十分相似，已作为人类膜性肾病的模型普 遍应用，其中被动型heymann肾炎(passi veheymannnephritis ,phn)系予大鼠直接静脉注射抗肾小管 刷状缘提取物(fxla)的抗体(或抗血清)诱发，模型较为稳定， 制备所需时间相对较短，被广泛用于实验研究1 。有关phn 模型建立过程中fxla抗体的剂量反应关系国内外报道较少， 本研究旨在探讨phn的建立与抗体剂量反应的关系，为膜性 肾病发病机制的实验研究奠定基础。1 材料和方法实验动物清洁级

6、健康雄性sd大鼠，体重200250g，由南通大学实验动物中心提供；普通级健康雄性新西兰大耳 兔，体重kg，购自南京金陵种兔场。饲养环境温度维持在1， 分笼饲养，标准饲料，自由摄水，12h交替照明。方法fxla提取 参考malath i等方法改良。健康雄性sd大鼠3%戊巴比妥腹腔麻醉后于无菌条件下取肾皮质，按1 : 30加入50mmol/l甘露醇/2mmol/ltrishcl在冰浴中制成匀浆；力口 imol/lcacl 2 至终浓度为 10mmol/l, 4°c3 000g 离心 15min,取上清液，4 3000g再离心20min，取沉淀用50mmol/l 甘露醇/2mmol/ltr

7、ishcl重复洗涤1次。重复上述步骤1次。 取沉淀加入mol/lpbs溶解即为fxla，考马斯亮蓝法于6 00nm 波长比色进行蛋白定量。置_20°c冰箱备用。fxla抗血清的制备与提取 将fxla溶液与等量完全 弗氏佐剂充分乳化后，于新西兰大耳兔的颈部、背部、腹部 以及四肢足垫皮下分点注射，每周1次，共免疫6次。从新 西兰大耳兔耳缘静脉取血lml，离心分离血清，用免疫双向 扩散法测定抗血清的效价，迗1 : 32以上后经腹主动脉取血， 置5 7°c水浴30min灭活补体，随后以5 000g离心lomin,吸取上清即为fxla抗血清，分管置_20°c冰箱备用。实验分

8、组与模型的建立 将18只健康雄性sd大鼠按随机数字表法分为a、b、c3组，每组6只。a、b、c3组分别经尾静脉一次性注射fxla抗血清lml/100g、ml/100g以 及生理盐水lml/100g。观察指标 1周后将大鼠分别单独置入代谢笼，收集 24h尿液，准确测量尿液体积并行24h尿蛋白定量测定。次日取血标本，全自动生化分析仪测定血清白蛋白、肌酐、尿 素氮、甘油三酯及胆固醇水平。将肾组织分别用4%多聚甲醛 定或3%戊二醛固定后行苏木素一伊红染色、六胺银染色或 醋酸铀染色在普通光镜或透射电镜下观察大鼠肾组织的病理学改变。编辑， 统计学方法所有计量资料均采用统计软件进行统计分析，结果以x

9、7;s表示。所有数据进行方差齐性检验后 进行单因素方差分析。两两比较用c1检验，p2一般情况 实验观察过程中，c组大鼠精神状态良好， 体重增加，皮毛光滑亮泽；a、b两组大鼠出现不同程度的摄 食减少、体重减轻、尿量减少等现象，a组较b组更明显。24h尿蛋白定量的改变1周后a组24h尿蛋白定量为土mg/d，b 组为土mg/d，c 组为 ±mg/d，a、b 组 24h 尿蛋 白定量较c组增加，a组较b组高。两组大鼠血清白蛋白以及肌酐、总胆固醇和三酰甘油的改变 见表1。观察7天后a、b、c3组大鼠血清白蛋白及 肌酐、总胆固醇和三酰甘油水平无明显变化。肾脏组织病理学改变 he、pasm染色光镜

10、下b组和c 组大鼠肾小球毛细血管袢开放良好，未见肾小球基底膜增厚 以及系膜增生，a组可见gbm节段性增厚，未见系膜增生；3 组肾小管间质均未见明显病理改变。透射电镜下c组上皮下 无电子致密物沉积，gbm无增厚，足突清晰；而a组可见散 在上皮下电子致密物沉积，gbm节段性增厚，部分足突可见 融合；b组可见少量上皮下电子致密物沉积，未见足突融 合。3 讨 论mn病理特点为脏层肾小球上皮细胞下免疫复合物沉积 不伴有明显炎症反应，后期有gbm弥漫性增厚，免疫沉积物 通常为igg4和补体c5b-92。引起肾小球损害的基本病理 机制为肾小球脏层上皮下免疫复合物形成与沉积和补体激 活2，3。尽管对膜性肾病的

11、研究已取得很多进展，但丽 的发病机制仍没有完全明确，进一步探索其发病机制，寻找 更为有效的防治措施具有重要的理论和临床意义。目前人们对膜性肾病发病机理的认识主要来自大鼠 heymann肾炎动物模型。本实验参考了 malath i等建立的被 动型heymann肾炎方法。造模后1周a、b两组大鼠出现不 同程度的摄食减少、体重减轻、尿量减少、明显蛋白尿等与 人类膜性肾病相似的表现，血清白蛋白、肌酐、总胆固醇以 及三酰甘油等未出现具有统计学意义的变化，可能与本实验 观察heymann肾炎早期有关。普通光学显微镜检查a组大鼠 较b、c两组表现为肾小球节段性基底膜增厚，透射电子显 微镜检查a组大鼠见肾小球

12、基底膜节段性电子致密物沉积， 部分足突可见融合，b组大鼠见肾小球基底膜节段性电子致 密物沉积，未见有足突融合，表明本实验所制备的heymann 肾炎模型较为成功和可靠。而a组大鼠与b组大鼠表现出不 同程度的病理改变，提示被动型heymann肾炎模型的建立可 能与sd大鼠尾静脉注射抗fx1a抗血清的剂量存在正相关关 系。本实验成功地制备了被动型heymann肾炎模型，通过对 a组与b组大鼠2 4小时尿蛋白定量以及光学显微镜和电子显 微镜组织学检查的比较，间接验证了在heymann肾炎中原位 免疫复合物形成是其可能的发病机制之一，也间接验证了膜 性肾病的发生可能与诱导抗体的剂量有关，但其相关程度还 有待进一步研究明确。【参考文献】1 冯金忠，李军.heymann肾炎的发病机制j.国外医 学泌尿系统分册，2000，20(1)： 2 6-27.2 王瑞石，刘志红.膜性肾病的发展机制j.肾脏病与透析肾移植杂志，xx，15: 161-16 6.,etal. mechanismsof larinjuryinmem