两种基因敲除小鼠的培育

1、两种基因敲除小鼠的培育两种基因敲除小鼠的培育摘要 从美国哈佛大学引进了两种基因敲除小鼠。这两种品系小鼠的体内分别缺少Cystatin C胱抑素C 和 Cathepsin S组织蛋白酶 ，简称C-C 和 C-S。在三年的培育过程中，我们对其生长繁殖、生理生化等一系列指标作了测定，现将结果汇报如下。一、材料和方法一、材料和方法一、材料1、动物：Cystatin C-null小鼠和 Cathepsin S-null小鼠。2、饲料：浙江大学实验动物中心自己配制生产的全价饲料。水是普通自来水。皆经121度、20分钟、真空高压蒸汽灭菌。二、方法1、饲养：饲养于屏障系统内。空气为高效过滤，温度 湿度 压强

2、2、繁殖：雄鼠8-9周龄，雌鼠7-8周龄即可配种。严格的兄妹交配，1雌 1雄长期同窝。仔鼠在3-4周后离开母鼠，按性别分笼饲养。3、初生之日起，每周测定体重，至15周止。4、统计1-5胎的繁殖情况。5、BP98A-血压仪6、动物心电图分析仪日本软隆公司7、动物血细胞计数仪8、罗氏全自动生化仪二、结果二、结果1、 Cystatin C-null小鼠和 Cathepsin S-null小鼠的生长生长 Cystatin C-null小鼠()0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0003691215时 间ObservedLinearQuadraticCubicCompoundG

3、rowthExponentialLogistic灰 鼠 雄Cystatin C-null小鼠()0.005.0010.0015.0020.0025.0003691215时 间ObservedLinearQuadraticCubicCompoundGrowthExponentialLogistic灰 鼠 雌Cathepsin S-null小鼠()0.005.0010.0015.0020.0025.0003691215时 间ObservedQuadraticCubic黑 鼠 雌Cathepsin S-null小鼠()0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0003691215

4、时 间ObservedQuadraticCubic黑 鼠 雄 2、Cystatin C-null小鼠C-C和 Cathepsin S-null小鼠C-S的繁育胎次分娩间隔(天)产仔数成活率(%)品系C-SC-CC-SC-CC-SC-C129.57.827.39.86.52.37.22.291.693.4243.517.235.813.47.12.17.51.793.595.6345.814.540.615.56.71.87.31.994.792.8444.715.442.714.76.91.97.12.192.391.7551.622.949.323.84.21.16.92.591.892.5

5、C57BL/62836天 6.987.48只 8793注：C57BL/6*的有关数据来源于上海斯莱克实验动物有限公司的网页。T-Test 品种NMeanStd. DeviationStd. Error Mean产子数黑鼠1003.620.9296463970.09296464灰鼠1003.921.2687383380.126873834初生重黑鼠991.510 0.1105267460.011108356灰鼠1001.50610.1195014480.011950145一周重（g）黑鼠1004.12090.4882582840.048825828灰鼠1004.12830.4689620070.

6、046896201二周重黑鼠1008.10340.7930801990.07930802灰鼠1008.90035.4318225180.543182252三周重黑鼠1009.94480.8341698590.083416986灰鼠10010.0860.9144297780.091442978四周重黑鼠10013.39741.3775638140.137756381灰鼠10013.43481.1175672350.111756724五周重黑鼠10016.98431.510232610.151023261 六周重黑鼠10018.44611.750181460.175018146灰鼠10019.38

7、81.4619441880.146194419七周重黑鼠10019.41971.8916229230.189162292灰鼠10020.44831.6687714320.166877143八周重黑鼠10020.25871.9893263950.198932639灰鼠10021.34291.7739388890.177393889九周重黑鼠10021.08231.9688430970.19688431灰鼠10022.06431.8247298150.182472982十周重黑鼠10021.67021.9665998860.196659989灰鼠10022.72361.8411335550.184

8、113356十一周重黑鼠10022.19541.9217276630.192172766灰鼠10023.32321.8601937990.18601938十二周重黑鼠10022.66311.9223085320.1922308533 心电图4 生理指标HRSBPDBPMBP心率收缩压舒张压平均动脉压C-S547.1104.367.0 79.2C-C448.398.468.578.85 血液常规项目单位C-SC-CC57BL/6WBC白细胞计数109/L4.545.125.89#LUC大未染色细胞计数109/L00.36%NEUT中性细胞比率%5.810.414.2%LYMPH淋巴细胞比率%88

9、.676.281.2%MONO单核细胞比率%0.32.536.72%EOS嗜酸细胞比率%4.83.611.1%BASO嗜碱细胞比率%0.180.04%LUC大未染色细胞比率%0.247.22RBC红细胞计数1012/L10.059.599.28HGB血红蛋白g/dL16.113.5314.1HCT红细胞积压%5.14.87MCV平均红细胞体积fL50.7650.7851.11MCH平均血红蛋白含量Pg16.1514.2916.2MCHC平均血红蛋白浓度g/dL31.8628.1829.86 血液生化指标G Gr ro ou up p S St ta at ti is st ti ic cs s

10、1150.43642.08148.627591750.77064.778571.158971135.06362.09870.632781734.12943.98133.965611115.37272.27820.686901716.64124.11644.99838112.3364.45667.13769172.1882.61531.149231166.727320.606276.213021749.705914.687433.5622211184.272757.3307817.2858817122.882437.026828.9803211.8364.22482.06779171.3353.

11、69995.1697611112.363628.366438.552801778.705945.1743410.95639117.013620.560276.1991517.8076.38982.09454112.8555.59774.18022172.4065.5810009093475.173021047.804171230.6471595.14714144.34438118.72735.849631.763731719.176524.431635.92554119.72731.93085.58217179.64715.062501.2278411147.0000

12、2.52982.7627717153.64714.372371.06046品系黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠黑鼠灰鼠血清总蛋白血清白蛋白血清球蛋白血清白球比血清丙氨酸氨基转移酶血清天门冬氨酸氨基转移酶血清总胆红素血清碱性磷酸酶血清甘油三酯血清总胆固醇血清肌酸激酶血清肌酐尿素钠NMeanStd. DeviationStd. ErrorMean 项目名称项目代码单位 C-SC-C血清总蛋白TPg/L50.4 50.8 血清白蛋白 ALBg/L35.1 34.1 血清球蛋白 GLOBg/L15.4 16.6 血清白球比 A/G

13、2.3 2.2 血清丙氨酸氨基转移酶 ALTU/L66.7 49.7 血清天门冬氨酸氨基转移酶 ASTU/L184.5 122.9 血清总胆红素 T-BIL mol/L0.8 1.3 血清碱性磷酸酶 ALPU/L112.4 78.7 血清甘油三酯 TGmmol/L7.0 0.8 血清总胆固醇 TCHOLmmol/L2.9 2.4 血清肌酸激酶 CKU/L8.7 1230.6 血清肌酐Crea mol/L9.7 19.2 尿素 UREAmmol/L21.2 9.6 钠Nammol/L147.0 153.6 三、讨论与结论组织蛋白酶(cathepsin)是一大类裂解肽键的蛋白水解酶，其中组织蛋白酶

14、 S(cathepsin s) 属于半胱氨酸蛋白酶,其作用非常广泛，参与机体多种生理、病理过程。它不但可敛细胞的炎性坏死，还参与细胞凋亡的调控 ，在多种疾病的发生开展过程中发挥重要的作用。Cystatin C(Cys C) 又称半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C ,中译名为胱抑素C 是半胱氨酸蛋白酶的细胞外抑制剂,在cystatin 中含量最为丰富,并对细胞内蛋白的转换起作用。它广泛存在于脊椎动物的组织中，参与炎症过程及一些神经性疾病。因此，这两类物质成为近来医学研究的热点 Cystatin C-null小鼠和 Cathepsin S-null小鼠是美国哈佛大学Guo Ping shi 教授研制培育的基因敲除小鼠。这两种品系小鼠的体内分别缺少Cystatin C和 Cathepsin，因此，是研究与Cystatin C和 Cathepsin S有关疾病的十分理想的动物模型。2005年11月份，浙江大学医学院附属二院的项美香教授获得哈佛大学的赠送，引进了两对种鼠。 这两个品系的小鼠是在C57BL/6的根底上，分别敲除了控制合成组织蛋白酶 S(cathepsin s)和胱抑素C Cystatin C)的基因后生产的。 两品系间的一些繁育指标如分娩间隔(天) 、产仔数、成活率(%)等没有多大差异，差异不显著。但两品