临床免疫学与检验重点

1、免疫学简介一、免疫学概念与免疫应答免疫应答过程：抗原的识别、处理、信息传递、免疫细胞的激活、增值、分化以及产生一系 列的免疫效应分了免疫应答分为识别阶段、活化阶段、效应阶段1、识别阶段：是巨噬细胞等抗原呈递细胞对外来抗原或口身变性抗原进行识別、摄収、降 解和递呈抗原信息给t副主席报及相关淋巴细胞的阶段2、活化阶段：是t、b淋巴细胞在接受抗原信号后，在一系列免疫分子的参与下，发主活 化、增值、分化的阶段。b细胞接受抗原信息分化为浆细胞，t细胞接受抗原刺激和协同刺 激双信号后分化为效应细胞3、效应阶段：是浆细胞分泌特界性抗体，执行体液免疫功能。t细胞中的th细胞分泌细胞 因子等效应分子，t杀伤细胞

2、执行细胞毒效应功能。另外有少量t、b细胞在增值分化后， 不直接执行效应功能，而成为记忆细胞免疫应答效应多为生理性，是机体对外来抗原或自身变性抗原的清楚效应二、免疫组织与器官免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子构成免疫器官按功能不同，分为中枢免疫器官和外周免疫器官中枢免疫器官是免疫细胞产牛、 分化和成熟的场所，由骨髓和胸腺组成；外周免疫器官是免疫应答的场所，有淋巴结、脾及 扁桃体等纟r成。单核细胞核淋巴细胞经血液循环及淋巴循环进出于外周淋巴纟r织及淋巴器 官，形成机体免疫系统的免疫网络。（一）中枢免疫器官1、骨髓2、胸腺：是一级淋巴上皮组织，是t细胞发育的重要屮枢器官，胸腺由胸腺基质细胞（ts

3、c） 和胸腺细胞组成。（二）外周免疫器官及组织1、淋巴结：分为皮质区及髄质区。皮质区主要的细胞是b淋巴细胞又称为非胸腺依赖区。 淋巴结的中心是能质区，由淋巴索和淋巴窦组成，淋巴索为z谜聚集的淋巴细胞，包括b 细胞、浆细胞、t细胞及巨噬细胞淋巴结主要功能：是共淋巴细胞栖息和增值的场所；是适宜于淋巴细胞增值分化发挥免疫应 答的基地；是淋巴液运行中监视清除病原体异物的过滤监控站2、脾：是富含血管的最大外周淋巴器官。3、黏膜伴随的淋巴组织：有b细胞、t细胞、浆细胞及巨噬细胞，受局部侵入的病原体激 活执行固有和适应性的免疫应答，使b淋巴细胞活化分化为浆细胞，产多种ig类别的看那 个题，其屮最主要的是ig

4、a及分泌型iga,执行体液免疫及局部特异免疫作用（三）淋巴细胞再循环与归巢三、免疫细胞（一）淋巴细胞：是免疫系统的主要细胞，包括t细胞、b细胞核nk细胞1、t细胞 夕卜周血中t细胞约占淋巴细胞的70%-75%0（1）、t细胞受体（tcr）：是t细胞特有的表而标志，可表达于所有的成熟t细胞表面。t细胞识别抗原和转导信号是由tcr特异识别mhc分子递呈的抗原肽，cd3分子转导t 细胞活化的笫信号，tcrlcd3分了通过盐桥结合形成稳定的复合物，tcr识别抗原的 这一特点构成mhc限制性的基础（2）簇分化抗原（cd）：是区分t淋巴细胞的重耍标志，t细胞发育不同阶段的亚群存在 不同的分化抗原2、b细胞

5、：b淋巴细胞是在骨髓内发育成熟的细胞，是免疫系统中的一种主要细胞，主要 功能是：产牛:抗体；呈递抗原；分泌细胞因子参与免疫调节。人外周血液中b淋巴细胞约 占 5%-25%3、自然杀伤细胞：i然杀伤细胞(nk)来源于骨髓造血干细胞，其发冇成熟依赖于骨髓及 胸腺微环境。nk细胞无须抗原刺激，可非特异性血接杀伤肿瘤和病毒感染的靶细胞。活化 的nk细胞可分泌ifn y和tnfa等细胞因子，参与免疫调节作用(二) 免疫辅助细胞 凡能够通过一系列辅助淋巴细胞活化的细胞称为辅佐细胞。辅佐细 胞主要包括单核吞噬细胞系统、树突状细胞俩类。吞噬细胞包括单核吞噬细胞系统(包括血液屮的单核细胞和纟r织屮的巨噬细胞)和

6、屮性粒粒细胞，其共同特征是表达mhcii类分子及具有吞噬作用树突状细胞不具有吞噬能力，但具有很强的抗原递呈能力，称专职性抗原递呈细胞四、免疫分子免疫分子指的是由一些免疫活性细胞或相关细胞分泌的参与机体免疫反应或免疫调节的蛋白质及多肽物质。通常指免疫球蛋白、补体、细胞因子、细胞黏附分子、人类白细胞分化抗原等(-)免疫球蛋白免疫球蛋白(ig )是b细胞经抗原刺激后增值分化为浆细胞后产生的”存在于血液和体液中能与相应抗原特异性结合、执行体液免疫功能的一组球蛋白。分为分 泌型(sig )及模型(mlg)z前者主要存在于体液中”具有抗体的各种功能”后者作为抗原 受体表达于b细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白

7、抗体是机体在抗原刺激下，由浆细胞合成分泌产生的具冇免疫功能的球蛋白。所冇的抗体 军事免疫球蛋白，但并非所有的免疫球蛋白都是抗体。免疫球蛋白的化学结构：由4条肽链借链间二硫键连接组成，即2条相同的重链(h)和2 条相同的轻链(l)以及儿对二硫键连接成四肽结构，构成ig 个基本单位，称为单体。 免疫球蛋白重链恒定区，按重链抗原性将免疫球蛋门分为igg、iga、igm、igd、ige5类。 ig轻链分为k型或入型，一个天然ig分子的俩条轻链型相同，每类ig中都冇k型或入型。 tgg是血清屮含最最高的免疫球蛋白，是再次免疫应答的主要抗体，也是唯一能通过胎盘的 抗体。i"分为血清黑及分泌羽。分

8、泌型iga(siga)为二聚体，每一 slga分子含有一个j链和一个 分泌片。主要存在胃肠道、支气管分泌液、初乳、唾液、泪液屮，局部浓度高，是参与黏脫 局部免疫的主要抗体。igm为五聚体，主要存在于血液中，是ig中分子量最大的。分子结构呈环形，是个体发育 最早合成的抗体，也是抗原刺激后体液免疫应答中最先产牛的抗体，感染过程中血清igm 水平升高，说明近期感染；新牛儿脐带中若igm升高，提示有宫内感染ige为单体结构,正常人血清中ige水平在五类ig中最低,仅为（0.1-0.9） mg/lo ige为亲 细胞抗体，介导i型超敏反应，在特异性过敏反应和寄生虫早期感染患者血清中可升高。igd血清中含

9、量低作用不清楚，但b细胞膜上的igd可作为b细胞分化成熟的标志（二）补体系统补体的激活途径主要有三种：经典途径、替代途径、mbl途径经典途径：以结合抗原后的igg或igm类抗体为主要激活剂，补体c1-c9共11种成分全部参与了激活途径替代途径：又称旁路途径，有病原微生物等细胞壁成分提供接触面直接激活补体c3 ,然后完成c5-c9的激活过程。代途径的激活物主要为细胞壁成分如脂多糖、肽糖苜及酵母多糖等mbl途径由急性炎症期产生的甘露糖结合凝集素（mbl ）与病原体结合后启动激活。补体的大多数组分都是糖蛋白，多属于b球蛋白，匸常血清中含量最高的补体成分为c3、 c4。补体性质不稳定,0-1 or火星

10、只保持34天，加热56°c30min灭活。（二）细胞因子细胞因子是rti免疫细胞分泌的一大类具有生物活性的多肽或小分子蛋白 质的总称，介导多种免疫细胞间和互作用。生物活性常表现为多效性、重栓性、拮抗效应和 协同效应。细胞因子按其生物学功能可分为白细胞介素、干扰素、生长因子、趋化因子家族、肿瘤坏死 因了、集落刺激因了六大类；大部分细胞因子主要存在于血液及纽织液屮（四）黏附因子（五）cd抗原 采用单克隆抗体鉴定识别的白细胞分化抗原称cd抗原。检测cd抗原 是实验室识别细胞及不同分化阶段细胞或细胞亚群最主要的方法。抗原抗体反应抗原抗体反应的原理一、抗原抗体结合力：静电引力、范徳华引力、氢键

11、结合力、疏水作用力二、抗原抗体的亲和性于亲和力三、亲水胶体转化为疏水胶体抗原抗体反应的特点、特异性二、可逆性三、比例性：若抗原或抗体嫉妒过剩则无沉淀形成，称为带现象。抗体过量时称为前带，抗 原过量时称为后带四、阶段性：第i阶段为抗原于抗体发生特显性结合的阶段，不出现可见反应。第二阶段为 可见反应阶段，此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。影响抗原抗体反应的因素一、反应物自身因素：抗体的浓度、特异性和亲和性都影响抗原抗体，为了提高试验的可靠 性，应选择高特异性、高亲和力的抗体作为诊断试剂；抗原的理化性状、分子量、抗原表位 的利啖及数fi均可影响反应结果。颗粒性抗原出现凝集反应，可溶性抗原出现沉淀

12、反应，单 价抗原与相应抗体结合不出现沉淀二、坏境因索1、电解质 抗原与抗体发牛:特界性结合后，山亲水胶体变为疏水胶体，此过程需要电解质 参加，常用0.85%naci或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液2、酸碱度 抗原抗体必须在合适的ph环境下进行，蛋白质具有俩性电离性质，因此每种蛋 白质都有固定的等电点。抗原抗体反应一般在ph6-9之间进行，ph过高或过低都将影响抗 原抗休反应3、温度在一定的范围内 温度升高可加速分了运动，抗原与抗体碰撞机会增多，使反应加 速。一般以15-40°c为宜，常用抗原抗体反应温度为37°c,温度高于56°c,可能导致已结合 的抗原抗体再解

13、离，浜至变性或者破坏。三、免疫学检测技术的类型标记免疫技术具有具有灵頌度高、快速、町定性、定量、定位等优点，是冃前应用戢广泛的 免疫学检测技术。标记免疫技术按实际用途分为定位测定组织或细胞屮固定成分的免疫组织化学技术和检测 液体标本中抗原或抗体含量的免疫测定按测定反应体系的物理状态分为均相免疫测定和非均相免疫测定；按检测现象不同分为放射免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、化学发光免疫技术和金免 疫技术免疫原和抗血清的制备免疫原是指能诱导机体产牛抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发牛. 特界性反应的物质一、颗粒型抗原的制备颗粒型抗原如各种细胞、细菌、寄牛虫等皆为颗粒型抗原细胞抗

14、原（如绵羊红细胞）一般情况下井生理盐水或其他溶液洗净，配置一定浓度即可 细菌抗原多用液体或固体培养物，经集菌后处理颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法，较少加佐剂进行皮内注射。二、半抗原免疫原的制备半抗原始终物质独立存在时只具冇抗原性而无免疫原性，这些物质称为半抗原。半抗原为蛋 白质载体或高分子聚合物结合后才貝 有免疫原性（一）载体1、蛋白质类：以牛血口蛋口最常川。蛋口质与半抗原结合基于游离氨基、竣基、酚基、筑 基、呼i味基、咪峽基、呱基等活性基团的缩合2、多肽聚合物：常用多聚赖氨酸3、人分子聚合物和某些颗粒：聚乙烯毗格烷酮、活性炭、竣甲基纤维素等皆常用（二）半抗原与载体的连接方法物理方法：通过电

15、荷和微孔吸附半抗原，吸附的载体有淀粉、聚乙烯毗格烷酮、硫酸葡聚糖、 竣甲基纤维素等化学方法是利用某些功能基团将半抗原连接到载体上。（三）半抗原性免疫原的鉴定 一般认为至少要有20个以上的半抗原分子连接到个载体 分了上，才能有效的刺激免疫动物产生抗体。因此在半抗原与载体连接示，应测定半抗原与 载体的比例，方法有吸收光谱分析法和放射性核素标记半抗原渗入法单克隆抗体与基因工程抗体的制备一、杂交瘤技术原理：利用聚乙二醇（peg）为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能 力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，再hat选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细 胞生长，经过反复的免疫学检测，筛选和单个

16、细胞培养（克隆化），最终获得技能产生所需 单克降抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。将这种杂交瘤细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔, 在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。具休包括俩种亲本细胞的选择与制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与克隆化等（一）小鼠骨髓瘤细胞：理想的骨髓瘤细胞应该是细胞株稳定，易于传代培养细胞株1'1 身不会产生免疫球蛋白或细胞因了该细胞是次黄瞟吟鸟瞟吟磷酸核糖转化酶（hgprt） 或胸腺啼咙激酶（tk）的缺陷株。h前常用的骨髄瘤细胞是ns畀和sp2/0细胞株。（二）免疫脾细胞 选与骨髓瘤细胞同源的小鼠，鼠龄再812周（三）细胞融合：细胞融合是产牛杂交瘤细胞的屮心坏节

17、。peg可能导致细胞膜上脂类物 质的物理结构重排，使细胞膜容易打开而有助于细胞融合。常用peg分子量1000d, 1500d 或 4000d（四）杂交瘤细胞的选择性培养：hat培养液，只有杂交瘤细胞能存活下来细胞克隆化一般至少进行3-5次单克隆抗体的制备一、单克隆抗体的性质鉴定（一）lg类型测定（二）特片性测定（三）抗体效价测定（四）表位测定（五）亲和力测定（六）染色体分析凝集反应原理：细菌、红细胞等颗粒抗原或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，他 们与相应抗体（抗原）再适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。 凝集反应的特点：分为俩个阶段抗原抗体特界性结合出现可见

18、的颗粒凝聚直接凝集反应原理：细菌、螺旋菌和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质参与下可直接与相应抗体结合 出现凝集。参加凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。分为玻片法和试管法（一）玻片凝集实验用于抗原的定性分析。一般用來鉴定菌种或分型；也适用于人类abo 血型的测定（二）试管凝集试验 用来协助临床诊断或流行病原调杳研究。例如肥达试验、外斐试验、 输血时也常用语受体和供体俩者的交叉配血试验间接凝集反应原理：是将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当人小的颗粒性载体表面，然示与相应抗体（或 抗原）作用，再适宜电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象一、i'可接凝集反应的类型（一）正向间接凝集反

19、应可溶性抗原致敏载体，用以检测标本中待测抗体的凝集反应，称 为正向间接凝集反应（二）反向间接血凝反应 特界性抗体致敏载体，用以检测标木中待测抗原的凝集反应（三）间接血凝抑制试验 先讲可溶性抗原（或抗体）与相应抗体（或抗原）试剂混合， 然后再加入抗原（或抗体）致敏的载体颗粒，则能抑制原先的凝集现彖，称为正向（或反向） 间接凝集抑制试验。 可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体，也可测定抗原（四）协同凝集反应 载休为金黄色葡萄球菌a债口（spa）。spa具有与igg的fc端结 合的特性，因此当这种葡萄球菌与igg抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相 应抗原接触，即出现反向间接血凝抑制试验

20、。协同凝集反应可用与细菌、病毒的直接检测。间接血凝抑制试验适用于各种抗体和可溶性抗原的检测。以载体来分，常用的为红细胞、 胶乳颗粒及明胶颗粒等二、间接血凝试验将抗原（或抗体）包被于红细胞表而，称为致敏载体，然示与相应的抗体（或抗原）结合, 从而使红细胞被动的凝聚在一起，出现可见的红细胞凝集现象（一）、载体 最常用为绵羊、家兔、鸡的红细胞及0型人红细胞。致敏的新鲜红细胞保 存时间短，易变脆、溶血和污染，只能使川23天。为此町在致敏红细胞z前将红细胞醛化, 可长期保存而不溶血。常川醛类有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。红细胞经醛化后体积略有增 人，俩面突起呈圆盘状。（二）致敏 蛋白质致敏红细胞（三）血凝试

21、验 凡红细胞沉积丁孔底，集屮呈一圆点的为不凝集（）如红细胞凝集，则 分布于孔底周围。根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱，以+凝集的孔为滴度终点三、胶乳凝集试验 载体为聚苯乙烯胶乳川于检测抗溶血索0四、明胶凝集试验广泛应用于hiv-1抗体和抗粹子抗体等的检测五、间接凝集反应的应用（一）抗原的检测 反向间接凝集反应应用于检测病原体可溶性抗原，也可用于检测各种 蛋白质成分（二）抗体的检测 可用于检测细菌、病毒和寄牛虫感染后产牛的抗体自身红细胞凝集试验原理：抗人0型红细胞的单克降抗体能为任何种血型的红细胞结合，但不引起凝集反应， 这种抗体与另一特异性抗体连接成的双功能抗体，町用于检测标本中的抗原；如与特界性抗 原连接，则可用于检测标本中的抗体这一实验与上述血凝实验的区别在于反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞，因此 反应中的标本为受检者的全血。白身红细胞凝集可用于hiv抗体、hbsag的检测抗球蛋白试验coombs试验是检测抗红细胞不完全抗休的一种很有用的方法，包扌1工接coombs试验和间接coombs试验，分別检测红细胞上不完全抗体和游离在血清中的不完全抗体沉淀反应沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体再特定条件卜发牛特异性结合时岀现的沉淀现象。一、沉淀反应的特点：抗原多为蛋白质、多糖、