DNA的粗提取与鉴定实验

1、“dna的粗提取与鉴定实验”分类比较湖北省恩施清江外国语学校彭邦风一、不同试剂用途及原理比较试剂浓度用途原理（“”为实验的主要原理）nacl 溶液2mol/l溶解dnadna在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓 度的变化而改变，溶解度在2mol/l吋最 大、0.14mol/l时最小0.14mol/l析出dna0.015mol/l鉴定时的溶媒该浓度下也能溶解dna酒精95%（体积分 数）除杂以提纯dnadna不溶于酒粘:，但是细胞中的某些物 质则可以溶于酒精溶液二苯胺鉴定剂dna遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色柠檬酸 钠0. lg/ml抗凝剂除去血液中的钙离子，防止血液凝固二、方法步骤比较项目 方法步骤添

2、加物质及冃的操作要求及冃的取用与要求冃的要求冃的制备鸡血细 胞液（教师 准备）取 0. lg/ml 的 柠檬酸钠 looml 于 500ml 烧杯中，加鸡血 180 ml抗凝缓慢搅拌混匀血液与柠檬酸 钠，防血凝离心或置于冰 箱使血细胞与血浆分 离1提取鸡血 细胞的细胞 核物质20ml蒸馆水促进血细胞吸 水破裂，释放 核物质搅拌：单向、 快速、5min加速血细胞破裂过滤：1 -2层纱 布滤取含dna的滤液2.溶解细胞 核内的dna2mol/l的nacl 溶液 40ml溶解dna搅拌：单向、 缓慢、lmin促进dna溶解3.析出含 dna的黏稠 物加蒸镭水至黏 稠物不增加为 止降低nacl溶 液浓

3、度，析出 dna搅拌：单向、 轻轻混匀溶液，促进析出 完整dna分子4.滤取含 dna的黏稠 物3层4层纱布 过滤获取含dna的黏稠 物5.将dna的 黏稠物再溶 解2mo1/l 的nacl 溶液20ml再溶解dna单向搅拌使黏稠物尽可能多 地溶解于溶液中6.过滤含冇 dna的氯化 钠溶液3层4层纱布 过滤滤取含dna的滤液7.提取含杂 质鮫少的 dna加入冷却的、体 积分数为95%的酒精50ml让部分杂质溶 于酒精，析出 含杂质较少的dna搅拌：单向促进杂质溶解、dna 析岀川玻璃棒卷起 丝状物，用滤 纸吸水获得dna （白色乳状 丝状物）8. dna的鉴 定向2支20 ml 试管各加0.

4、015mol/l 的nacl溶液一支对照，一 支溶解dna（作 溶媒）搅拌促进dna溶解各加4ml二苯 胺试剂作为dna鉴定 剂沸水浴5 min,冷却观察颜色dna所在试管溶液 变蓝色三、dna的粗提取和鉴定实验中应注意的问题1. 盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的dna, 容易被玻璃容器吸附，细胞内dna的含量比较少，如果被玻璃窖吸附却 祁分，提取的 dna就会更少。因此，实验过程屮最好使用赠料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程 中dna的损失。2. 获取较纯净的dna的关键步骤。充分搅拌鸡血细胞液。dna存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸憎水 混合后，

5、必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞加速破裂，并释放出dna。沉淀dna时必须川冷酒精。实验前必须准备好大量的体枳分数为95%的酒精，并 在冰箱中至少存放24h。正确搅拌含有悬浮物的溶液。实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。在进行步 骤3、5时，玻璃棒不耍直接接触烧杯底部，而且搅拌耍轻缓，以便获得较完整的dna 分了。进行步骤7时，要将玻璃棒插入烧杯屮溶液的屮间，用手缓慢转动5niinlomin。3. 木实验屮鉴定dna的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的情况下也可以用以 下几种方法。配制染色剂。用蒸镭水配制0.05%的溟化乙锭（eb）溶液。将玻璃棒上缠绕的口色絮状物抹于蜡纸上，再滴1

6、滴eb溶液染色。将蜡纸放在紫外灯（260nm）下照射（暗室中），可见橙红色的荧光（dna的紫外 吸收高峰在260nm处）。4. 典例解析1. 下列关于“dna的粗提取与鉴定”的实验原理中，说法错误的是a. dna在氯化钠溶液屮的溶解度随溶液浓度的变化而改变b. 利用dna不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的dnac. dna是人分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂d. dna溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应解析：该实验依据的原理是a、b、d, dna不溶于酒精（属有机溶剂），c说法错误。答案：c2. 下列关于实验操作的说法中，有误的是（）a. 该实验中有两次加

7、入蒸係水，均是为了析岀dnab. 该实验学生操作中多次用到搅拌，除最后一步未强调方向外，其余均要求单向 搅拌c. 该实验中有3次过滤，过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关d. 实验三次加入nacl溶液，无论浓度是2mol/l,还是0. 015mol/l,均是为了溶 解dna解析：对照比较表可知，除a说法冇误外，其余各项均正确。两次加蒸锚水，第一 次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质（dna）,第二次是为了降低nacl溶液的浓度从 而析出dnao答案：a3. 填写木实验操作过程中所用试剂。提取鸡血细胞中核物质：；溶解核内dna： ；析出溶液中的dna： ;dna粘稠物的再溶解： ；捉取杂质较少的dnah色乳状丝状物：；鉴定dna是否存在可用试剂：。解析：