1中药化学实验

1、中药化学实验实验一实验一 薄层板的制备、活度薄层板的制备、活度测定及薄层层析、纸层析的应测定及薄层层析、纸层析的应用用o1.1.掌握薄层层析（掌握薄层层析（tlctlc）、纸层析（）、纸层析（pcpc）的原理的原理o2.2.掌握薄层层析板的制备及薄层层析、纸掌握薄层层析板的制备及薄层层析、纸层析操作的基本方法；层析操作的基本方法；一、实验目的要求一、实验目的要求薄层色谱（薄层色谱（tlc）o薄层色谱薄层色谱(thin layer chromatography) 又称又称薄层层析，属于薄层层析，属于固液吸附色谱固液吸附色谱。薄层色谱（薄层色谱（tlc）基本原理）基本原理o吸附剂对不同物质吸附能力

2、不同；展开剂对不同物质溶解度不吸附剂对不同物质吸附能力不同；展开剂对不同物质溶解度不同，通过展开达到分离的目的。即混合液点在薄层板上时，吸同，通过展开达到分离的目的。即混合液点在薄层板上时，吸附剂对不同物质有不同程度的吸附，在用溶剂展开时，因薄层附剂对不同物质有不同程度的吸附，在用溶剂展开时，因薄层上的毛细管效应，溶剂上升，当升到原点时，混合物溶解，溶上的毛细管效应，溶剂上升，当升到原点时，混合物溶解，溶解后随着不断上升的溶剂上移于原点之上，遇到新的吸附剂又解后随着不断上升的溶剂上移于原点之上，遇到新的吸附剂又被吸附，接着又溶解、解吸，使斑点不断上移。而在上升过程被吸附，接着又溶解、解吸，使斑

3、点不断上移。而在上升过程中，由于有的成分吸附得牢些，即上移速度慢些，反之则快些，中，由于有的成分吸附得牢些，即上移速度慢些，反之则快些，从而达到从而达到“差速迁移差速迁移”，当展开至一定距离后，就可达到分离，当展开至一定距离后，就可达到分离混合物的目的。混合物的目的。斑点上升的高度用斑点上升的高度用rf表示：表示：rf= 原点至斑点中心的距离原点至斑点中心的距离 / 原点至原点至溶剂前沿的距离溶剂前沿的距离, rf1 展开剂极性越大，溶质展开剂极性越大，溶质rf值越大（即爬的越高），但很可能降值越大（即爬的越高），但很可能降低分离能力；另外单一溶剂很难分离较复杂的混合物、根据相低分离能力；另外

4、单一溶剂很难分离较复杂的混合物、根据相似相容，要使用多元溶剂体系。似相容，要使用多元溶剂体系。薄层色谱（薄层色谱（tlc）的优点）的优点o是近年来发展起来的一种是近年来发展起来的一种微量、快速而简单微量、快速而简单的色谱法，的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。o分离：分离：一方面适用于少量样品（几到几十微克，甚至一方面适用于少量样品（几到几十微克，甚至0.01g）的分离；）的分离；o精制：精制：另一方面若在制作薄层板时，另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品的样品。因。

5、因此又可用来精制样品。此又可用来精制样品。o跟踪化学反应：跟踪化学反应：在进行化学反应时，常利用薄层色谱在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。 o此法此法 特别适用于特别适用于 挥发性较小挥发性较小 或在或在 较高温度较高温度 易发易发生变化生变化 而不能用而不能用 气相色谱分析的物质。气相色谱分析的物质。o薄层色谱是在被洗涤干净的薄层色谱是在被洗涤干净的玻板玻板（103cm左右）左右）上均匀的涂一层上均匀的涂一层吸附剂吸附剂或支持剂，待干燥、活或支持剂，待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管或微量注化后将样品溶

6、液用管口平整的毛细管或微量注射器滴加于离薄层板一端约射器滴加于离薄层板一端约1cm处的起始线上，处的起始线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽展开槽内，浸入深度为内，浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂或在紫外灯下显色。或在紫外灯下显色。层析条件三要素层析条件三要素o被分离物质的极性被分离物质的极性o展开剂的极性（固定相和流动相）展开剂的极性（固定相和流动相）o吸附剂的活度吸附剂的活度 （载体或担体如：氧化铝，硅藻（载体或担体如：氧化铝，硅藻土

7、，纤维素等）土，纤维素等）二、薄层层析、纸层析概述二、薄层层析、纸层析概述1. 1. 薄层层析薄层层析（thin layer chromatography,thin layer chromatography, tlctlc）使用材料：使用材料：薄层板与吸附剂（氧化铝、硅胶、聚酰胺薄层板与吸附剂（氧化铝、硅胶、聚酰胺等）等） 涂布器、点样器材、展开箱、显色与检测仪器涂布器、点样器材、展开箱、显色与检测仪器分离原理：分离原理：吸附色谱、分配色谱吸附色谱、分配色谱 2. 2. 纸层析纸层析（paper chromatography,paper chromatography, pc pc）载体：载体：

8、滤纸纤维；滤纸纤维；固定相：固定相：水；水；流动相：流动相：有机溶剂有机溶剂 1. 1. 混合单糖纸层析鉴别混合单糖纸层析鉴别1 1）滤纸载体的制备：）滤纸载体的制备：取圆形滤纸一张，用剪刀在其圆心取圆形滤纸一张，用剪刀在其圆心处挖一小洞，另取一滤纸捻插入其中。处挖一小洞，另取一滤纸捻插入其中。2 2）样品：）样品：5%5%葡萄糖水溶液、葡萄糖水溶液、5%5%鼠李糖水溶液、二者混合鼠李糖水溶液、二者混合水溶液水溶液3 3）展开剂：）展开剂：正丁醇正丁醇- -冰醋酸冰醋酸- -水（水（4:1:14:1:1）4 4）显色剂：）显色剂：邻苯二甲酸邻苯二甲酸- -苯胺试剂，喷雾后于苯胺试剂，喷雾后于1

9、05 105 加热加热1010分钟分钟三、实验操作步骤及注意事项三、实验操作步骤及注意事项2.2.氧化铝薄层涂布氧化铝薄层涂布( (软板）软板）取表面光滑，直径均匀的玻璃棒一支，依据所制取表面光滑，直径均匀的玻璃棒一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在备薄层的宽度、厚度要求，在玻璃棒玻璃棒两端套上厚两端套上厚度为度为0.3-1mm的塑料圈或金属环，将氧化铝粉末的塑料圈或金属环，将氧化铝粉末向前推向前推，使其均匀铺在选定的载板上。，使其均匀铺在选定的载板上。24133. 3. 硅胶硅胶g g薄层涂布（硬板）薄层涂布（硬板）硅胶：水（硅胶：水（1 1：3 3）于研钵中研磨均匀，放置片刻，随即）于

10、研钵中研磨均匀，放置片刻，随即用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上，均匀用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上，均匀涂布成涂布成0.25-0.50.25-0.5mmmm厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，水平放置，室温晾干，于烘箱中整均匀，水平放置，室温晾干，于烘箱中110110烘干活烘干活化化1-21-2小时，冷后小时，冷后贮于干燥器内贮于干燥器内备用。备用。4. 4. 氧化铝活度测定氧化铝活度测定1 1）染料样品：）染料样品： 偶氮苯、对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红偶氮苯、对甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红 薄薄 层层 板：板：已铺制好的已铺制好的氧化铝软板氧化铝软板 展展 开开 剂：剂：四氯化碳四氯化碳( (用量浸没起始线用量浸没起始线0.5cm 0.5cm ) ) 点点 样样 量：量：0.02ml(0.02ml(直径不大于直径不大于2-3mm)2-3mm)（点样毛细管）（点样毛细管）2 2）测）测 定：定：四种染料的四种染料的rfrf值，与氧化铝活度表值，与氧化铝活度表比较，确定此氧化铝活度级别比较，确定此氧化铝活度级别样点直径样点直径不大于不大于3mmo斑点随着溶剂上行展开是要斑点随着溶剂上行展开是要扩散扩散的。初始斑点的。初始斑点过大过大,展开后会与其他斑点展开后会与其他斑点重合重合,影响实验准确性。影响实