光合细菌转化槲寄生制剂乙醇提取浓度的研究

1、光合细菌转化槲寄生制剂乙醇提取浓度的研究【摘 要】目的 确定光合细菌（psb）转化槲寄生制剂中槲寄生乙醇提取的最佳浓度。方法 以荷lewis肺癌小鼠为模型，以抑瘤率、免疫指标、抗氧化指标为标准进行筛选。结果psb转化槲寄生制剂的各项指标均优于单纯的槲寄生制剂，其中以psb转化槲寄生制剂的各项指标为最佳。 结论 槲寄生 75乙醇提取物所制光合细菌转化槲寄生制剂为最佳。【关键词】槲寄生；工艺学；光合细菌；抗肿瘤槲寄生为桑寄生科槲寄生属植物，文献1，2报道，槲寄生粗提物、槲寄生总生物碱具有抗肿瘤活性，但因其中含有对人体有害的毒肽和小分子蛋白质，限制了其应用。光合细菌（psb）为一种有益菌，可以转化中

2、药中的一部分成分。本文以荷lewis肺癌小鼠为模型，以抑瘤率、免疫指标、抗氧化指标为标准对psb转化槲寄生制剂中槲寄生乙醇提取浓度进行了筛选，报告如下。1材料与方法11材料111药材：槲寄生饮片，购自定州医药公司东亭批发部，经山西医科大学高建平博士鉴定为桑寄生科植物槲寄生viscum coloratum（kom）nakai的干燥茎叶。112试剂与药品：环磷酰胺制剂（cp）：上海华联制药有限公司出品（批号0402061），临用前用生理盐水稀释到10 mg/ml。 psb制剂：psb系紫色非硫菌群 红 细 菌 属 的 球 形 红 细 菌（rhodobactersphaeroides），由山西大学光

3、合细菌研究室分离鉴定保藏，采用ormerod培养基3，光照厌氧培养5 d，浓缩得psb制剂，菌液含菌数16×109个/ml；槲寄生制剂、：分别为 50、75、95的槲寄生乙醇提取物，制剂浓度以槲寄生原药材计为05 g/ml；psb转化槲寄生制剂、：分别由 50、75、95的乙醇槲寄生提取物，导入光合细菌后培养5 d得psb转化槲寄生制剂、。 制剂浓度以槲寄生原药材计为05 g/ml，菌液含菌数16×109个/ml。113动物与瘤株：动物：c57/bl小鼠100只，雌雄各半，体质量（18.0±10）g，由山西医科大学动物中心提供。瘤株：lewis肺癌，中国预防医学研

4、究院提供，山西大学光合细菌研究室传代保种。12方法121瘤细胞接种：取新鲜无坏死的lewis肺癌瘤组织，无菌条件下匀浆，制成单细胞悬液，于c57/bl小鼠每鼠右侧前腋窝皮下接种02 ml。122分组与给药：接种后24 h将动物按雌雄对半随机分成10组，每组10只。荷瘤对照组：生理盐水灌胃，每只04 ml/d，连续15 d；培养基组：ormerod培养基灌胃，每只04 ml/d，连续15 d；环磷酰胺组：optimal level of ethanol for extraction of mistletoe preparations transformed by photosynthetic b

5、acteria qixiao -mei*, zheng qing -hong, yang guan -e, zhang zhao -ming.*school of pharmaceutical sciences, shanximedical university, taiyuan 030001, china【abstract】 objective to determine the optimal level of ethanol for extraction of mistletoe preparations trans-formed by photosynthetic bacteria (p

6、sb). methods the screening of ethanol level was performed using mice model oflewis-lung tumor and based on the tumor inhibition rate, immune parameters and antioxidation parameters. resultsall parameters for psb transformed mistletoe preparations were better than those for untransformed mistletoe pr

7、epara -tions. mistletoe preparations transformed by psb showed the most favorable values of parameters. conclusion psbtransformed mistletoe preparations extracted with 75% ethanol appears to be with best anti-tumor activity.【key words】 visum album； technology； photosynthetic bacteria； antitumor·

8、; 1113·中国药物与临床2011年10月第11卷第10期chinese remedies & clinics，october 2011,vol.11,no.10表1各组小鼠抑瘤率 免疫指标 抗氧化指标实验结果（x±s）瘤质量（g）抑瘤率（）脾指数（mg/g）胸腺指数（mg/g）巨噬细胞吞噬功能a值sod活性（u/mg肝组织）mda活性（nmol/g肝组织）223±031 856±032 206±036 0153±0026 1410±085 486±13225±029 009 863±

9、041c210±048d0159±0014d1386±072c475±10c042±004a8117 663±031a148±018b0113±0007b1134±054a418±10a197±036 1166 1096±035ac236±029c0336±0018ac1867±042ac316±11ac191±027 1421 902±024c224±031c0256±0035ac1694

10、77;035ac362±10ac138±018b3809 1012±040ac231±056c0267±0025ac1814±051ac328±13ac187±025 1614 914±027bc216±012d0243±0031ac1737±031ac326±12ac112±040a4978 1141±031ac259±018c0353±0027ac2016±024ac299±12ac197±0

11、37 1187 878±044c214±025d0216±0019ac1532±022ac397±14ac137±017b3840 963±036ac223±036d0248±0021ac1634±043ac346±16ac- - 1187±025ac274±016bc0364±0015ac2205±028ac288±12ac注：与荷瘤对照组比较ap001，bp005；与环磷酰胺组比较 cp001，dp005组别 只数荷瘤对照组10培养

12、基组10环磷酰胺组10psb制剂组10槲寄生制剂组 10psb转化槲寄生制剂组 10槲寄生制剂组 10psb转化槲寄生制剂组 10槲寄生制剂组 10psb转化槲寄生制剂组 10正常对照组10腹腔注射环磷酰胺，100 mg/kg，共1次；psb制剂组：psb制剂灌胃，每只04 ml/d，连续15 d；槲寄生制剂组：槲寄生制剂灌胃，每只 04 ml/d，连续 15 d；psb转化槲寄生制剂组：psb 转化槲寄生制剂灌胃，每只04 ml/d，连续15 d；槲寄生制剂组：槲寄生制剂灌胃，每只 04 ml/d，连续 15 d；psb 转化槲寄生制剂组：psb 转化槲寄生制剂灌胃， 每只04 ml/d，连

13、续15 d；槲寄生制剂组：槲寄生制剂灌胃，每只04 ml/d，连续15 d；psb转化槲寄生制剂组：psb 转化槲寄生制剂灌胃，每只 04 ml/d，连续15 d；正常对照组生理盐水灌胃，每只0.4 ml/d，连续15 d。各组小鼠经下列不同处理15 d后，进行下列各项实验。123抑瘤率的测定：荷瘤15 d的小鼠停药后次日，称质量后脱颈处死，剥取瘤块称质量，按“抑瘤率（1试验组瘤质量/生理盐水对照组瘤质量）×100”公式计算抑瘤率。124免疫指标的测定：脾、胸腺指数的测定：取脾及胸腺称质量，计算脾及胸腺指数。脾指数脾质量（mg）/体质量（g）；胸腺指数胸腺质量（mg）/体质量（g）。

14、腹腔巨噬细胞吞噬功能测定：采用中性红比色法测定各组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力。125抗氧化指标测定：肝脏中超氧化物歧化酶（sod）活性测定：采用邻苯三酚自氧化法测定各组小鼠肝脏的sod酶活性。肝脏中过氧化脂质（lpo）的测定，即肝脏中脂质过氧化产物丙二醛（mda）含量测定：采用硫代巴比妥酸（tba）法测定各组小鼠肝脏的mda含量。13统计学方法结果以x±s表示，以t检验比较组间差异。2结 果21对小鼠lewis肺癌移植瘤的抑制作用：除培养基组外，其他各种制剂对于小鼠荷lewis肺癌实体瘤均有一定的抑制作用。 psb转化的3种槲寄生制剂的抑瘤率与对应的单纯槲寄生制剂比较差异有统计学意义，

15、其中以psb转化槲寄生制剂抑瘤率最大（498）；与荷瘤对照组比较，psb转化槲寄生制剂组、组差异有统计学意义，psb 转化槲寄生制剂组差异有统计学意义，说明用 psb 转化的槲寄生制剂对肿瘤的抑制效果比单纯槲寄生制剂好，但低于环磷酰胺对照组，且以75乙醇提取物所制psb转化槲寄生制剂抑瘤率最高，见表 1。22免疫学指标：荷瘤对照组、培养基组、环磷酰胺组的脾指数、胸腺指数、巨噬细胞吞噬功能吸光度（a）值明显低于正常小鼠，说明荷瘤小鼠的免疫功能受到一定程度的抑制，环磷酰胺进一步降低其免疫功能；3种槲寄生制剂比对照组小鼠的免疫功能稍好，但效果不很明显；psb和psb转化的3种槲寄生制剂的脾指数、胸腺

16、指数和巨噬细胞吞噬功能a值大大高于对照组，说明psb制剂和psb转化槲寄生制剂可以促进荷瘤小鼠免疫功能的提高，且以psb转化槲寄生制剂为最好，见表 1。23抗氧化指标：荷瘤对照组、培养基组的sod活性明显低于正常小鼠，mda活性明显高于正常小鼠，说明荷瘤小鼠肝脏清除氧自由基的能力比正常小鼠低。环磷酰胺组小鼠的sod活性最低，mda活性比较高，说明环磷酰胺可以降低荷瘤小鼠的抗氧化水平；3种槲寄生制剂、psb制剂和psb转化槲寄· 1114·中国药物与临床2011年10月第11卷第10期chinese remedies & clinics，october 2011,vo

17、l.11,no.10生制剂对于sod活性的提高和mda活性的降低有明显的作用，且以psb转化槲寄生制剂为最好，见表1。3讨 论增强机体的免疫功能及抗氧化功能对于肿瘤的预防和治疗具有重要的意义4。本文以荷lewis肺癌小鼠为模型，以抑瘤率、免疫指标、抗氧化指标为标准对psb转化槲寄生制剂中槲寄生醇提浓度进行了筛选。实验证明psb转化槲寄生制剂对小鼠lewis肺癌实体瘤的抑瘤率、免疫指标、抗氧化指标均优于单纯的槲寄生制剂，其中以psb转化槲寄生制剂的各项指标为最佳， 即槲寄生 75乙醇提取物所制转化制剂为最佳。前期动物实验表明，不同浓度的槲寄生醇提物中以75醇提物毒性最大，其半数致死量（ld50）

18、为42735 g/kg，psb转化后在最大耐受范围内，未发现毒性反应；通过薄层色谱法（tlc）分析，psb转化槲寄生制剂中成分与纯psb制剂、纯槲寄生制剂中成分相比，发生了一定变化，且有2个以上主斑点，且不同浓度的醇提物制成的转化制剂各成分的量有所不同，其抗肿瘤的物质基础及详细机制需进一步研究。参 考 文 献1 schumacher u，valentiner u current understanding of mistletoelectins drug discovery today，2003，8（1）：17182 bauer c，oppel t，przybilla b，et al igem

19、ediated anaphylaxis toviscotoxins of mistletoe （viscum album） extracts j allerg clinimmunol，2003，113（2，suppl1）：s3093张肇铭紫色非硫光合细菌的研究球形红假单胞菌的分离鉴定和生理特性山西大学学报，1984，7（4）：2012044高丽，张肇铭，杨官娥光合细菌制剂对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抑瘤作用山西医科大学学报，2004，35（1）：89（收稿日期：2011-06-14）·作者·编者·读者·关于计量单位等表示方法的说明根据有关规定，我们对来稿中

20、有关计量、浓度等表示方法有统一要求，望作者参照执行。1时间表达：正文中时间的表达，凡前面带有具体数据者应采用d、h、min、s，而不用天、小时、分钟、秒。例：3 d、19 h、20 min、5 s，不用3天、19小时、20分钟、5秒。2人体及动物内压力测定的计量单位：根据国家质量技术监督局和卫生部联合发出的质技监局量函1998126号文件关于血压计量单位使用规定的补充通知，凡是涉及人体及动物体内的压力测定，可以使用毫米汞柱（mm hg）或cm h2o为计量单位，但首次使用时应注明mm hg、cm h2o与千帕斯卡（kpa）的换算系数。 mm与hg之间及cm与h2o之间必须留1/4字空。3公差的表式：参量及其公差均需附单位。当参量与其公差的单位相同时，单位可以只写一次，即加圆括号将数值组合，置共同的单位符号于全部数值之后。例如：（75±18） ng/l。百分数的公差：可将中心值与公差用