实验6 清ALT预课件

1、血清丙氨酸氨基血清丙氨酸氨基转移酶转移酶（altalt）测定）测定目的要求目的要求v掌握掌握alt活性测定的基本原理活性测定的基本原理;v掌握比色法的原理和分光光度计的使用掌握比色法的原理和分光光度计的使用方法方法;v了解了解alt活性测定的临床意义。活性测定的临床意义。比色分析法是通过比较溶液比色分析法是通过比较溶液颜色深浅来测定物质浓度的方法。颜色深浅来测定物质浓度的方法。 比色法的基本原理比色法的基本原理比色法的基本原理比色法的基本原理v当当一束单色光通过有色溶液时，一束单色光通过有色溶液时，由于溶液吸收了一部分光线，由于溶液吸收了一部分光线，透过光的强度就减弱。透过光的强度就减弱。v透

2、光率：透光率：t= i/ iot= i/ iov吸光度吸光度(a) : (a) : a=-lgt a=-lgt=-lg=-lg (i/ io) (i/ io)v溶液的透光率越大，说明对光溶液的透光率越大，说明对光的吸收越少；反之，透光率越的吸收越少；反之，透光率越小，说明对光的吸收越多小，说明对光的吸收越多;t;t值值越小，越小，a a值越大。值越大。 v朗伯朗伯- -比尔定律比尔定律: : a=klca=klc 即吸光度即吸光度a a与溶液的浓度与溶液的浓度c c和和溶液的厚度溶液的厚度l l的乘积成正比关的乘积成正比关系系 。 在其他条件相同时，溶液的在其他条件相同时，溶液的浓度越大或是厚

3、度越大，则溶浓度越大或是厚度越大，则溶液对光的吸收越强（光密度越液对光的吸收越强（光密度越大），而透光度则越小。大），而透光度则越小。 比色法的基本原理比色法的基本原理v当一束单色光通过同一有色溶液的两种不当一束单色光通过同一有色溶液的两种不同浓度的溶液时，可得出下列两式：同浓度的溶液时，可得出下列两式：v 标准管：标准管：a a标标=kc=kc标标l l 测定管：测定管：a a测测kckc测测l lv则则 比色法的基本原理比色法的基本原理c c测测=a=a测测/a/a标标 c c标标谷丙转氨酶 alt实验原理实验原理-酮戊二酸二硝基苯腙酮戊二酸二硝基苯腙(干扰干扰)取试管4支，按下表加入试剂

4、： 静置静置10分钟，在分钟，在520nm 下读取各管吸光度。下读取各管吸光度。实验操作实验操作活力单位：活力单位：1ml 1ml 血清于血清于37 37 条件下与底物作条件下与底物作 用用30min30min产生产生2.5g2.5g丙酮酸为一个丙酮酸为一个1alt1alt单位。单位。计算计算a a测测- a- a测空测空c c测测( (ug/ml )= =a a标标- a- a标空标空 c c标标( (100ug/ml) 1ml 1ml血清产生的丙酮酸血清产生的丙酮酸ugug数数(c(c测测) )2.5ug2.5ugaltalt活力单位活力单位/ml=/ml= altalt广泛存在于一般组织

5、细胞中广泛存在于一般组织细胞中, ,肝细胞中此肝细胞中此酶含量最多。肝炎、中毒性肝细胞坏死等肝病时，酶含量最多。肝炎、中毒性肝细胞坏死等肝病时，血清中此酶活性增加，其他疾病如心肌梗塞、心血清中此酶活性增加，其他疾病如心肌梗塞、心肌炎等亦有增高。故血清谷丙转氨酶活性得测定肌炎等亦有增高。故血清谷丙转氨酶活性得测定在临床诊断上具有重要意义。在临床诊断上具有重要意义。 生理意义生理意义 正常值：正常值：2-40单位单位/ml。分光光度计的结构和使用分光光度计的结构和使用 v分光光度计的基本原理分光光度计的基本原理：利用比：利用比色法的原理，采用棱镜或光栅等色法的原理，采用棱镜或光栅等分光器分光器从含有各种波长的混合光从含有各种波长的混合光中中获得纯度较高的单色光来测量获得纯度较高的单色光来测量未知溶液的浓度的未知溶液的浓度的仪器称为分光仪器称为分光光度计。光度计。分光光度计的结构和使用分光光度计的结构和使用 722722型分光光度计原理图和仪器图型分光光