分析方法验证ppt课件

1、Validation of Analytical Method分析方法验证分析方法验证内容内容分析方法验证的法规要求ICH、USP、ChP和EP中的方法验证分析方法验证的要求分析方法验证步骤分析方法验证胜利的前提分析方法验证留意要点含量分析方法验证接受规范方法确认和方法传送分析方法验证的法规要求分析方法验证的法规要求 中国GMP2020、中国药典非常关注验证的过程, 分析方法验证不完善是常见的问题。 药质量量规范中分析方法必需验证 药物消费工艺变卦、制剂的组分变卦、原分析方法进展修订时，那么质量规范分析方法必需进展验证。 ICH Q2R1 Validation of Analytical Pr

2、ocedures EU GMP Volume 4 Analytical method shall be validated, all testing operations described in the marketing authorisation should be carried out according to the approved method. FDA cGMP 21 CFR 211. Test method, which are used for assessing compliance of pharmaceutical articles with established

3、 specifications, must meet proper standards of accuracy and reliability.分析方法验证的法规要求分析方法验证的法规要求 中国GMP2020对分析方法验证规定： 符合以下情形之一的，应对检验方法进展验证： 采用新的检验方法 检验方法需变卦的 采用中国药典未收载的检验方法 法规规定的其他需求验证的检验方法 对不需求进展验证的检验方法，企业应进展方法确认，以保证检验数据准确、可靠 2021版药典中分析方法验证指点原那么附录XIX A只规定了工程和根本方法而没有合格规范, ICH 和USP 类似ICH、USP、CP和和EP中的方法验

4、证中的方法验证 ICH Q2R1：Validation of analytical Procedures: Text and Methodology - 2005/11ICH Q2A： Text on Validation of Analytical Procedure Parent Guideline - 1994/10ICH Q2B: Validation of Analytical Procedures: Methodology Developed to complement the Parent guideline - 1996/11 USP Validation of Compend

5、ial Procedures 中国药典附录XIX A 药质量量规范分析方法验证指点原那么 European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare PA/PH/OMCL 05 47 DEF Validation of Analytical Procedures 2005/06分析方法验证的要求分析方法验证的要求 目的：证明所用的分析方法适宜于相应的目的：证明所用的分析方法适宜于相应的检测要求检测要求 需验证的分析工程需验证的分析工程 鉴别实验鉴别实验 杂质定量或限制检查，原料或制剂中有效杂质定量或限制检查，原料或制剂中

6、有效成分含量测定成分含量测定 制剂中其它成分降解产物、防腐剂的制剂中其它成分降解产物、防腐剂的测定测定 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法的测试方法分析方法验证的要求分析方法验证的要求 验证内容： 准确度 精细度反复性、中间精细度和重现性 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性准确度准确度 Accuracy准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用回收率%表示。测定回收率R recovery的详细方法可采用“回收实验法和“加样回收实验法。数据要求：规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次。

7、准确度准确度 Accuracy 回收实验 空白+量A的对照品测定, 测定值为M 加样回收实验 已准确测定药物含量P的真实样品+量A的对照品或规范品测定，测定值为M%100AMR空白回收率%100APMR准确度准确度 Accuracy含量测定方法的准确度原料药可用纯度的对照品或样品进展测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进展比较制剂可用含己知量被测物的各组分混合物进展测定，即采用在空白辅料中参与原料药对照品的方法；如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中参与量的被测物进展测定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果精细度精细度 Precision精细度是指在规定条件下，同一个均匀样

8、品，经屡次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏向d、规范偏向SD、相对规范偏向RSD变异系数，CV表示偏向d：丈量值与平均值之差规范偏向SD：相对规范偏向RSD：xxdi1)(2nxxSDi%100 xSDRSD精细度精细度 Precision 反复性repeatability：在一样条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精细度； 在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次 把被测物浓度当作100%，至少测6次进展评价 中间精细度Intermediate Precision：同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精细度 三人三机 重现性reprodu

9、cibility：不同实验室，不同分析人员测定结果的精细度 数据要求：需报告SD，RSD和置信区间。专属性专属性 Specificity专属性指有其他成分杂质、降解物、辅料等能够存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定才干，是指该法用于复杂样品分析时能否遭到相互关扰程度的度量通常是经过分析含有加了杂质、降解产物、有关化学物质或抚慰剂成分的样品，将所获分析结果与未加前述成分之样品的测试结果进展比较，两组测试结果之差即专属性专属性专属性 Specificity鉴别反响-应能与能够共存的物质或构造类似化合物区别，不含被分析的样品，以及构造类似或组

10、分中的有关化合物，均应呈负反响含量测定和杂质测定-色谱法和其他方法，应附代表性图谱，亦阐明专属性。图中应标明各组份的位置，色谱法中的分别度应符合要求杂质可获得的情况下，对于含量测定，试样中可参与杂质或辅料，调查测试结果能否受干扰；对于杂质测定，也可向试样中参与一定量的杂质，调查杂质间能否得到分别；反之那么需用其他方法进展比较。色谱峰纯度实验二极管阵列，质谱检测限检测限 Detection Limit, LOD检测限是指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。它是限制检验效能目的，无需定量测定，只需指出高于或低于该规定浓度即可。非仪器分析目视法： 用浓度的被测物，实验出能被可靠

11、地检测出的最低浓度或量信噪比法: 用于能显示基线噪音的分析方法仪器分析方法，是把低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进展比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。普通以信噪比3 1或2 1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限规范差法：测定背景10次以上，求出规范差b；将b乘以三倍；在任务曲线上求出3b相对应的浓度Xb；即为检出限；将求得的对应浓度值加上空白值空白值为0那么不加即得检出限。定量限定量限 Quantitation Limit, LOQ定量限是指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精细度要求非仪器分析目视法： 用浓度的被测物，实验出能被可靠地检测出的符合准确度

12、和精细度要求的最低浓度或量信噪比法：普通以信噪比S/N为10 1时相应的浓度或注入仪器的量进展确定，也可用仪器所测空白背景呼应规范差SD的10倍为估计值，再经实验确定方法的实践测定下限线性线性 Linearity线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。线性在分析方法的范围内进展评价。线性关系应以信号对被分析物的浓度或含量作图，根据图形能否呈线性进展评价，再用最小二乘法处置数据求得回归曲线的斜率Slope来表示。必要时可对呼应信号进展数学转换。数据要求：至少需求五个浓度调查线形，需提供相关系数、y截距是检定的能够偏向、回归斜率及方差等参数，应列出回归方程数和线性图

13、范围范围 Range范围是指到达一定精细度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的详细运用和线性、准确度、精细度结果和要求确定。原料药和制剂含量测定范围为80%-120%；制剂含量均匀度范围为70%-130%；杂质测定应为被测杂质报告值到限制的120%；溶出度应为测定范围的20%，如规定了限制范围，应为下限的-20%至上限的+20%，例如缓释片1h70%, 那么验证范围定为0-90%。耐用性耐用性 Robustness耐用性又称粗放度，是指测定条件稍有变动时，结果不受影响的接受程度，为常规检验提供根据。是衡量实验室和任务人员之间在正常情况下实验结果重现

14、性的尺度; 假设方法易遭到分析条件的影响，或要求苛刻，应注明。典型的变动包括：分析溶液的稳定性用不同时间段的样品和规范品溶液与新制的规范品溶液的对比结果来分析溶液的稳定性提取时间耐用性耐用性 Robustness液相色谱的典型变动：流动相PH0.5流动相组成有机相5%色谱柱同一厂家的三个批号，或两个不同厂家同固定相和填充物，尺寸温度20-25C和流速10%检测波长5nm气相色谱的典型变动：色谱柱同一厂家的三个批号，或两个不同厂家同固定相和填充物，尺寸温度流速检验工程和验证内容总结检验工程和验证内容总结中国药典要求鉴别鉴别杂质定杂质定量测定量测定杂质限杂质限度测定度测定含量含量溶出度溶出度等等准

15、确度准确度XOXOO精细度精细度-反复反复性性XOXOO精细度精细度-中间中间精细度精细度XOXOO专属性专属性OOOOO检测限检测限XXOXX定量限定量限XOXXX线性线性XOXOO范围范围XOXOO耐用性耐用性OOOOO中国药典检验工程和验证内容总结检验工程和验证内容总结鉴别鉴别Cat IV杂质定杂质定量测定量测定Cat II杂质限杂质限度测定度测定Cat II含量含量Cat I溶出度溶出度等等Cat III准确度准确度XO*O*精细度精细度XOXOO专属性专属性OOOO*检测限检测限XXOX*定量限定量限XOXX*线性线性XOXO*范围范围XO*O*USP注：* 根据详细情况予以验证分析

16、方法验证步骤分析方法验证步骤预验证验证方案的制定验证目的、背景设备设备、试剂、对照品、样品信息待验证的方法、工程、可接受规范施行人员及培训参考文献验证的施行搜集完好的验证过程记录和原始图谱数据和记录复核验证结果评价验证报告根据验证报告制定检验规范分析方法验证胜利的前提分析方法验证胜利的前提1经过培训的验证明施人员2仪器曾阅历证确认、校准并在校准有效期内3可靠稳定的对照品建议运用法定机构提供的可靠稳定的实验试剂分析方法验证留意要点分析方法验证留意要点预验证预验证是指在正式验证前进展的实验，目的是搜集证据，以初步证明该检验方法可以到达预期要求，同时确定各个工程的可接受规范。空白样空白样是指根据样品

17、的特性、配方和工艺过程，制备除了不含被测物外其他组成与样品完全一致的模拟样品。取样效率取样效率仅用于清洁验证所用检验方法的验证，是指用棉签或特定溶剂从设备外表获取的被测物的量与设备外表被测物的实践含量接近的程度，以回收率%表示。含量测定方法验证的可接受规范含量测定方法验证的可接受规范 准确度准确度各浓度下的平均回收率均应在各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间之间9个回收率数据的相对规范差个回收率数据的相对规范差RSD应应不大于不大于2.0%。 精细度精细度1反复性：反复性：6份供试液含量的相对规范差应不大份供试液含量的相对规范差应不大于于2.0%。2中间精细度：中间精细度：1

18、2个含量数据的相对规范差应不个含量数据的相对规范差应不大于大于2.0%。 专属性专属性空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分别，分别度不得小于全分别，分别度不得小于2.0。 检测限检测限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。 定量限定量限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。含量测定方法验证的可接受规范含量测定方法验证的可接受规范 线性线性回归线的相关系数回归线的相关系数R不得小于不得小于0.998，Y轴截距轴截距应在应在100呼应值的呼应值的2以内，呼应因子的相对规以内，呼

19、应因子的相对规范差应不大于范差应不大于2.0%。 耐用性耐用性主峰的拖尾因子不得大于主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必需，主峰与杂质峰必需到达基线分别；各条件下的含量数据到达基线分别；各条件下的含量数据n=6的相的相对规范差应不大于对规范差应不大于2.0%。 系统顺应性系统顺应性主峰峰面积的相对规范差应不大于主峰峰面积的相对规范差应不大于2.0%，主峰保，主峰保管时间的相对规范差应不大于管时间的相对规范差应不大于1.0%。另外，主峰。另外，主峰的拖尾因子不得大于的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必需到达，主峰与杂质峰必需到达基线分别，主峰的实际塔板数应符合质量规范的基线分别，主峰

20、的实际塔板数应符合质量规范的规定。规定。分析方法确认分析方法确认方法确认是一种简化了的方法验证，目的是为了确认药典方法或其他曾阅历证的方法能否适用于实践运用环境。各国药典和行业法规收载的检验方法从外部引入的曾阅历证的检验方法以往老产品的检验方法，原厂无力或无法进展方法传送方法确认普通应进展准确度、反复性、专属性测试。USP Verification of Compendial Procedures分析方法传送分析方法传送分析方法传送转移是指一方将曾阅历证的方法传送转移给另一方的过程。方法传送主要进展不同实验室在一定时限内对同一份样品的重现性测试的结果比对。微生物分析方法验证微生物分析方法验证微生物方法验证内容：无菌制剂微生物检测方法验证非无菌制剂微生物检测方法验证防腐剂