实验室生物安全【精品-ppt】ppt课件

1、实验室生物安全、细菌接种技术实验室生物安全、细菌接种技术和革兰染色和革兰染色新乡医学院微生物学教研室新乡医学院微生物学教研室办公电话：办公电话：30291303029130监督电话：监督电话：30299453029945EMailEMail：1.实验一（实验一（5 5个学时）个学时）1.1.课件首页留任课教师的联系方式以及科教科联系电话（课件首页留任课教师的联系方式以及科教科联系电话（3029945）2.2.本次实验目的本次实验目的 （1 1）通过介绍实验室生物安全方面的相关知识，在医学实践中树立）通过介绍实验室生物安全方面的相关知识，在医学实践中树立 “有菌的意识，无菌操作的观念有菌的意识，

2、无菌操作的观念” 以保证工作的安全顺利。以保证工作的安全顺利。 （2 2） 掌握细菌接种的无菌操作技术掌握细菌接种的无菌操作技术 （3 3）掌握革兰染色实验方法并进行细菌基本形态和特殊结构的观察。）掌握革兰染色实验方法并进行细菌基本形态和特殊结构的观察。3.3.实验内容（实验内容（3 3个）个） （1 1）实验室生物安全）实验室生物安全 (0.5(0.5学时学时) ) 熟悉熟悉 （1 1）微生物学实验室生物安全意义）微生物学实验室生物安全意义 （2 2）实验室规则）实验室规则 2.v例一：例一：19561956年，前苏联的一个实验室曾有年，前苏联的一个实验室曾有9 9支装有感染了委内瑞拉马脑炎

3、病毒的支装有感染了委内瑞拉马脑炎病毒的鼠脑的安瓿被打破。由于没采取必要的措施，结果在几天内造成鼠脑的安瓿被打破。由于没采取必要的措施，结果在几天内造成2424名工作人员名工作人员感染。感染。v例二：例二：19981998年，我国某大城市的某高校在使用大白鼠进行试验时，有两名学生年，我国某大城市的某高校在使用大白鼠进行试验时，有两名学生被大白鼠咬伤，还有一些学生在给实验老鼠放血、解剖的过程中，未按照要求被大白鼠咬伤，还有一些学生在给实验老鼠放血、解剖的过程中，未按照要求戴手套操作，结果在戴手套操作，结果在2929名实验人员中，有名实验人员中，有 9 9人感染了流行性出血热人感染了流行性出血热v可

4、用实验室感染事件的发生引入，说明关注实验室生物安全的重要性，以微生物学实验室可用实验室感染事件的发生引入，说明关注实验室生物安全的重要性，以微生物学实验室相关规则为主，相关注意事项一定要交代清楚。相关规则为主，相关注意事项一定要交代清楚。3医学微生物学实验室规则医学微生物学实验室规则v学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下反折，要学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下反折，要经常清洗消毒。经常清洗消毒。v进实验室时随带书包、衣物等与实验无关物品一律存放指定进实验室时随带书包、衣物等与实验无关物品一律存放指定的储物柜内。的储物柜内。v严禁在实验室进食、饮水和喧哗打闹。严禁在实验室进食

5、、饮水和喧哗打闹。v手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要时用消毒液泡手；手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要时用消毒液泡手；避免有菌材料溅出；避免有菌材料溅出；破损器材及时处理并报告破损器材及时处理并报告。v实验过程中避免一切不良的个人习惯；实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的废料要操作中产生的废料要扔在指定容器内扔在指定容器内；实验完毕清理台面，值日生严格认真打扫；实验完毕清理台面，值日生严格认真打扫卫生，关闭水电，门窗，洗手后离开实验室。卫生，关闭水电，门窗，洗手后离开实验室。4实验室意外紧急处理办法实验室意外紧急处理办法v1 1 皮肤破损：去除异物，生理盐水或蒸馏水洗净后皮肤破

6、损：去除异物，生理盐水或蒸馏水洗净后2% 2% 碘酊或碘酊或2%2%红汞涂红汞涂抹。抹。v2 2 烧伤：局部涂凡士林，烧伤：局部涂凡士林，2%2%鞣酸或鞣酸或2%2%苦味酸。苦味酸。v3 3 化学药品腐蚀伤：若强酸则先用大量清水冲洗，再用碳酸氢钠溶液洗化学药品腐蚀伤：若强酸则先用大量清水冲洗，再用碳酸氢钠溶液洗涤中和；若强碱则先用大量清水冲洗，再用涤中和；若强碱则先用大量清水冲洗，再用2%2%硼酸洗涤中和（若伤处为硼酸洗涤中和（若伤处为眼部加用橄榄油或者液体石蜡眼部加用橄榄油或者液体石蜡1 12 2滴滴眼）。滴滴眼）。v4 4 菌液入口：立即吐入消毒容器内，菌液入口：立即吐入消毒容器内，1 1

7、：10001000高锰酸钾或高锰酸钾或3%3%双氧水漱口，双氧水漱口，根据菌种服用抗菌药物。根据菌种服用抗菌药物。v5 5 菌液污染台面：菌液污染台面：2%3% %来苏尔或来苏尔或0.1%0.1%新洁尔灭覆盖新洁尔灭覆盖3030分钟后抹去，皮分钟后抹去，皮肤手指沾染活菌应用上述液体浸泡肤手指沾染活菌应用上述液体浸泡3 3分后肥皂和清水洗净。分后肥皂和清水洗净。v6 6 火警：勿慌，立即关闭电闸和煤气闸。若酒精乙醇乙醚等有机溶剂起火警：勿慌，立即关闭电闸和煤气闸。若酒精乙醇乙醚等有机溶剂起火切不可用水扑救，可用沙土等物扑灭。火切不可用水扑救，可用沙土等物扑灭。5（2 2）无菌操作技术（）无菌操作

8、技术（1.51.5学时）学时） 实验目的实验目的 1 1 掌握常用的细菌接种方法掌握常用的细菌接种方法 2 2 熟悉细菌生长现象的观察方法熟悉细菌生长现象的观察方法 一、培养基一、培养基 概念概念: :是人工配制的专供微生物生长繁殖的混合是人工配制的专供微生物生长繁殖的混合 营养物制品。营养物制品。 成分：成分：充足的营养物质（水分、碳源、氮源、无机盐）；合适的充足的营养物质（水分、碳源、氮源、无机盐）；合适的PHPH； 适宜的温度；适宜的气体环境。适宜的温度；适宜的气体环境。 用途：用途：用于微生物的繁殖及分离接种，传代或保存，鉴别微生物的类用于微生物的繁殖及分离接种，传代或保存，鉴别微生物

9、的类 属，研究微生物的生理及生化特性，制造菌苗、疫苗或其他微属，研究微生物的生理及生化特性，制造菌苗、疫苗或其他微 生物制剂等。生物制剂等。6二、分类主要用于增菌用于检测动力及保存菌种用于分离鉴定细菌7双糖铁培养基S-S培养基普通琼脂培养基血液琼脂培养基 庖肉培养基8三、细菌的接种技术三、细菌的接种技术v介绍接种环及其无菌操作使用方法介绍接种环及其无菌操作使用方法v普通琼脂培养基接种法普通琼脂培养基接种法 1.1.平板分区划线接种法：平板分区划线接种法：分离培养细菌，通过此法可以分离培养细菌，通过此法可以获得纯培养为进一步鉴定细菌提供条件。获得纯培养为进一步鉴定细菌提供条件。 2.2.斜面接种

10、法：斜面接种法：用于纯菌的移种，可短时间保存菌种。用于纯菌的移种，可短时间保存菌种。9分区划线v划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.v第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/41/5.v划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复.v每次划完后应灭菌.1011123.3.半固体穿刺接种法：半固体穿刺接种法：保存菌种或观察细菌的动力和生化反应保存菌种或观察细菌的动力和生化反应4.4.液体接种法：液体接种法：用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培养基用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培养基 的接种的接种13四、生长现象

11、的观察四、生长现象的观察v固体培养基固体培养基- -菌落菌落 一个细菌不断分裂而成的细菌群体称之。观察菌落的形态、大一个细菌不断分裂而成的细菌群体称之。观察菌落的形态、大小、表面、边缘、湿度、透明度；在血平板上还要观察溶血情况和小、表面、边缘、湿度、透明度；在血平板上还要观察溶血情况和色素等。色素等。14半固体培养基半固体培养基- -鞭毛鞭毛 观察细菌的运动观察细菌的运动15三. 细菌 在 液体培 养基中的生长 情 况菌 膜菌 沉 淀均匀浑 浊对照液体培养基液体培养基- -生长生长混浊生长（大多数细菌）混浊生长（大多数细菌）沉淀生长（链球菌）沉淀生长（链球菌）膜样生长（专性需氧菌，膜样生长（专

12、性需氧菌，如结核分枝杆菌、枯草杆如结核分枝杆菌、枯草杆菌）菌）16（3 3）细菌的形态学检查（）细菌的形态学检查（3 3学时）学时）形态学检查分类形态学检查分类 一、不染色标本检查一、不染色标本检查( (活体）活体）( (简单介绍简单介绍) ) 悬滴法悬滴法 压滴法压滴法 二、染色标本检查二、染色标本检查 单染法：简单染色，一种染料单染法：简单染色，一种染料 （美兰染色）（美兰染色） 复染法：复杂染色，两种以上染料（革兰染色、抗酸染色）复染法：复杂染色，两种以上染料（革兰染色、抗酸染色） A.A.革兰染色革兰染色(Gram stain)(Gram stain)（每个学生一张玻片）（每个学生一张

13、玻片） 实验目的实验目的 1 1、掌握细菌涂片标本的制备及革兰染色的方法、掌握细菌涂片标本的制备及革兰染色的方法 2 2、熟悉革兰染色的原理和临床意义、熟悉革兰染色的原理和临床意义 17v18841884年由丹麦医师年由丹麦医师GramGram创立创立v革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床上具有非常重要的意义上具有非常重要的意义18 实验实验原理原理 （重点讲解通透性学说）（重点讲解通透性学说） 器材和试剂器材和试剂 1 1、菌种、菌种 白色葡萄球菌白色葡

14、萄球菌 大肠杆菌大肠杆菌 2 2、试剂、试剂 革兰染色液革兰染色液 初染液初染液 结晶紫结晶紫 媒染液媒染液 卢戈氏碘液卢戈氏碘液 脱色液脱色液 95%95%乙醇乙醇 复染液复染液 稀释石碳酸复红稀释石碳酸复红 3 3、其它、其它 接种环接种环 载玻片载玻片 染色盘染色盘 洗液瓶洗液瓶 酒精灯等酒精灯等19冲洗染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果若学生没用过油镜观察标本，请示教油镜的使用方法。若学生没用过油镜观察标本，请示教油镜的使用方法。方法与步骤方法与步骤 1、细菌涂片的制备、细菌涂片的制备 涂片涂片 干燥干燥 固定固定

15、2、染色、染色 初染（结晶紫）初染（结晶紫） 媒染（卢戈氏碘液）媒染（卢戈氏碘液） 脱色脱色（95%乙醇）乙醇） 复染（稀释石碳酸复红）复染（稀释石碳酸复红） 吸水纸吸水纸吸干吸干 1min1min30s30s冲洗冲洗冲洗冲洗冲洗冲洗20 结果（图片展示） 意义 注意事项（提醒学生将实验后的玻片放入 指定的消毒缸中） 注：油镜的使用方法1.寻找视野：寻找视野：在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。将需进一步放大的部分移到视野的中心。2.增大光照强度：增大光照强度：将聚光器上升到最高位置，光圈开到最大。将聚光器

16、上升到最高位置，光圈开到最大。3.转高倍镜头、滴加镜油、换油镜头：转高倍镜头、滴加镜油、换油镜头：转动转换器，使高倍镜头转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。21物物 镜镜工作距离工作距离(mm)(mm)低倍目镜低倍目镜105.40高倍目镜高倍目镜400.39油镜头油镜头1000.11224.调试观察：调试观察：观

17、察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。如果不出现物象或者目标不理想要重新寻找，在加止。如果不出现物象或者目标不理想要重新寻找，在加油区之外重找时应按：低倍油区之外重找时应按：低倍高倍高倍油镜程序。在加油区油镜程序。在加油区内重找应按：低倍内重找应按：低倍油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。污镜头。5.清洗镜头：清洗镜头：油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上和标本油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上和标本上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯（或乙醚）擦去残上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯（或乙醚）擦去残余的香柏油，最后再

18、用干擦镜纸擦干净。余的香柏油，最后再用干擦镜纸擦干净。23 透镜 折光率 油 1.515 1.0 空气 玻 1.52 璃 空 气 油镜原理示意图油镜原理示意图24 细菌的特殊结构（示教）细菌的特殊结构（示教）（二毛荚一胞）（二毛荚一胞）25 实验报告实验报告一、目的一、目的二、原理（主要通透性）二、原理（主要通透性）三、材料三、材料四、方法四、方法五、五、结果（结果（2+3幅图）幅图）六、意义六、意义七、注意事项七、注意事项26作业重点作业重点1 1、绘制所涂片染色的、绘制所涂片染色的G G+ +及及G G- -菌的形态图并注明放大倍菌的形态图并注明放大倍数（红蓝铅笔）数（红蓝铅笔）2 2、绘

19、制示教片中各细菌特殊结构形态图并注明放大、绘制示教片中各细菌特殊结构形态图并注明放大 倍数（铅笔）倍数（铅笔）27v预习下周实验内容：预习下周实验内容：v消毒灭菌，内毒素检测，肠道致病菌分离培养消毒灭菌，内毒素检测，肠道致病菌分离培养28Mub%Ks9!Jq8ZHo6YFn4WDl3UCj1TAi+Ryg-Pxe(Nvd&Mtb$Ks9!Iq7ZHo6XFn4WDl2UCj1SAh+Ryg)Pwe(Nvc&Ltb$Kr9#Iq7ZGo6XFm4VDl2UBj0SAh+Qyf)Pwe*Nuc&Lta$Kr9#Ip7ZGo5XEm4VDk2TBj0Szh-Qyf)Owe*N

20、uc%Lta$Jr8#Ip7YGn5XEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf)Owd*Muc%Lsa!Jr8#Hp6YGn5WEl3VCk1TBi0Rzg-Qxf(Ovd*Mub%Ksa!Jq8ZHp6YFn5WEl3UCk1TAi+Rzg-Pxe(Ovd&Mtb%Ks9!Jq8ZHo6YFn4WDl3UCj1SAi+Ryg)Pxe(Nvc&Mtb$Ks9!Iq7ZHo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg)Pwe(Nvc&Ltb$Kr9#Iq7ZGo5XFm4VDk2UBj0SAh+Qyf)Pwe*Nuc&Lta$Jr9#Ip7YGo5XEm3VDk2TBj0

21、Szh-Qyf)Owd*Nuc%Lsa$Jr8#Hp7YGn5XEm3VCk2TBi0Rzh-Qxf(Owd*Mub%Lsa!Jr8#Hp6YGn5WEl3VCk1TAi0Rzg-Pxf(Ovd&Mub%Ksa!Jq8ZHp6YFn4WEl3UCj1TAi+Ryg-Pxe(Ovd&Mtb%Ks9!Iq8ZHo6XFn4WDl2UCj1SAi+Ryg)Pxe(Nvc&Mtb$Kr9!Iq7ZGo6XFm4WDl2UBj1SAh+Qyg)Pwe*Nvc&Lta$Kr9#Ip7ZGo5XFm4VDk2UBj0Szh+Qyf)Owe*Nuc%Lta$Jr9#Ip7YGo

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24、VCk1TBi0Rzg-Qxf(Owd*Mub%Lsa!Jq8#Hp6YFn5WEl3UCk1TAi0Rzg-Pxf(Ovd&Mub%Ks9!Jq8ZHo6YFn4WDl3UCj1TAi+Ryg-Pxe(Nvd&Mtb$Ks9!Iq7ZHo6XFn4WDl2UCj1SAh+Ryg)Pwe(Nvc&Ltb$Kr9!Iq7ZGo6XFm4VDl2UBj0SAh+Qyf)Pwe*Nvc&Lta$Kr9#Ip7ZGo5XEm4VDk2TBj0Szh-Qyf)Owe*Nuc%Lta$Jr8#Ip7YGn5XEm3VCk2TBi0Szh-Qxf)Owd*Muc%Lsa!Jr

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26、zg-Pxf(Ovd&Mub%Ks9!Jq8ZHo6YFn4WDl3UCj1TAi+Ryg-Pxe(Nvd&Mtb$Ks9!Iq7ZHo6XFn4WDl2UCj1SAh+Ryg)Pwe(Nvc&Ltb$Kr9#Iq7ZGo6XFm4VDl2UBj0SAh+Qyf)Pwe*Nuc&Lta$Kr9#Ip7ZGo5XEm4VDk2TBj0Szh-Qyf)Owe*Nuc%Lta$Jr8#Ip7YGn5XEm3VCk2TBi0Szh-Qxf)Owd*Muc%Lsa!Jr8#Hp6YGn5WEl3VCk1TBi0Rzg-Qxf(Ovd*Mub%Ksa!Jq8%Ks9!Jq8

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