实验一细菌形态结构的观察

1、 医学微生物学实验医学微生物学实验Experiment of Medical Microbiology 基础医学院病原生物学教研室基础医学院病原生物学教研室 基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室 杨致邦杨致邦 2010.1 教材教材高等医学院校基础医学实验教学系列教材高等医学院校基础医学实验教学系列教材 病原生物学实验病原生物学实验 科学出版社，科学出版社，2008年年6月月 主编主编 杨致邦杨致邦 叶彬叶彬掌握病原生物学的基本方法与基本操作技术；掌握病原生物学的基本方法与基本操作技术；强化实验室生物安全观念，强化实验室生物安全观念，掌握无菌

2、操作技术；掌握无菌操作技术；加深对病原生物学基本理论知识的理解与认识；加深对病原生物学基本理论知识的理解与认识；培养独立操作、独立观察和思考、独立分析问题和培养独立操作、独立观察和思考、独立分析问题和解决实际问题的能力；解决实际问题的能力；增强科技创新能力；增强科技创新能力；培养严谨的作风、科学的方法和严肃认真的工作态培养严谨的作风、科学的方法和严肃认真的工作态度。度。 实验教学的目标实验教学的目标临床医学本科实验内容及安排临床医学本科实验内容及安排实验课的带教内容学时数 显微镜录像1 细菌形态观察 4 需要2细菌的生长现象与消毒灭菌 4 有3 致病性球菌 4 需要有4 肠道杆菌 4 有5 白

3、喉杆菌、厌氧菌4 需要6 四体、真菌、病毒 4 需要有临床药学本科实验内容及安排临床药学本科实验内容及安排实验课的带教内容实验课的带教内容学时数学时数 显微镜显微镜录像录像1 细菌形态观察细菌形态观察 4 4 需要需要2细菌的生长现象与消毒灭细菌的生长现象与消毒灭菌菌 4 4 有有3 致病性球菌致病性球菌 4 4 需要需要有有4 药物的微生物检测药物的微生物检测4 45 药物的敏感性实验药物的敏感性实验46 四体、真菌、病毒四体、真菌、病毒 4 4 需要需要有有非临床医学本科实验内容及安排非临床医学本科实验内容及安排实验课内容实验课内容学学时时数数显微显微镜镜录像录像1 1细菌形态细菌形态结构

4、的结构的观察观察 4 4 需要需要2 2细菌的细菌的生长现象与消生长现象与消毒灭菌毒灭菌 4 4 有有3 3四体、真菌、病毒四体、真菌、病毒 4 4 需要需要有有实验一实验一细菌形态结构的观察细菌形态结构的观察 Observe on Morphology and Structure of Bacteria【目的要求目的要求】1.1.熟悉实验室生物安全规则熟悉实验室生物安全规则,掌握无菌操作技术；掌握无菌操作技术；2.掌握细菌标本革兰染色的操作步骤和方法；掌握细菌标本革兰染色的操作步骤和方法；显微镜显微镜( (油镜油镜) )下细菌形态的观察下细菌形态的观察; ; 革兰染色结果革兰染色结果判断；判

5、断；3.掌握细菌的特殊结构（荚膜、鞭毛、芽孢）的掌握细菌的特殊结构（荚膜、鞭毛、芽孢）的形态特点。形态特点。【实验内容实验内容】1.1.实验室生物安全规则实验室生物安全规则(P3) ；2.2.细菌标本革兰染色细菌标本革兰染色观察观察（Grams Stain)()(每人做）每人做） (P10) ；3.3.复习显微镜复习显微镜( (油镜油镜) )的使用的使用( (每人做）；每人做）； 4.4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜） (P104) 。【实验材料【实验材料】 (1)菌种菌种: 葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。葡萄球菌、大肠杆菌斜面

6、培养物。 (2)试剂试剂:革兰染色液。革兰染色液。 (3)其他其他:生理盐水、载玻片、酒精灯、接种环、显微镜、香生理盐水、载玻片、酒精灯、接种环、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯等。柏油、擦镜纸、二甲苯等。【实验方法【实验方法】1 1细菌涂片的制作细菌涂片的制作步骤：步骤：涂片涂片 干燥干燥 固定固定 注意点：注意点：1）无菌操作）无菌操作2）加生理盐水（固体培养物）加生理盐水（固体培养物）生理盐水 生理盐水 生理盐水 + + +葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌 +大肠杆菌载玻片2.革兰染色革兰染色1)方法方法初染初染: 结晶紫和碳酸氢钠各结晶紫和碳酸氢钠各13滴滴,3s-5s，水冲净，水冲净,甩干

7、。甩干。媒染媒染: 碘液碘液13滴滴,3s-5s秒钟，水冲净秒钟，水冲净,甩干。甩干。脱色脱色: 95%乙醇数滴乙醇数滴,5s-10s, 水冲净水冲净,甩干。甩干。复染复染: 稀释石炭酸复红液稀释石炭酸复红液13滴滴,10s，水冲净，水冲净,甩干。甩干。关键步骤：关键步骤：掌握脱色程度。掌握脱色程度。【结果观察【结果观察】指标指标: :形态、形态、染色性、排列。染色性、排列。染色性判断：染色性判断：革兰阳性菌染成蓝紫色革兰阳性菌染成蓝紫色, , 革兰阴性菌染成红色。革兰阴性菌染成红色。3.观察观察标本片自然干燥或在酒精灯标本片自然干燥或在酒精灯火焰上烤干后火焰上烤干后,在涂菌处滴加在涂菌处滴加

8、1滴香柏油滴香柏油,油镜下观察。油镜下观察。Grams Stain,1000葡萄球菌:革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列。大肠杆菌:革兰阴性杆菌,不规则分散排列。Grams Stain,1000 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察注意点：注意点：观察时只能动显微镜的微调观察时只能动显微镜的微调,不要动位置。不要动位置。要求：要求：画图记录。画图记录。1）破伤风杆菌的芽胞）破伤风杆菌的芽胞:芽胞染色1000鞭毛染色1000 2)变形杆菌的鞭毛变形杆菌的鞭毛:3)肺炎链球菌的荚膜肺炎链球菌的荚膜:荚膜染色1000【实验注意点【实验注意点】1.生物安全、无

9、菌操作生物安全、无菌操作,菌种管清理；菌种管清理；2.显微镜显微镜(油镜油镜)的使用的使用用后擦镜头；用后擦镜头；3.用过的载玻片放进有消毒水的玻缸。用过的载玻片放进有消毒水的玻缸。4.做好清洁卫生。做好清洁卫生。【实验报告内容【实验报告内容】1.细菌标本革兰染色观察（方法、结果画图、讨细菌标本革兰染色观察（方法、结果画图、讨论）；论）；2. 细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）观察（画细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）观察（画图）。图）。【实验报告示范【实验报告示范】实验一实验一 细菌形态结构的观察细菌形态结构的观察【实验内容【实验内容】1.实验室生物安全规则（每人掌握）；实验室生物安全规则（每人

10、掌握）；2.细菌标本革兰染色观察（细菌标本革兰染色观察（Grams Stain)(每人做）；每人做）；3.复习显微镜复习显微镜(油镜油镜)的使用的使用(每人做）；每人做）； 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）。细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）。【实验材料和方法【实验材料和方法】一、细菌标本革兰染色观察一、细菌标本革兰染色观察1细菌涂片的制作细菌涂片的制作菌种：菌种：葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物方法：方法：涂片涂片 干燥干燥 固定固定 1）涂片：在酒精灯火焰旁用接种环无菌操作取生理盐水和葡）涂片：在酒精灯火焰旁用接种环无菌操作取生理盐

11、水和葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物，涂抹、混匀于载玻片上，如萄球菌、大肠杆菌斜面培养物，涂抹、混匀于载玻片上，如下图：下图：生理盐水 生理盐水 生理盐水 + + +葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌 +大肠杆菌3）固定）固定将载玻片以均匀的速度通过酒精灯火焰来回将载玻片以均匀的速度通过酒精灯火焰来回3次。次。2）干燥）干燥将涂片在酒精灯火焰上方约将涂片在酒精灯火焰上方约20cm高处烤干。高处烤干。2.革兰染色革兰染色1)方法方法初染初染: 结晶紫和碳酸氢钠各结晶紫和碳酸氢钠各13滴滴,3s-5s，水冲净，水冲净,甩干。甩干。媒染媒染: 碘液碘液13滴滴,3s-5s秒钟，水冲净秒钟，水冲净,甩干。甩干。

12、脱色脱色: 95%乙醇数滴乙醇数滴,5s-10s, 水冲净水冲净,甩干。甩干。复染复染: 稀释石炭酸复红液稀释石炭酸复红液13滴滴,10s，水冲净，水冲净,甩干。甩干。3.观察观察将标本片在酒精灯火焰上烤干后将标本片在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加在涂菌处滴加1滴香柏油滴香柏油,油镜下观察。油镜下观察。4.结果结果见图见图1:葡萄球菌:革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列大肠杆菌:革兰阴性杆菌,不规则分散排列Grams Stain,1000图图1：细菌标本细菌标本革兰染色观察革兰染色观察结果结果5.讨论讨论 本实验结果表明本实验结果表明,通过革兰染色在油镜下通过革兰染色在油镜下可清楚地观察到标本片上细菌的形态、染色可清楚地观察到标本片上细菌的形态、染色性和排列状态。革兰染色可将细菌分为性和排列状态。革兰染色可将细菌分为2大大类，即染成蓝紫色的革兰阳性菌和染成红色类，即染成蓝紫色的革兰阳性菌和染成红色的革兰阴性菌。其原理是革兰阳性菌和革兰的革兰阴性菌。其原理是革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞壁结构的差异。阴性菌细胞壁结构的差异。 结果不正确的影响因素分析：结