第六章 微生物的生长及控制

1、第一节第一节 测定生长繁殖的方法测定生长繁殖的方法第二节第二节 微生物的生长规律微生物的生长规律第三节第三节 影响微生物生长的主要因素影响微生物生长的主要因素第四节第四节 微生物培养法概论微生物培养法概论第五节第五节 有害微生物的控制有害微生物的控制第六章第六章 微生物的生长及其控制微生物的生长及其控制 Microbial Growth and Control合适的外界条件，吸收营养物质，进行代谢。合适的外界条件，吸收营养物质，进行代谢。个体的生长个体的生长原生质的总量（重量、体积、大小）就不断增加原生质的总量（重量、体积、大小）就不断增加群体内各个个体的进一步生长群体内各个个体的进一步生长群

2、体的生长群体的生长个体生长 个体繁殖 群体群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖 数量量第一节第一节 测定生长繁殖的方法测定生长繁殖的方法一、一、 测生长量测生长量二、二、 计繁殖数计繁殖数1、 直接法直接法测体积法测体积法(粗放粗放)称干重法称干重法(精确精确)2、，、， 间接法间接法比浊法：分光光度法比浊法：分光光度法(OD)生理指标法：测含氮量生理指标法：测含氮量1、 直接法：直接法：用血球计数板在显微镜下进行计数用血球计数板在显微镜下进行计数二、二、 计繁殖数计繁殖数2、 间接法间接法：用平板菌落进行的活菌计数：用平板菌落进行的活菌计数菌数菌数/mL = cfu X 稀释度稀释度 X 1

3、0第二节第二节 微生物的生长规律微生物的生长规律一、一、 微生物的个体生长和同步生长微生物的个体生长和同步生长三、三、 微生物的连续培养方法微生物的连续培养方法二、二、 微生物的典型生长曲线微生物的典型生长曲线一、一、 微生物的个体生长和同步生长微生物的个体生长和同步生长同步培养（synchronous culture）：即设法使群体中的所有细胞尽可能都处于同样细胞生长和分裂同期中，然后分析此群体的各种生物化学特征，从而了解单个细胞所发生的变化。同步生长通过通过同步培养同步培养的手段而使细的手段而使细胞群体中各个体处于分裂步调胞群体中各个体处于分裂步调一致的生长状态；一致的生长状态；生长曲线的

4、制作生长曲线的制作：接种接种适温培养适温培养定时取样测定时取样测定生长量定生长量二、单细胞微生物的典型生长曲线二、单细胞微生物的典型生长曲线(growth curve)将少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中后，将少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中后，在适宜的温度、通气（厌氧菌除外）等条件下，它们的群在适宜的温度、通气（厌氧菌除外）等条件下，它们的群体会有规律地生长起来。每隔一定时间取样，测菌细胞数体会有规律地生长起来。每隔一定时间取样，测菌细胞数目。以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间作横坐标，目。以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间作横坐标，可以画出一条有规律的曲线

5、即可以画出一条有规律的曲线即单细胞微生物的典型生长曲单细胞微生物的典型生长曲线线。生长曲线代表了单细胞微生物在新的环境中从开始生长曲线代表了单细胞微生物在新的环境中从开始生长生长、分裂分裂直至直至死亡死亡的整个动态变化过程。的整个动态变化过程。培养时间培养时间(h)I 延滞期延滞期II 指数期指数期III 稳定期稳定期IV 衰亡期衰亡期0生生长长速速度度总菌数总菌数活菌数活菌数IIIIIIIVlg细胞数细胞数(个个/ml)微生物的典型生长曲线微生物的典型生长曲线(growth curve) 延滞期延滞期 (lag phase) 对外界不良条件例如对外界不良条件例如NaCl溶液浓度、温度和抗生素

6、等化溶液浓度、温度和抗生素等化学药物的反应敏感。学药物的反应敏感。 指少量微生物接种到新鲜培养液中后，在开始培养的指少量微生物接种到新鲜培养液中后，在开始培养的一段时间内细胞数目不增加的时期。一段时间内细胞数目不增加的时期。 生长速率常数生长速率常数R等于零。等于零。 细胞形态变大或增长。细胞形态变大或增长。 细胞内细胞内RNA尤其是尤其是rRNA含量增高，原生质呈嗜碱性。含量增高，原生质呈嗜碱性。 合成代谢活跃，核糖体、酶类和合成代谢活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加快，易产的合成加快，易产生诱导酶。生诱导酶。影响延滞期长短的因素影响延滞期长短的因素（1）接种龄）接种龄（2）接种量）接种量（

7、3）培养基成分）培养基成分 延滞期延滞期 (lag phase)出现延滞期的原因？出现延滞期的原因？把细菌接种到新鲜的培养基中培养时，并不立即进行分裂繁殖，细菌增殖数为0，这时需要合成多种酶，辅酶和某些中间代谢产物，要经过一个调整和适应过程 。延滞期出现原因缩短延滞期的意义和方法接种对数生长期的菌种，采用最适菌龄 加大接种量用与培养菌种相同组成分的培养基 指数期指数期 (exponential phase) 是指在生长曲线中，紧接着延滞期的一段细胞数以是指在生长曲线中，紧接着延滞期的一段细胞数以几何级数增长的几何级数增长的时期。时期。 生长速率常数生长速率常数R最大，代时最大，代时G最短；最短

8、； 整个群体的生理特性较一致；整个群体的生理特性较一致； 酶系活跃，代谢旺盛。酶系活跃，代谢旺盛。 细胞各成分平衡增长，生长速率恒定；细胞各成分平衡增长，生长速率恒定；三个重要参数三个重要参数（1）繁殖代数）繁殖代数(n)（2）生长速率常数）生长速率常数(R)（3）代时）代时(G) 指数期指数期 (exponential phase)G = (tG = (t2 2-t-t1 1) / n) / n = (t = (t2 2-t-t1 1) / 3.322(lgX) / 3.322(lgX2 2-lgX-lgX1 1) ) R = 1 /GR = 1 /G = 3.322 (lgX = 3.32

9、2 (lgX2 2-lgX-lgX1 1) / (t) / (t2 2-t-t1 1) ) X X2 2 = X= X1 1 2 2n n 两边取对数：两边取对数：lgXlgX2 2 = lgX= lgX1 1 + nlg2 + nlg2 （lg2lg2 =0.301）n = 3.322 ( lgX2 - lgX1)n = 3.322 ( lgX2 - lgX1) 指数期指数期 (exponential phase)x2x1t1t2影响代时长短的因素影响代时长短的因素（1）菌种）菌种（2）营养成分）营养成分（3）营养物浓度）营养物浓度（4）培养温度）培养温度细胞数或菌体量细胞数或菌体量时间时间

10、8.0mg/ml6.0mg/ml4.0mg/ml2.0mg/ml1.0mg/ml0.5mg/ml0.2mg/ml营养物浓度对生长速度和菌体产量的影响营养物浓度对生长速度和菌体产量的影响 指数期指数期 (exponential phase)指数期的实践意义指数期的实践意义 稳定期稳定期(stationary phase)又称恒定期或最高生长期。处于稳定期的微生物，新增殖的又称恒定期或最高生长期。处于稳定期的微生物，新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等，整个培养物中二者处于细胞数与老细胞的死亡数几乎相等，整个培养物中二者处于动态平衡，此时的生长速度又逐渐趋向零。动态平衡，此时的生长速度又逐渐趋向

11、零。出现原因营养的消耗营养物比例失调有害代谢产物积累PH值等理化条件不适 稳定期稳定期(stationary phase)生长速率常数生长速率常数R=0，即新繁殖的细胞数与衰亡的细，即新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等；胞数相等；菌体产量达到最高点，且产量与营养物质的消耗出现菌体产量达到最高点，且产量与营养物质的消耗出现有规律的比例关系，用生长产量常数有规律的比例关系，用生长产量常数Y表示；表示；Y = (X-XY = (X-X0 0) / C) / C0 0-C-C = (X-X = (X-X0 0) / C) / C0 0 X ：稳定期的细胞干重(g/ml培养液）X0 ：刚接种时的细胞干重C

12、0 ：限制性营养物的最初浓度(g/ml)C ： 稳定时期限制性营养物的浓度 菌体产量与营养物质的消耗间呈现出有规律的比例菌体产量与营养物质的消耗间呈现出有规律的比例关系。关系。 细胞内开始积聚糖原、异染颗粒和脂肪等内含物；细胞内开始积聚糖原、异染颗粒和脂肪等内含物；芽孢杆菌一般在这时开始形成芽孢；芽孢杆菌一般在这时开始形成芽孢； 通过复杂的次生代谢途径合成各种次生代谢物。通过复杂的次生代谢途径合成各种次生代谢物。通过对稳定期到来原因的研究，促进了连续培养原理的提通过对稳定期到来原因的研究，促进了连续培养原理的提出和工艺、技术的创建；出和工艺、技术的创建；对以生产菌体或与菌体生长相平行的代谢产物

13、对以生产菌体或与菌体生长相平行的代谢产物(SCP(SCP、乳酸、乳酸) )等等为目的的一些发酵生产来说，稳定期是产物的最佳收获期：为目的的一些发酵生产来说，稳定期是产物的最佳收获期：是对维生素、碱基和氨基酸等生长因子进行生物测定的最佳是对维生素、碱基和氨基酸等生长因子进行生物测定的最佳测定时期；测定时期；稳定期的实践意义稳定期的实践意义细菌死亡率逐渐增加，以致死亡数大大超过新生细菌死亡率逐渐增加，以致死亡数大大超过新生数，群体中活细菌的数目急剧下降，出现数，群体中活细菌的数目急剧下降，出现“负生负生长长”，此阶段叫衰亡期，又称死亡期。，此阶段叫衰亡期，又称死亡期。 IV 衰亡期衰亡期 (dea

14、th phase)IV 衰亡期衰亡期 (death phase)1、特点：、特点：（1）细胞死亡数增加，死亡数大大超过新增殖的细胞数，细胞死亡数增加，死亡数大大超过新增殖的细胞数，群体中的活菌数目急剧下降，出现群体中的活菌数目急剧下降，出现“负生长负生长” （ R0 ） ；（2）细胞出现多形态，畸形或衰退形；细胞出现多形态，畸形或衰退形；（3）因菌体本身产生的因菌体本身产生的水解水解酶及代谢产物的作用，使菌体酶及代谢产物的作用，使菌体死亡、自溶等。死亡、自溶等。（4）有的微生物进一步合成或释放次生代谢物。）有的微生物进一步合成或释放次生代谢物。（5）芽孢杆菌在此期释放芽孢等。）芽孢杆菌在此期释

15、放芽孢等。影响衰亡期的因素及实践意义影响衰亡期的因素及实践意义与菌种的遗传特性有关与菌种的遗传特性有关: 有些细菌的培养经历所有的有些细菌的培养经历所有的各个生长时期，几天以后死亡各个生长时期，几天以后死亡, 有些细菌培养几个月乃有些细菌培养几个月乃至几年以后仍然有一些活的细胞；至几年以后仍然有一些活的细胞；与是否产芽孢有关：产芽孢的细菌更易于幸存下来；与是否产芽孢有关：产芽孢的细菌更易于幸存下来；与营养物质和有毒物质有关：补充营养和能源，以及与营养物质和有毒物质有关：补充营养和能源，以及中和环境毒性，可以减缓死亡期细胞的死亡速率，延中和环境毒性，可以减缓死亡期细胞的死亡速率，延长细菌培养物的

16、存活时间。长细菌培养物的存活时间。不立即繁殖不立即繁殖繁殖速度繁殖速度最快最快出生率等于死出生率等于死亡率亡率, ,活菌数活菌数最大最大, ,代谢产代谢产物大量积累物大量积累死亡超过死亡超过繁殖繁殖适应新环境适应新环境条件适宜条件适宜生存条生存条件件开始恶开始恶化化生存条件生存条件极度恶化极度恶化代谢活跃代谢活跃, ,体体积增长较快积增长较快个体形态和个体形态和 生理特性稳定生理特性稳定有些种有些种类类出现芽出现芽孢孢出现畸变出现畸变与菌种和培与菌种和培养条件有关养条件有关生产用菌种生产用菌种科研材料科研材料改善和控改善和控制条件制条件, ,延延长稳定期长稳定期细胞裂解细胞裂解释放产物释放产物

17、三、三、 微生物的连续培养方法微生物的连续培养方法分批培养：将微生物置于一定容积的定量的培养基中培分批培养：将微生物置于一定容积的定量的培养基中培养，培养基一次性加入。不再补充和更换，最后一次性收养，培养基一次性加入。不再补充和更换，最后一次性收获。获。连续培养：在微生物培养的过程中，不断地供给新鲜的连续培养：在微生物培养的过程中，不断地供给新鲜的营养物质，同时排除含菌体及代谢产物的发酵液，让培养营养物质，同时排除含菌体及代谢产物的发酵液，让培养的微生物长时间地处于对数生长期，以利于微生物的增殖的微生物长时间地处于对数生长期，以利于微生物的增殖速度和代谢活性处于某种稳定状态。速度和代谢活性处于

18、某种稳定状态。分批培养与连续培养的比较分批培养与连续培养的比较 是一种根据培养器内是一种根据培养器内微生物的生长密度微生物的生长密度，并，并借光电控制系统来控制培养液流速，使细菌培借光电控制系统来控制培养液流速，使细菌培养液保持恒定的连续培养方法；养液保持恒定的连续培养方法；主要用于获得大量菌体或与菌体相平行的代主要用于获得大量菌体或与菌体相平行的代谢产物。谢产物。1. 1. 恒浊器恒浊器 (turbidostat)(turbidostat) 2 2、恒化器、恒化器 (chemostat)(chemostat)是一种设法使是一种设法使培养液的流速保持不变培养液的流速保持不变，并使，并使微生物始

19、终在低于其最高生长速率的条件下进微生物始终在低于其最高生长速率的条件下进行繁殖的连续培养装置；行繁殖的连续培养装置；主要获得不同生长速率的菌体；主要获得不同生长速率的菌体；装置装置恒浊器恒浊器恒化器恒化器控制对象控制对象菌体密度菌体密度( (内控制内控制) )培养基流速培养基流速( (外控制外控制) )培养基培养基无限制生长因子无限制生长因子有限制生长因子有限制生长因子培养基流速培养基流速不恒定不恒定恒定恒定生长速率生长速率最高速率最高速率低于最高速率低于最高速率产物产物大量菌体或与菌体相平大量菌体或与菌体相平行的代谢产物行的代谢产物不同生长速率的菌体不同生长速率的菌体应用范围应用范围生产为主

20、生产为主实验室为主实验室为主连续培养的优缺点n优点优点n高效高效n自控自控n产品质量稳定产品质量稳定n节约动力、人力、水和蒸汽等节约动力、人力、水和蒸汽等n缺点缺点n菌种容易退化菌种容易退化n容易污染杂菌容易污染杂菌n营养物的利用率低于单批培养营养物的利用率低于单批培养第三节第三节 影响微生物生长的主要因素影响微生物生长的主要因素一、一、 温度温度二、二、 氧气氧气三、三、 pH值值温度是影响微生物生长的一个重要因子。温度是影响微生物生长的一个重要因子。 微生物的三种类型微生物的三种类型( (温度）温度） 专性好氧菌（专性好氧菌（ 必须有氧存在必须有氧存在） 好氧菌好氧菌 微好氧菌（微好氧菌（

21、有氧无氧均可，但有氧更好有氧无氧均可，但有氧更好） 兼性好氧菌（兼性好氧菌（只在较低的氧分压下生长只在较低的氧分压下生长 ） 耐氧厌氧菌（耐氧厌氧菌（不需氧，但有氧也能生存，不需氧，但有氧也能生存， 氧无毒害氧无毒害） 厌氧菌厌氧菌 ( (专性专性) )厌氧菌（厌氧菌（氧有毒害，甚至致死氧有毒害，甚至致死） 好氧菌好氧菌 兼性好氧菌兼性好氧菌 厌氧菌厌氧菌 耐氧菌耐氧菌 微好氧菌微好氧菌 厌氧菌体内无SOD(超氧化物歧化酶)，因此受生物体内普遍存在的超氧阴离子自由基的毒害作用。厌氧菌的氧毒害机制厌氧菌的氧毒害机制 SOD学说：学说：H2O+1/2O22H2O2O2-+2H+H2O2+O2SOD

22、一切好氧生物一切好氧生物 及耐氧菌及耐氧菌过氧化氢酶过氧化氢酶一切好氧生物一切好氧生物NADH2NAD过氧化物酶过氧化物酶耐氧菌耐氧菌 (一一) 嗜中性微生物嗜中性微生物 生长的生长的pH范围是范围是pH5.8.0，最适生长，最适生长pH近中性近中性（pH7.0）。大多数细菌属于嗜中性微生物。）。大多数细菌属于嗜中性微生物。（二）嗜酸性微生物（二）嗜酸性微生物 最适生长最适生长pH在在5.5以下生长的微生物称之为嗜酸以下生长的微生物称之为嗜酸性微生物。性微生物。 （三）嗜碱性微生物（三）嗜碱性微生物 生长的生长的pH范围是范围是pH7.011.5，最适生长，最适生长pH在在8.0以上。以上。

23、NH4+被吸收被吸收NO3-被吸收被吸收pHpH调节调节治标治标治本治本过酸时：过酸时：过碱时：过碱时：加加NaOHNaOH、Na2CO3Na2CO3等碱液中和等碱液中和过碱时：加过碱时：加H2SO4H2SO4、HClHCl等酸液中和等酸液中和过酸时过酸时过碱时过碱时加适当氮源：加尿素、加适当氮源：加尿素、NaNO3NaNO3、NH4OHNH4OH或蛋白质或蛋白质提高通气量提高通气量加适当碳源：加糖、乳酸、醋酸、柠加适当碳源：加糖、乳酸、醋酸、柠檬酸或油脂等檬酸或油脂等降低通气量降低通气量第四节第四节 微生物培养方法概论微生物培养方法概论微生物培养方法微生物培养方法生产实践生产实践实验室培养法

24、实验室培养法固体培养固体培养好氧菌的培养好氧菌的培养厌氧菌的培养厌氧菌的培养液体培养液体培养好氧菌的培养好氧菌的培养厌氧菌的培养厌氧菌的培养固体培养固体培养好氧菌的培养好氧菌的培养厌氧菌的培养厌氧菌的培养液体培养液体培养好氧菌的培养好氧菌的培养厌氧菌的培养厌氧菌的培养固体培养固体培养试管斜面试管斜面培养皿琼脂平板培养皿琼脂平板液体培养液体培养试管液体培养试管液体培养三角瓶浅层液体培养三角瓶浅层液体培养摇瓶培养（振荡培养）摇瓶培养（振荡培养）台式发酵罐培养台式发酵罐培养高层琼脂柱高层琼脂柱厌氧罐技术厌氧罐技术厌氧手套箱厌氧手套箱第五节第五节 有害微生物的控制有害微生物的控制消 毒（ 部 分 杀

25、灭 ）杀 菌 溶 菌灭 菌（ 彻 底 杀 灭 ）杀 灭防 腐（ 抑 制 霉 腐 微 生 物 ）化 疗（ 抑 制 宿 主 体 内 病 原 菌 ）抑 制除 菌控 制 有 害 菌 的 措 施 采用采用强烈的理化因素强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。例如各种高温灭菌措施等。丧失其生长繁殖能力的措施。例如各种高温灭菌措施等。总菌数总菌数活菌数活菌数细细胞胞数数的的对对数数细细胞胞数数的的对对数数时间时间时间时间杀菌杀菌溶菌溶菌 消毒是一种采用消毒是一种采用较温和的理化因素较温和的理化因素，仅杀死物体表，仅杀死物体表面或内部一部分对人体

26、有害的病原菌，而对被消毒的面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。物体基本无害的措施。 举例：举例：一些常用的对皮肤、水果、饮用水进行药剂消毒一些常用的对皮肤、水果、饮用水进行药剂消毒的方法；的方法；对啤酒、牛奶、果汁和酱油等进行消毒处理的巴对啤酒、牛奶、果汁和酱油等进行消毒处理的巴氏消毒法等；氏消毒法等； 防腐就是利用某种理化因素完全防腐就是利用某种理化因素完全抑制抑制霉腐微生物的生霉腐微生物的生长繁殖，从而达到防止食品等发生霉腐的措施。长繁殖，从而达到防止食品等发生霉腐的措施。防腐的常用措施防腐的常用措施低温低温缺氧缺氧干燥干燥高渗高渗高酸度高酸度防腐剂防腐剂 它

27、是利用具有高度选择毒力（它是利用具有高度选择毒力（selective toxicityselective toxicity，即对病原菌具有高度毒力而对宿主无显著毒性）的化学物即对病原菌具有高度毒力而对宿主无显著毒性）的化学物质来质来抑制抑制宿主体内病原微生物的生长繁殖，借以达到治疗宿主体内病原微生物的生长繁殖，借以达到治疗该传染病的一种措施。该传染病的一种措施。用于化疗目的的化学物质称化学治疗剂；用于化疗目的的化学物质称化学治疗剂；一些重要的化学治疗剂种类：一些重要的化学治疗剂种类：各种抗生素各种抗生素磺胺类药物磺胺类药物中草药中的有效成分等中草药中的有效成分等比较项目比较项目灭菌灭菌消毒消毒

28、防腐防腐化疗化疗处理因素处理因素强理、化因素强理、化因素理、化因素理、化因素理、化因素理、化因素化学治疗剂化学治疗剂处理对象处理对象 任何物体内外任何物体内外的一切微生物的一切微生物物体表面的物体表面的病原菌病原菌物体内外的物体内外的一切微生物一切微生物宿主体内的宿主体内的病原菌病原菌作用效果作用效果 彻底杀灭彻底杀灭杀死或抑制杀死或抑制抑制或杀死抑制或杀死抑制或杀死抑制或杀死实例实例加压蒸汽灭菌，加压蒸汽灭菌，辐射灭菌，杀辐射灭菌，杀菌剂菌剂70%70%酒精消毒，酒精消毒，巴氏消毒法巴氏消毒法冷藏、干燥、冷藏、干燥、糖渍、盐腌、糖渍、盐腌、缺氧、防腐缺氧、防腐剂剂抗生素、磺抗生素、磺胺药、生

29、物胺药、生物药物素药物素（一）物理方法（一）物理方法高温灭菌高温灭菌火焰灼烧法烘箱热空气灭菌法干热灭菌法巴氏消毒法煮沸消毒法间歇灭菌法高压蒸汽灭菌法湿热灭菌（消毒）法高温灭菌（消毒）法烘箱内热空气灭菌法烘箱内热空气灭菌法 150170 12h 彻底杀灭细菌；彻底杀灭细菌； 适用于金属和玻璃器皿的灭菌；适用于金属和玻璃器皿的灭菌；火焰灼烧法火焰灼烧法 仅适用于接种环、接种针的灭菌或带病原菌的材料、仅适用于接种环、接种针的灭菌或带病原菌的材料、动物尸体的烧毁等。动物尸体的烧毁等。干热灭菌法1、热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强；、热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强；2、热蒸汽比热空气穿透力更强；、热蒸汽比

30、热空气穿透力更强；3、蒸汽存在潜热，当气体转变成液体时可放出大量热量；、蒸汽存在潜热，当气体转变成液体时可放出大量热量；4、可迅速提高灭菌物体的温度。、可迅速提高灭菌物体的温度。相同温度下，湿热灭菌比干热灭菌好；湿热灭菌法湿热灭菌法一种低温湿热消毒法。 80100 ，1560 min 杀灭所有微生物的营养体； 37 或室温保温过夜，诱发芽孢萌发为营养体； 重复上述步骤三次，在较低的灭菌温度下彻底灭菌； 适用于不耐热培养基的灭菌。高压蒸汽灭菌锅构造高压蒸汽灭菌锅构造1 1、压力表、压力表2 2、安全阀、安全阀3 3、放气阀、放气阀4 4、软管、软管5 5、紧固螺栓、紧固螺栓6 6、灭菌桶、灭菌桶

31、7 7、筛架、筛架8 8、水、水手提式高压蒸汽灭菌锅手提式高压蒸汽灭菌锅1、加水至止水线；、加水至止水线；2、灭菌物品包裹好；、灭菌物品包裹好；3、开启放气阀；、开启放气阀；4、加热排气；、加热排气；5、达到预定表压，开始计时；、达到预定表压，开始计时；6、关闭热源，当压力降至、关闭热源，当压力降至0.05MPa时，缓慢开启放气阀。时，缓慢开启放气阀。高压蒸汽灭菌锅使用方法高压蒸汽灭菌锅使用方法4、过滤、过滤1、低温、低温冷藏法冷藏法冷冻法冷冻法2、辐射：紫外线、电离辐射和强可见光等、辐射：紫外线、电离辐射和强可见光等3、干燥和渗透压（高渗）、干燥和渗透压（高渗）过滤除菌过滤除菌（二）（二）

32、化学方法杀菌化学方法杀菌1. 表面消毒剂(surface disinfactant)类型类型名称及使用浓度名称及使用浓度作用机制作用机制应用范围应用范围醇类醇类70-75%乙醇乙醇使膜损伤、蛋白质使膜损伤、蛋白质变性变性皮肤、器械皮肤、器械醛类醛类0.5-10%甲醛甲醛破坏蛋白质氢键或破坏蛋白质氢键或氨基氨基物品消毒，接种箱、物品消毒，接种箱、接种室的熏蒸接种室的熏蒸酚类酚类3-5%石炭酸石炭酸蛋白质变性，损伤蛋白质变性，损伤细胞膜细胞膜地面、家具、器皿地面、家具、器皿表面活性表面活性剂类剂类0.05-0.1%新洁而灭新洁而灭蛋白质变性、破坏蛋白质变性、破坏细胞膜细胞膜皮肤、粘膜、手术皮肤、粘

33、膜、手术器械器械染料染料2-4%龙胆紫龙胆紫与蛋白质羧基结合与蛋白质羧基结合皮肤、伤口皮肤、伤口氧化剂类氧化剂类0.1%高锰酸钾高锰酸钾氧化蛋白质的活性氧化蛋白质的活性基团基团皮肤、尿道皮肤、尿道3%双氧水双氧水污染物件表面污染物件表面重金属类重金属类2%红汞红汞与蛋白质的巯基结与蛋白质的巯基结合使失活合使失活皮肤、伤口皮肤、伤口0.1-0.5%硫酸铜硫酸铜植物病原菌植物病原菌酸碱类酸碱类5-10%醋酸醋酸破坏细胞膜和蛋白破坏细胞膜和蛋白质质房间消毒房间消毒常用表面消毒剂及应用影响消毒剂作用的因素消毒剂消毒剂种类种类浓度浓度作用时间作用时间细菌细菌菌龄菌龄种类种类 环境环境有机物有机物温度温度

34、酸碱度酸碱度 是指那些能够特异性地作用于某些微生物并是指那些能够特异性地作用于某些微生物并具有选择性毒性的化学药剂；具有选择性毒性的化学药剂；根据来源分为两类：根据来源分为两类：人工合成人工合成(主要是一些生长因子类似物主要是一些生长因子类似物)抗代谢药物：磺胺类药物抗代谢药物：磺胺类药物；微生物产生微生物产生抗生素抗生素2、 化学治疗剂 (chemotherapeutant)（1）磺胺类药物 生长因子类似物 是第一个发现的生长因子类似物药物； 也是人类第一个成功地用于特异性抑制某种微生物的生长来治疗疾病的化学治疗剂。对氨基苯甲酸（对氨基苯甲酸（PABA） (正常代谢物）正常代谢物） 磺胺磺胺

35、 (代谢物拮抗物）代谢物拮抗物）磺胺类药物的杀菌机制PABA代谢类似物二氢叶酸二氢叶酸二氢叶酸合成酶二氢叶酸合成酶二氢叶酸还原酶二氢叶酸还原酶四氢叶酸四氢叶酸辅酶辅酶F核酸合成核酸合成细菌体内合成叶酸细菌体内合成叶酸二氢蝶啶二氢蝶啶二氢蝶酸二氢蝶酸二氢蝶酸合成酶二氢蝶酸合成酶PABA Glu二氢叶酸二氢叶酸二氢叶酸合成酶二氢叶酸合成酶二氢叶酸还原酶二氢叶酸还原酶四氢叶酸四氢叶酸辅酶辅酶F核酸合成核酸合成磺胺药磺胺药TMP细菌体内叶酸合成受阻细菌体内叶酸合成受阻二氢蝶啶二氢蝶啶二氢蝶酸二氢蝶酸二氢蝶酸合成酶二氢蝶酸合成酶PABA假二氢叶酸假二氢叶酸TMP(三甲基苄二氨嘧啶三甲基苄二氨嘧啶)磺胺增

36、效剂磺胺增效剂 为什么磺胺对人体细胞无毒性？为什么磺胺对人体细胞无毒性？ 因为人缺乏从对氨基苯甲酸合成叶酸的相关酶因为人缺乏从对氨基苯甲酸合成叶酸的相关酶二氢蝶酸合成酶、二氢叶酸合成酶和二氢叶酸还原二氢蝶酸合成酶、二氢叶酸合成酶和二氢叶酸还原酶，故不能用外界提供的对氨基苯甲酸自行合成叶酶，故不能用外界提供的对氨基苯甲酸自行合成叶酸，而必须直接利用营养物中的叶酸做为生长因子。酸，而必须直接利用营养物中的叶酸做为生长因子。（2 2）抗生素）抗生素 (antibiotics)(antibiotics) 一类由微生物或其他生物生命活动过程中一类由微生物或其他生物生命活动过程中合成的次生代谢产物或其人工衍生物，它们合成的次生代谢产物或其人工衍生物，它们在很低浓度时就能抑制或干扰他种生物（包在很低浓度时就