枸杞延缓小鼠皮肤老化实验探究

1、枸杞延缓小鼠皮肤老化实验探究;作者：张华于学文杨学东白秀珍毕业论文【摘要】；目的：探讨枸杞延缓皮肤老化作用及其作用 机制。方法：昆明种小白鼠颈部注射d?半乳糖，复制亚急 性衰老模型。用黄11 票吟氧化酶法测定皮肤sod活力，用硫代 巴比妥酸（tba）法测定皮肤mda的量，用碱水解法测定皮 肤hop含量，用he染色法观察皮肤组织形态学改变。结果: 给药组小鼠皮肤sod活性明显增加，mda含量明显降低，胶 原蛋白含量明显增加，皮肤组织形态学检查结果与衰老模型 组比较显示真皮层成纤维细胞数量增加，胶原纤维排列紧 密，排列较规则。结论：枸杞可以延缓皮肤老化，浓度低 于20%时其作用随剂量增加而增强，当

2、浓度髙于20%时其延 缓老化作用随剂量增大而减弱。 毕业论文【关键词】；枸杞水煎剂；皮肤老化；d?半乳糖；sod； mda； hop毕业论文皮肤老化是整个机体衰老在皮肤上的反应，随着年龄的增加，衰老的最直观的变化即为皮肤。皮肤衰老不仅有损 于美容，且与许多皮肤病如脂溢性角化、日光性角化、基底 细胞癌、鳞状细胞癌的发生也有着病因学的关系。因此，预 防和延缓皮肤衰老已成为生命科学研究的热点之一。本研究 观察了外用枸杞水煎剂对d?半乳糖所致亚急性衰老模型小 鼠皮肤的作用，为中医药化妆品发展提供基础资料。毕业 论文1;材料毕业论文1?1;药品外用枸杞水煎剂的制备：取宁夏枸杞子 100g,用四分法将其缩

3、减至50g, 6（tc干燥后粉碎，称取40g 粉末加10倍量80%乙醇冷凝回流提取2次，每次lh （保持 微沸），8层纱布过滤；将药渣加8倍量水继续冷凝回流提取 3次，每次lh （保持微沸），收集滤液；合并3次滤液，于 旋转蒸发仪上浓缩至50mlo分别取一定量稀释至所需浓度 （1%、10%、20%、40%、80%）,加入一定量的氮酮（azone） 使氮酮浓度达到3%,备用。sod、mda、hop试剂盒、考马斯 亮蓝液均购于南京建成生物研究所;d?半乳糖购于amresco 公司；宁夏枸杞购于辽西国药店；其它试剂均为国产分析纯。 毕业论文1?2；实验动物昆明小白鼠80只月龄，雌雄各半，体 重263

4、0g,购自辽宁医学院实验动物中心。毕业论文1?3；仪器uv7517gd型紫外可见分光光度计（上海欣 益仪器仪表有限公司）；脱水机、包埋机、切片机、染色机（英国shandon公司）；旋转蒸发仪re?52 （上海安亭电 子仪器厂）；fdv高速风选式超细粉碎机（台湾佑崎机械制造 公司）；高速离心机（上海手术仪器厂）；电热恒温水浴箱（北 京光明医疗仪器厂）；xh?b型旋涡混匀器（姜堰市康健医疗 器具有限公司）；bs223s型电子天平（北京赛多利斯仪器系 统有限公司）。毕业论文2；方法毕业论文2?1；实验动物分组昆明小白鼠随机分成8组，每组 10只，自由食水lw后，背部剃毛2x2cm区域，以后每5天 剃

5、毛一次。按照表1给予处理因素，连续50d。毕业论文表1;实验动物分组（略）2?2；取材末次给药后将受试区域的被毛彻底剃干 净，乌拉坦（1. 5g/kg）麻醉取皮肤。毕业论文2?3；生化指标的测定毕业论文2?3?1；皮肤sod、mda含量的测定；（tc的生理盐水 中去除皮下脂肪，滤纸拭干，按1： 9的比例制生理盐水相 皮肤匀浆液，3000rpm离心15min,取上清备用，按试剂盒 说明进行操作。毕业论文2?3?2；皮肤hop含量的测定；乙瞇消化皮下脂肪， 滤纸拭干，按照试剂盒说明，碱水解法测皮肤hop含量。毕业论文2?4；组织学观察取受试皮肤，10%福尔马林固定， 常规石蜡切片，he染色，普通显

6、微镜下进行组织学观察。毕 业论文2?5；数据处理数据以均数土标准差表示，组间比较 用单因素方差分析。毕业论文3；结果3?1；皮肤sod、mda含量 毕业论文表2；皮肤sod、mda含量（略）毕业论文注：与对照组比较，#p&lt；0. 01；与衰老组和氮酮组比较,*p&lt；o. 05, *p&lt；o. 010 毕业论文3?2；皮肤hop含量及胶原蛋白含量毕业论文表3；皮肤hop含量及胶原蛋白含量（略）毕业论文注：与对照组比较，#p&lt；o. 01；与衰老组和氮酮组 比较,*p&lt；o. 05, *p&lt；o. 01 毕业论文图1;对照组（

7、x400）（略）毕业论文图2；衰老组（x400）（略）毕业论文图3；给药iii组（x400）（略）毕业论文3?3；皮肤形态学观察衰老组（图2）与对照组（图1）比 较，胶原纤维染色减弱，纤维变细且排列稀疏，表明胶原纤 维合成减少；表皮厚度变薄，角质层变厚。给药iii组（图3） 与衰老组（图2）比较，胶原纤维合成较模型组明显增加，表 皮厚度增厚，角质层变薄；真皮层成纤维细胞数量增加。毕 业论文4；讨论毕业论文老年动物饲养周期长，个体差异大，不易获得。而青 年小鼠长期注射d?半乳糖，由于其代谢产物半乳糖醇不能被 进一步代谢而堆积在细胞内，影响渗透压，导致细胞肿胀， 代谢紊乱，体内活性氧水平升高，细胞

8、脂质受损，以致产生 机体多器官、多系统的功能减退，这些变化均与老龄小鼠相 似。故本实验采用了 d?半乳糖所致的小鼠衰老模型1。由 表2、表3可知，连续颈部注射d?半乳糖50d后，其皮肤sod 值与对照组比较明显降低（p&lt；o. 01）,mda值与对照组比较 明显升高（p<0.01）；胶原蛋白含量明显增加 （p&lt；o. 01）o由图2和图1比较可知胶原纤维染色减弱， 纤维变细且排列稀疏；表皮厚度变薄，角质层变厚。表明衰 老模型制造成功。氮酮是近年来应用较为普遍的一种透皮吸 收促进剂。其特点是无色无臭，对人体粘膜产生最低刺激， 有效浓度低，对亲水亲油性药物均有

9、促进作用。它是通过增 加角质层类脂流动和溶解皮肤的类脂来增加药物的透皮吸 收2。本实验在不同浓度的枸杞水煎剂中加入3%的促渗 剂氮酮，使药效得到充分发挥。皮肤老化是机体衰老的外在 反映，机体的衰老源于细胞的衰老。关于皮肤的衰老学说有 很多，1956年，harman d 3提出了衰老的自由基学说， 该学说认为衰老是由于自由基引起的对细胞成分的进攻造 成的结果，维持体内适当水平的抗氧化剂和自由基清除剂水 平，可以延长寿命和推迟衰老。自由基具有极强的氧化能力, 可使生物膜中不饱和脂类发生过氧化，形成过氧化脂质，其 终产物mda是强的交联剂，与蛋白质、核酸或脂类结成难溶 性物质，使生物膜硬化导致通透性

10、降低，影响细胞物质交换, 继而使之破裂、死亡。而sod是最有效的抗氧化剂和自由基 清除剂，sod的活力高低间接反映了机体清除氧自由基的能 力。本实验给药组皮肤sod值明显高于衰老组(p&lt；0. 01), mda值明显低于衰老组(p&lt；0. 01),提示枸杞水煎剂能够激 活内源性防御自由基损伤的物质，抑制自由基。皮肤由表皮 和真皮组成。表皮的基底层细胞不断地进行细胞分裂，分裂 后的细胞不断地分化为其他各种表皮细胞，最后形成角质层 细胞。随着年龄增加，基底层细胞的分裂速度降低，导致表 皮中老化的细胞增多，角质层增厚和表面较粗糙等表皮老化 现象。由图3可知，给药组的角质层与表

11、皮厚度的比例小于 衰老组，这一结果证明枸杞水煎剂外用能使基底层细胞进行 细胞分裂，使表皮的角质层细胞以外的其他细胞延缓分化为 角质细胞，从而使表皮延缓衰老。胶原纤维是真皮中的主要 成分之一，具有支持、连接等作用。胶原纤维的主要成分是 胶原蛋白，对维持皮肤的张力和弹性起重要作用。務脯氨酸 是胶原蛋白的特征性氨基酸，约占胶原蛋白全部氨基酸残基 的13.4%。随着年龄增加，体内sod等清除自由基能力下降, 自由基大量增加可引起胶原蛋白交联、老化、失去弹性。本 实验显示，枸杞外用可使胶原纤维的体密度增加，从形态学 的角度证明了枸杞外用能使真皮的胶原纤维更新，它较生化 指标的测定具有更直接、客观的实际意义。综上所述，枸杞 水煎剂对皮肤有延缓衰老作用，其作用可能是通过下列途径 进行：增强和调节机体免疫功能，激活内源性防御自由基损 伤的物质sod,抑制自由基；对表皮是通过刺激表皮细胞分 裂进行的；对真皮通过作用于成纤维细胞和微血管，增加胶 原蛋白合成，从而延缓皮肤衰老。毕业论文;毕业论文【参考文献】;1龚国清，徐磅本.小鼠衰老模型研究.中国药科大学学报，1991