001纯化水、注射用水微生物限度检查方法学的验证方案

1、stp-zk-yz-fa-001-01纯化水、注射用水微生物限度检验法方法验证方案焦作市民康药业有限公司验证小组成员、培训情况列表组长部门姓名岗位中心化验室小组成员部门姓名岗位中心化齡率中心化验室中心化验室方案培训人部门岗位培训人培训日期屮心化骗宰验证方案培训情况列表部门冈位受培训人日期中心化验室中心化齡率中心化齡率培训效果评价目的范围错误!未定义书签。错误!未定义书签。参考文件人员职责文件确认错误!未定义书签。错误!未定义书签。错误!未定义书签。验证仪器校准的确认 验证内容 结论错误!未定义书签。错误!未定义书签。错误!未定义书签。再验证周期错误!未定义书签。确认报告批准错误!未定义书签。1

2、. 目的确认所采用的方法适用合本厂纯化水、注射用水的细菌、霉菌、酵母菌数的测定。照 此检查法和检验条件进行供试品细菌、霉菌、酵母菌数检查能保证检验结果的准确、可靠。2. 范围纯化水、注射用水微生物限度检查法的方法学验证薄膜过滤法3. 参考文件卫生部令第79号药品生产质量管理规范（2010年修订）中国药典2010年版二部4. 人员职责4.1质量副总：负责验证方案及方案的批准并组织协调验证工作、签发验证证书。4. 2组长4. 2. 1验证方案的起草。4. 2.2负责骑证的协调工作，以保证本骑证工作能按方案规定的程序进行。4. 2.3负责再验证周期的确认。4. 3检验人员：负责验证工作的具体实施。负

3、责各验证资料（检查结果）的收集整理。4.4质保部4. 4. 1负责验证方案和报告的审核。4. 4.2负责骑证文件的管理。5. 文件确认序号文件名称编号版本批准状态1mjx-150型霉菌培养箱操作维保规 程sop-zk-105-01第一版2dhp-9082型电热恒温培养箱操作 维保规程sop-zk-106-01第一版3yxq-ls-30sii型立式压力蒸汽灭 菌器操作维保规程sop-zk-119-01第一版4微生物限度检查法标准操作规程sop-zk-049-01第一版5a2型生物安全柜操作维保规程sop-zk-150-01第一版确认人日期复核人口期6.验证仪器校准的确认仪器名称型号生产厂家校准状

4、态电热恒温培养箱dh-600a北京科伟霉菌培养箱mjx-150上海申贤恒温设备厂立式压力蒸汽灭菌器yxq-ls-30s11上海博讯医疗设备厂生物安全柜a2河南天池确认人日期复核人日期7.验证内容7. 1被验证产品品名：纯化水、注射用水取样点：总出水口检验量：10ml7. 2验证方法：中国药典2010年版二部微生物限度检查一一薄膜过滤法。7. 3合格标准：3次独立的平行试验中，各试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率 均不得低于70%o7. 4细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证进行3次独立的平行试验，并分别计算各试 验菌每次试验的冋收率。7.4.1验证用稀释剂：0

5、.9%无菌氯化钠溶液、ph7.0无菌氯化钠一蛋白月东缓冲液7.4.2验证用培养基名称生产厂家厂家批号配制批号营养琼脂培养基营养肉汤培养基玫瑰红钠琼脂培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基7.4.3验证用菌株菌种名称菌种编号传代金黄色葡萄球菌cmcc(b) 26003)枯草芽抱杆菌(cmcc(b) 63501)白色念珠菌(cmcc (f) 98002)黑曲霉(cmcc(f)98003)大肠埃希菌(cmcc44 102)验证用菌株的传代次数不得超过5代(从菌种保藏屮心获得的冷冻干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 7.4.4试验用菌液的制备取经3035

6、°c培养1824小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽抱杆菌 营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中,10倍稀释至lo lo 7, 即约为50100cfu / ml的菌悬液备用。 取经2328°c培养2448小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物lml加入到 9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10?即约为50100cfu / ml的菌悬液备 用。 取经2328°c培养一周的黑曲霉菌斜而培养物，加入5ml含0. 05% (ml/ml)聚山 梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将抱子洗脫，然后吸出孑包子悬液，用垫有脱脂棉 的漏斗(湿热灭菌)

7、过滤，除去菌丝，收集泡子悬液至另一无菌试管内作为菌原 液，取此泡子悬液0.1ml加到9.9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，稀释至10巧约为50-100cfu / ml的菌悬液备用。7. 4.5供试品制备取供试品10ml,加ph7.0无菌氯化钠-蛋口月东缓冲液至100ml,混匀，再从中吸 10ml,分别加同种稀释剂至100ml,混匀，作为供试品溶液。7.4.6回收率测定试验组供试品组：取上述供试品溶液10份，分别加7.4.4的试验用菌液lml (50 loocfu),按薄膜过滤法操作，过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上 培养。每株试验菌平行制备2个平皿。 菌液组：取上述试验用的菌液lml

8、 (50loocfu),分别注入平ill!屮，立即倾注琼 脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按菌落计数法测定其菌数。供试品对照组：取上述供试品溶液4份，按薄膜过滤法操作，过滤，取出滤膜， 菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。每种培养基各制备2个平皿，测定供试品 本底菌数。 稀释剂对照组：取上述ph7.0无菌氯化钠一蛋白腺缓冲液loomllo份，分别加7.4.4 的试验用菌液lml (50loocfu),按薄膜过滤法操作，过滤，取出滤膜，菌面朝 上贴于琼脂培养基平板上培养。每株试验菌平行制备2个平皿。7. 4.7回收率计算试验组的菌回收率x100%试验组平均菌落数一供试品对照组平均菌落数_菌液组的平均菌落数稀释剂对照组的平均菌落数稀释剂对照组的菌回收率 =x100%菌液组的平均菌落数7.4.8测定结果细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证结果(见附表)。&结论依据确认结果，提出确认结论。9.再验证周期国家相关微牛物限度检查标准修改后需要对木方法重新进行再验证。10确认报告批准姓名部门日期起草人年 月曰审核人年 月 日批准人年 月口细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证记录供试品名称批号检验依据检验口期报告日期营养琼脂