动物的克隆t课件

1、1、动物细胞培养、动物细胞培养（一）动物细胞、组织培养（一）动物细胞、组织培养 动物组织动物组织分散成单个细胞分散成单个细胞培养培养细胞得以生存并保持细胞得以生存并保持生命活动现象生命活动现象生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等机械消化或胰酶消化机械消化或胰酶消化（1）定义）定义 动物组织在体外及人工条件下维持生活动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。状态或生长特性。2、动物组织培养、动物组织培养3.动物组织培养与动物细胞培养的关系动物组织培养与动物细胞培养的关系单个细胞单个细胞转入特殊培养液转入特殊培养液中进行中进行原代

2、培养原代培养细胞形成生长晕并增大细胞形成生长晕并增大分装到多个卡氏瓶中进分装到多个卡氏瓶中进行行传代培养传代培养细胞系细胞系有关概念有关概念:（2）连续细胞系）连续细胞系:（1）有限细胞系：）有限细胞系：连续细胞株连续细胞株有限细胞株有限细胞株细胞株细胞株-可连续传代的细胞可连续传代的细胞不能连续培养下去的细胞系不能连续培养下去的细胞系能连续培养下去的细胞系能连续培养下去的细胞系发生了转化：大多数具有异倍体核型，有的发生了转化：大多数具有异倍体核型，有的是恶性细胞系，具有异体致瘤性，有的获得是恶性细胞系，具有异体致瘤性，有的获得不死性（保留接触抑制，不致癌）不死性（保留接触抑制，不致癌）例：二

3、倍体细胞例：二倍体细胞通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞系中获得的具有系中获得的具有特殊性质特殊性质的细胞的细胞具有恒定的染色体组型、同工酶具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性。类型、病毒敏感性和生化特性。细胞系泛指可传代的细胞细胞系泛指可传代的细胞细胞株是具有特殊性质的细胞系细胞株是具有特殊性质的细胞系细胞系与细胞株的关系（3 3）动物组织培养的条件）动物组织培养的条件: :1.1.无菌无毒的环境无菌无毒的环境2.2.营养营养3.3.温度和温度和phph4.4.气体环境气体环境植物组织培养和动物组织培养的比较植物组织培养和动

4、物组织培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理培养基性质培养基性质培养基特有成分培养基特有成分培养结果培养结果细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 动物血清动物血清植物体植物体细胞株、细胞系细胞株、细胞系（三）克隆培养法（三）克隆培养法把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术1、定义：未经克隆的异质性细胞系未经克隆的异质性细胞系纯系：纯系：分离分离 克隆克隆经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源于一个共同的祖细胞

5、。于一个共同的祖细胞。2、产物:遗传性状均一、表现的性状相似的纯系遗传性状均一、表现的性状相似的纯系3、细胞克隆的基本要求:必须保证所建成的克隆来源于单个细胞必须保证所建成的克隆来源于单个细胞单细胞不如单细胞不如群体细胞群体细胞原代培养细胞和有限细胞系不如原代培养细胞和有限细胞系不如无限细胞系、转化细无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞胞系和肿瘤细胞4、克隆对象的选择、克隆对象的选择依据：依据：选择对培养环境具有较大适应范围和选择对培养环境具有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞。具有较强独立生存能力的细胞。5、提高细胞克隆形成率的措施、提高细胞克隆形成率的措施选择适宜的培养基、添加血清、以滋

6、养细胞支持生长、选择适宜的培养基、添加血清、以滋养细胞支持生长、激素刺激、使用激素刺激、使用co2培养箱调节培养箱调节ph6、细胞克隆的用途、细胞克隆的用途从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系，从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系，方便科学研究方便科学研究1.动物细胞全能性的表现程度动物细胞全能性的表现程度全能干细胞全能干细胞多能多能干干细胞细胞专能干细胞：专能干细胞：低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。无论分化或癌变，变化的都是表现型，基因组完整性可以保留无论分化或癌变，变化的都是表现型，基因组完整性可以保留2.动物难以克隆的原因动物难

7、以克隆的原因细胞的分化使得细胞发生了基因的差异表达，细胞的分化使得细胞发生了基因的差异表达，有的基因开放，有的基因关闭有的基因开放，有的基因关闭已分化的体细胞，基因组中基因的活动很不已分化的体细胞，基因组中基因的活动很不完全，不能像受精卵那样发挥细胞的全能性完全，不能像受精卵那样发挥细胞的全能性3.动物核移植实验和克隆繁殖动物核移植实验和克隆繁殖利用一个细胞的细胞核（核供体）来取代另利用一个细胞的细胞核（核供体）来取代另一细胞中的细胞核，形成重建的一细胞中的细胞核，形成重建的“合子合子”。 核移植：核移植：实践证明：实践证明：胚胎细胞核胚胎细胞核的移植成功的移植成功率远高于成率远高于成体细胞。体细胞。克隆羊培育过程克隆羊培育过程黑面绵羊去黑面绵羊去核卵细胞核卵细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激8细胞胚胎细胞胚胎胚胎移植胚胎移植另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利体细胞核移植技术实例体细胞核移植技术实例讨论讨论（阅