分离分析化学复习总结

1、学习必备欢迎下载分别分析化学复习总结其次章 .一蛋白质沉淀技术1. 盐析沉淀技术原理： 1）盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白质表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降；2 ）盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降；3 ）盐离子引起原本在蛋白质分子四周有序排列的水分子的极化，使水活度降低，导致蛋白质溶解度下降；两种常用方式： 1） ks 盐析粗提2） 盐析精制和纯化盐析影响因素： 1）无机盐的种类；2）蛋白质的浓度；3）温度； 4）ph适用性 ：盐析适用于蛋白质、酶、多肽、多糖、核酸等物质的分别纯化；（适用于一般蛋白质的分别纯化）1.

2、等电点沉淀原理： 蛋白质在ph为其等电点的溶液中净电荷为零，蛋白质之间静电排斥力最小，溶解度最低，易沉淀析出；适用性 ：等电点沉淀法适用于疏水性较大的蛋白质（如酪蛋白） ，而对于亲水性很强的蛋白质（如明胶） ，由于在水中溶解度较大，在等电点的ph下不易产生沉淀；2. 有机溶剂沉淀原理： 1）在蛋白质溶液中加入与水互溶的极性有机溶剂，降低水的介电常数，使蛋白质分子表面可解离基团的离子化程度减弱，水化程度降低， 促进了蛋白质分子的集合沉淀；2）是极性有机溶剂与蛋白质争夺水化水，而使蛋白质分子沉淀；适用性： 有机溶剂沉淀适用于蛋白质、酶、多糖、核酸等物质的提取；（分子质量较大的蛋白质）3. 挑选性热

3、变形沉淀原理 ：利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子对某些物理或化学因素敏锐性不同，而有挑选地使之变性沉析，以达到目的物与杂蛋白的分别适用性： 择性热变性沉淀法分别纯化热稳固性高的目标产物4. 絮凝技术原理： 通过静电引力、范德瓦尔斯力和氢键力的作用，使水溶性高分子聚合物剧烈地吸附在胶粒表面，产生了架桥连接，生成粗大的絮团絮凝处理对象：胶体或者接近胶体的细小悬浮物常用絮凝剂 ：聚丙烯酰胺衍生物、苯乙烯类衍生物、无机高分子聚合物絮凝剂、自然有机高分子絮凝剂（明胶，海藻酸钠，骨胶，壳聚糖）二其他基础学问1. 生成沉淀的类型：分级沉淀；共沉淀；均相沉淀2. 分级沉淀的次序取决于溶度积 和 离子浓度3.

4、共沉淀剂分为无机共沉淀剂和有机共沉淀剂4. 集合速率 和定向速率 影响着沉淀生成的类型和性状5. 均相沉淀法的主要途径：转变溶液的ph；在溶液中直接产生沉淀剂；逐步除去溶剂；破坏可溶性络合物学习必备欢迎下载第三章 .一萃取分别的基本参数1. 安排系数kd: 在肯定温度下，被萃取物在两相间的浓度之比为常数，称为被萃取物a的安排系数；公式： kd=ao/awao-被萃取物在有机相的平稳浓度2. 安排比 d：被萃取物a 在有机相中各种型体的总浓度与水相中各种型体的总浓度的比值；3. 萃取率 e：定义式： e=有机相中被萃取物的量/ 两相中被萃取物的量*100%如相比 r=vo/vw-1就 e=d/d

5、+r *100%当 vo=vw时，e=d/d+1*100%4. 少量多次萃取公式： mn=movw/dvo+vw n5. 重要的萃取体系：螯合物萃取体系：常用的形成螯合物的萃取剂有乙酰基丙酮、ddtc、丁二酮无一般是有机弱酸，用hr表示适用性：主要适用于微量和痕量物质的分别，不适用于常量物质的分别离子缔合物萃取体系：溶剂与被萃取物发生化学变化，形成可被萃取的物质，因此它既是萃取剂，又是溶剂，这样的溶剂为活性溶剂；三元络合萃取体系： 1）通过螯合、缔合形成三元络合物2）协同萃取体系（协萃体系）优点：萃取效率高、萃取速度快、挑选性好中性协作萃取体系6. 协同萃取体系：由于两种萃取剂同时使用，使萃取

6、效率比单独使用时大为提高的现象称为协同效应，这种萃取体系即协同萃取体系，简称协萃体系；7. 萃取过程的本质：将物质由亲水性转变为疏水性的过程二双水相萃取1. 双水相萃取的基本特点：1）两相的性质差别较小；2）两相的界面张力很小2. 双水相系统定义：某些有机物之间或有机物与无机盐之间，在水中以适当浓度溶解后形成的互不相溶的两相或多项系统3. 分类 ：聚合物 - 聚合物 - 水系统；聚合物- 无机盐 - 水系统4. 应用 ： 1）主要用于胞内酶的提取、精制；2 ）用双水相萃取技术处理细胞匀浆液：可便利除去细胞碎片，使酶得到精制；3 ）蛋白质在多数情形下收率能达90%；4 ）应用于自然产物的分别纯化

7、学习必备欢迎下载第四章1. 色层分析法分为：柱层析；纸层析；薄层层析2. 吸附色层法1 ）原理 ：通过样品在固定相和流淌相之间的吸附、脱附作用而实现分别的，这种吸附作用是一种物理吸附；2 ） 作用力 ：静电引力；氢键；偶极分子之间定向力及范德瓦尔斯力；3 ） 吸附剂分类 ：极性吸附剂氧化物、氢氧化物和盐非极性吸附剂活性炭、硅胶等常用的吸附剂： al 2o3 , 硅胶、羟基磷灰石、聚酰胺、吸附树脂；al2o3 - 中性氧化铝应用范畴广，适用于醛、酮、酯等的分别；酸性氧化铝适用于酸性化合物， 如酸性色素， 某些氨基酸等； 碱性氧化铝适用于分别碱性化合物，如生物碱、醇等；硅胶可用于分别酸性和中性物质

8、，如有机酸、氨基酸、类脂等3. 流淌相的洗脱作用：是流淌相分子与被分别的溶质分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程；4. 常用流淌相按极性增强次序为：石油醚 <环己烷 <二硫化碳 <四氯化碳 <苯 <甲苯 <氯仿 <乙醚 <乙酸 <乙酸乙酯 <丙酮 <正丙醇 <乙醇 <甲醇 <酸5. 安排层析1 ） 组成 ：固定相水、稀酸、甲醇、甲酰胺等常用载体硅胶、纤维素、硅藻土流淌相与水不相互溶的有机溶剂，如正丁醇，正戊醇等；2 ）两种形式 ：正相层析固定相为亲水性物质，流淌性为与水不相溶的有机溶剂，常用来分别强极性的、亲水

9、性物质反相层析固定相为疏水性的有机物，流淌相为亲水性溶剂，常用来分别亲脂性的有机物6. 亲和层析（功能层析）1 ）原理 ：在肯定条件小某些物质只能与某一种生物大分子物质结合而不与其他生物大分子结合，当条件如溶液ph或离子强度转变时它们又解离；2 ） 配体的挑选要求：与纯化的物质进行专一性结合具有较强的亲和力与生物大分子结合后，在肯定条件下又能解离，而且无损于生物大分子活性具有与基质连接的化学基团3 ）亲和层析中常用载体：琼脂糖凝胶、 交联葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶和多孔性的玻璃珠7. 凝胶层析1 ） 机理 ：分子筛效应2 ） 两个参数 ：得水率1g 凝胶吸取水的克数成为得水率排阻极限不能扩散进

10、入凝胶颗粒网孔内部的最小溶质分子的分子量3 ） 凝胶具备的条件：凝胶是惰性的凝胶的化学性质是稳固的凝胶上没有或只有极少量的离子交换基团以防止离子交换效应凝胶上必需具有足够的机械强度，防止在液流作用下变形学习必备欢迎下载4 ）四种常用的凝胶：葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、琼脂糖及葡聚糖组成的复合凝胶5 ） 凝胶层析的应用：复杂样品的预分别分别提纯分子量及分子量分布的测定8. 比移值 rf ：溶质分子和流淌相分子在层析过程中移动速度的相对值rf=原点至斑点中心间的距离/ 原点至溶剂前缘间的距离第五章1. 离子交换树脂：指一类带有功能基的网状结构的高分子化合物1 ） 组成 ：不溶性的三维网

11、状骨架连接在骨架上的功能基团功能基团所带的相反电荷的可交换离子2 ） 分类 ：强酸性阳离子交换树脂r-so3h弱酸性阳离子交换树脂强碱性阴离子交换树脂弱碱性阴离子交换树脂螯合树脂氧化仍原性树脂两性树脂3 ） 外形 ：凝胶型；大孔型；载体型2. 离子交换树脂的物理性质：1 ） 粒度 ：用 有效粒径 和匀称系数 来描述粒度；匀称系数值越小，粒度分布越匀称2 ） 含水量 ：树脂的固有性质；交联度提高，含水量降低；3 ） 密度 ：分湿视密度和湿真密度；4 ） 膨胀度： 交联度越大，膨胀度越小5 ） 机械性能3. 离子交换树脂的化学特性：1 ） 酸碱性2 ） 交换容量 ：重要指标，单位为mol/g ，

12、mmol/g 等；分为总交换容量和工作交换容量3 ） 交联度4 ） 化学稳固性 ：交联度越低，化学稳固性越差4. 离子交换平稳bba1) 挑选系数e a=kd/k d2) 平稳常数kba：稀溶液中，对于一价离子交换树脂，平稳常数与挑选系数相等；5. 离子交换动力学1 ） 实质的三步骤：膜扩散颗粒扩散交换反应2 ） 影响离子交换速度因素：树脂颗粒越小，膜扩散和颗粒扩散越快内扩散速度和内扩散系数成正比外扩散速度与外扩散系数成正比6. 离子交换操作： 1）间歇操作（静态法）2）柱上操作（动态法）学习必备欢迎下载7. 提高洗脱效率的措施：树脂颗粒细洗脱液的浓度要合适洗脱液的流速不要太快8. 离子交换分

13、别的应用：去离子水的制备试样中总盐量的测定干扰组分的分别痕量组分的富集第六章1. 电泳 ：带电粒子在直流电场中向相反的电极移动的现象2. 电泳迁移率 ： = /e=q/6 r 为泳动速度）3. 电泳的分类 ：1 ）按分别原理：区带电泳；等速电泳；等点聚焦电泳2 ）按有误固体支持物：自由电泳；支持物电泳4. 最常用的电泳技术：聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳5. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：1 ）包括：不连续凝胶电泳；制备凝胶电泳；sds聚丙烯酰胺凝胶电泳2 ） sds聚丙烯酰胺凝胶电泳：用来分别蛋白质和测定其相对分子质量 m=a-krm（ m-相对分子量； a- 常数； k- 斜率； rm- 迁移率）6. 毛细管电泳（高效毛细管电泳） hpce1 ）原理： 高效毛细管电泳是以高压电场为驱动力，以毛细管为分别通道，依据样品中组分之间的淌度和安排行为上的差异而实现分别的；2 ） 八种分别模式：毛细管自由溶液区带电泳胶束毛细管电色谱毛细管凝胶电泳毛细管等电聚焦