(完整版)2.3分解纤维素的微生物的分离2

1、12一、基础知识一、基础知识（一）纤维素与纤维素酶（一）纤维素与纤维素酶3纤维素：棉花棉花是自然界中是自然界中纤维素含量最高纤维素含量最高的天然产物；木的天然产物；木材、作物秸秆等材、作物秸秆等也富含纤维素。也富含纤维素。 植物每年产生的纤维素超过植物每年产生的纤维素超过7070亿吨；分布植亿吨；分布植物的根、茎、叶中。物的根、茎、叶中。4纤维素酶纤维素酶5纤维二糖纤维二糖c c1 1酶、酶、cxcx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纤维素纤维素一、基础知识一、基础知识6在一支试管中添加纤维素酶，在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；另一支试管不添加纤维素酶；思考思考1实验分析

2、：实验分析：p27的小的小实验是如何构成对照的？实验是如何构成对照的？滤滤纸纸崩崩溃溃法法（二）、纤维素分解菌的筛选（二）、纤维素分解菌的筛选阅读课本课本阅读课本课本2828页相关部分，回答页相关部分，回答下列问题：下列问题：1.1.纤维素分解菌的筛选方法纤维素分解菌的筛选方法2.2.纤维素分解菌的筛选方法的原理纤维素分解菌的筛选方法的原理阅读课本课本阅读课本课本2828页相关部分，回答页相关部分，回答下列问题：下列问题：8（二）、纤维素分解菌的筛选（二）、纤维素分解菌的筛选1、筛选纤维素分解菌的方法、筛选纤维素分解菌的方法_。该方法可以通过该方法可以通过_反应直接筛选。反应直接筛选。刚果红染

3、色法刚果红染色法颜色颜色2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成、其原理是：刚果红可以与纤维素形成_，当纤维素被，当纤维素被_分解后，分解后，红色复合物无法形成，出现以红色复合物无法形成，出现以_为中心的为中心的_，可以通过，可以通过_ 来筛选纤维素分解菌。来筛选纤维素分解菌。红色复合物红色复合物纤维素酶纤维素酶纤维素分解菌纤维素分解菌 透明圈透明圈是否产生透明圈是否产生透明圈9可根据是否可根据是否产生产生透明圈透明圈来筛选纤维来筛选纤维素分解菌素分解菌10练一练：练一练：1.1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是下列关于纤维素酶的说法，错误的是a. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种纤维素酶是一种

4、复合酶，至少包括三种b. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖c. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁d. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖112.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是菌，下列说法错误的是a. 刚果红能与纤维素形成红色复合物刚果红能与纤维素形成红色复合物 b. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 c. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物d. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛若培养基上产生了

5、透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌选出了纤维素分解菌12( (三三) )、实验设计、实验设计土壤土壤取样取样选择选择培养培养梯度梯度稀释稀释将样品涂将样品涂布到鉴别布到鉴别培养基培养基挑选挑选菌落菌落什么什么样的样的环境环境取样取样? 培养的目的培养的目的? ? 选择培养基的选择培养基的特点特点? ?挑选什挑选什么样的么样的菌落菌落? ?鉴别培养基鉴别培养基的特点的特点? ?如何鉴别如何鉴别? ?根据根据：微生物：微生物对生存环境的对生存环境的要求，到相应要求，到相应环境中去找环境中去找 目的：目的：增加纤维素增加纤维素分解菌的浓度，分解菌的浓度，以以确保能够从样品中确保能够从样品中分离到所

6、需要的微分离到所需要的微生物。生物。刚果红染色法刚果红染色法 技巧归纳技巧归纳寻找纤维素分解菌的方法寻找纤维素分解菌的方法1.1.在在富含纤维素的环境富含纤维素的环境中如腐殖质中寻找。中如腐殖质中寻找。2.2.人工设置富含纤维素的环境。将富含纤人工设置富含纤维素的环境。将富含纤维素的物质，如维素的物质，如滤纸等埋在土壤中。经过滤纸等埋在土壤中。经过30d30d左右，再从已腐烂的左右，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维滤纸上筛选纤维素分解酶。素分解酶。141、纤维素分解菌选择培养基、纤维素分解菌选择培养基属于属于_（固体、液体）培（固体、液体）培养基，原因是养基，原因是_【资料二资料二】选择培养选择培养

7、阅读资料二阅读资料二“选择培养基选择培养基”，回答以下几问题：，回答以下几问题：液体液体没有添加琼脂没有添加琼脂2、该培养基对微生物、该培养基对微生物_（具有，不具有）选择作用。（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是如果具有，其选择机制是_ 具有具有 以纤维素粉为唯一以纤维素粉为唯一碳源，能分碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁解纤维素的微生物可以大量繁殖；殖；15若设置一个对照实验说明选择培养的作若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将用，应控制的变量是将_改为改为_。3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？的作用？葡

8、萄糖葡萄糖纤维素粉纤维素粉提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤或者将纤维素改为葡萄糖。维素改为葡萄糖。16操作方法：操作方法：将土样加入装有将土样加入装有30ml选择培养基的选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养一定温度下震荡培养12天，直至培养天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养液变浑浊。也可重复选择培养1819【资料三资料三】刚果红染色法刚果红染色法方法一：方法一：先培养微生物，再加先培养

9、微生物，再加入刚果红进行颜色反应入刚果红进行颜色反应方法二：方法二：在倒平板时就加入刚在倒平板时就加入刚果红果红20培养基组成培养基组成提供的主要营养物质提供的主要营养物质cmc-na 510g碳源碳源酵母膏酵母膏 1g碳源、氮源、生长因子碳源、氮源、生长因子kh2po4 0.25g无机盐无机盐土豆汁土豆汁 100ml碳源、生长因子碳源、生长因子琼脂琼脂 15g凝固剂凝固剂上述物质溶解后，加蒸上述物质溶解后，加蒸馏水定容至馏水定容至1000ml氢元素、氧元素氢元素、氧元素鉴别鉴别纤维素分解菌的培养基纤维素分解菌的培养基(水溶性羧甲基纤维素钠水溶性羧甲基纤维素钠)21染色法染色法优点优点缺点缺点

10、方法一方法一 方法二方法二 颜色反应基本颜色反应基本上是纤维素分上是纤维素分解菌的作用解菌的作用 操作繁琐，刚操作繁琐，刚果红会使菌落之间果红会使菌落之间发生混杂发生混杂操作简便，操作简便，不存在菌落不存在菌落混杂问题混杂问题 产生淀粉酶的产生淀粉酶的微生物也产生模糊微生物也产生模糊透明圈，有些微生透明圈，有些微生物能降解色素，形物能降解色素，形成明显的透明圈。成明显的透明圈。思考：这两种方法各有哪些优点与不足思考：这两种方法各有哪些优点与不足22挑选产生透明圈的菌落挑选产生透明圈的菌落 挑取产生挑取产生明显的透明圈的菌落，明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。一般即为分解纤维素的菌落

11、。 接种到接种到纤维素分解菌的纤维素分解菌的选择选择培养培养基上，在基上，在30300 0c c 37370 0c c培养，可获得纯培养，可获得纯培养。培养。23思考：本实验的流程与课题思考：本实验的流程与课题2 2中的实验流程有哪些中的实验流程有哪些异同？异同？ 本实验流程与课题本实验流程与课题2 2的流程的区别如下。课的流程的区别如下。课题题2 2是将土样制成的菌悬液直接涂布在是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离唯一氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌得到菌落。本课题通过落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，

12、到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。他步骤基本一致。 24四、结果分析与评价四、结果分析与评价 1.1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落出菌落 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。培养基制作合格。 如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。了分解纤维素的微生物。 25 为了确定分离得到的是纤维素分解菌，为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行还需要进行_实验

13、，纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有发酵方法有_ _ 发酵和发酵和_ _ 发酵。纤发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的维素所产生的_ _ 含量进行定量测定。含量进行定量测定。发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶 液体液体 固体固体 五、课题延伸五、课题延伸26分解分解纤维纤维素的素的微生微生物的物的分离分离纤维素酶纤维素酶种类、作用、催化种类、作用、催化刚果红染色刚果红染色筛选原理筛选原理实实验验设设计计土壤取样土壤取样选择培养选择培养涂布培养涂布培养纯化培养纯化培养前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纤维素土壤富含纤维素土壤增大分解菌含量增大分解菌含量染色鉴别染色鉴别分离出分解菌分离出分解菌课堂总结课堂总结1.纤维素、纤维素酶、控制纤维素酶合成纤维素、纤维素酶、控制纤维素酶合成的基因的基本单位依次为葡萄糖、氨基酸、的基因的基本单位依次为葡萄糖、氨基酸、脱氧核苷酸。脱氧核苷酸。2.纤维素酶是复合酶纤维素酶是复合酶,它并非是一种单一它并非是一种单一酶。酶。281 1、请回答下列与检验饮用水有关的问题