培养基配制及适用性检查标准操作规程

1、培养基配制及适用性检查标准操作规程目的：建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作 流程。范围：适用于微牛物检验人员对培养基的规范管理。依据：药品生产质量管理规范（2010年修订）、中华人民共和国药典2015年版职责：1 微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验 可以顺利进行。2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。内 容1培养基的屮购根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培 养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。2培养基的 验收2.1培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对 品名、

2、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破 损、包装是否完整、产品是否在有效期内。2.2验收合格后，登记于培养基领用台账（附记录文件编号：smp-10-qc-009-02 (00)。3 培养基的贮藏第四部34未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、 和避光条件下。已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。3.2灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置48°c冷藏保 存待用。灭菌后培养基储存期为7天。4培养基的配制4.1培养基的配制和使用应填写培养基配制及使用记录（附记录 文件编号：smp-10-qc-009-02 （00）。4.2培养基配制批号原则

3、:原材料批号配制日期:比如20口年1月1 日配制的培养基，培养基干粉批号000000,配制批号为:000000-110101o 配制好的培养基贴培养基标签（附记录文件编号：r-smp-10-qc-009-03）o （注：同一天同一培养 基配置多次的，在原批号后加加“数字”表示，如000000-110101-01）4.3培养基配制方法4.3.1使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说 明配制，如重量/体积、ph、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别, 每个成分物质含量、制造商、批号，ph值，培养基

4、体积/分装体积，灭菌条件（灭菌 方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。4.3.2水、容器具要求：培养基配制均采用纯化水，特殊说明时采用 去离子水和蒸憾水。培养基配制所用容器和配套器具应洁净。对热敏感的培养基如糖 发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌，以保证培养基的无菌性。4.3.3称量与分装：快速称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴 口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末）。以免吸潮。先加入 适量的水，充分混合。注意避免培养基结块，然后加水至所需的量。根据说明书要求 选择是否加热。分装体积不超过容器体积的2/3o配制斜面等含琼脂的培养基也需加 热煮沸至完全溶解后分装。

5、4.4 ph值的测定和调整ph值采用ph计进行检测，温度25±2°co取配后培养基10ml进行灭前ph测定。另取20ml于50ml三角瓶与同批配制培养基同时灭菌冷却至25±2°c 检测灭后ph。灭菌前后ph应按下表进行控制。灭菌前可使用浓度约为40g/l（约lmol/l） 的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/l （约lmol/l）的盐酸溶液进行缓慢调整，避 免反复调整而增2加离子浓度。灭菌后培养基不符合标准时视为不合格，不进行使用。 4.5培养基灭菌培养基和试剂应采用湿热灭菌法或过滤除菌法。湿热灭菌在高压灭 菌锅或蒸汽灭菌柜中进行，容器具若需湿热灭菌时，

6、灭菌条件为121°c灭 菌30 mine培养基严格按说明书条件进行灭菌。培养基灭菌后应立即取出， 不得存放于高压灭菌器中。5培养基的质量控制5.1计数培养基适用性检查5丄1菌种及菌液制备菌种：试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的 干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验 菌株的生物学特性。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株 见表lo菌液制备：按表1规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽泡杆菌的新鲜培养物至胰酪人豆月东液体培养基中，35°c 培养18-24小时，取上述培养物lml加入9ml 0.9%

7、无菌氯化钠溶液中， 制成10j的菌液，依法10倍稀释至10-7,分取各菌悬液lml注入平皿 中，立即倾注胰酪大豆陈琼脂培养基20ml,各菌悬液平行制备两个平血, 平皿法培养计数，取小于100cfu/ml的菌液备用；取口色念珠菌的新鲜培 养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，25°c培养23天。取上述培养物lml 加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，制成101的菌液，依法10倍稀释至107, 取菌悬液lml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml,各菌悬 液平行制备两个平1111,平血法培养计数，取小于100cfu/ml的菌液备用； 取黑曲霉的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，

8、经25°c培养 57天，加入35ml含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠 溶液，将抱子洗脱。然后吸出抱子悬液至无菌试管内，取上述培养物lml 加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，制成101的菌液，依法10倍稀释至 10-7,分取各菌悬液lml注入平1111中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基 20ml,各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100cfu/ml 的菌液备用。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8°c, 可在24小时内使用。黑曲霉孑包子悬液可保存在2?8°c，在验证过的贮存期 内使用。5.1.2阴性对照

9、为确认试验条件是否符合耍求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验 应无菌牛长。如阴性对照有菌牛长，应进行偏差调查。5丄3培养基适用性检査微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均 应进行培养基适用性检查。按表1规定，接种不大于loocfu的菌液至胰酪大豆豚液体培养基管或 胰酪大豆豚琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板，置表1规定条 件下培养。每一试验菌株平行制备2管或2个平皿。同时，用相应的对照 培养基替代被检培养基进行上述试验。被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比 值应在0.5?2范围内，口菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被 检液体培养基管与对

10、照培养基管比较，试验菌应生长良好。表1试验菌液的制备和使用45.2控制菌检查用培养基适用性检查5.2.1菌种及菌液制备菌种：试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的 干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验 菌株的生物学特性。 菌液制备：按表1规定程序培养各试验菌株。取大 肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培 养物至胰酪大豆月东液体培养基中，35°c培养1824小时，取上述培养物 2ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，制成的菌液，依法10倍稀释 至10-7,分取各菌悬液lml注入平血屮，立即倾注胰酪大豆月东琼脂培养

11、基 20ml,各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100cfu/ml的菌液备用；取白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，25°c培养23天。取上述培养物lml加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，制成 104的菌液，依法10倍稀释至10-7,取菌悬液lml注入平皿屮，立即倾 注沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml,各菌悬液平行制备两个平1111,平血法培养 计数，取小于100cfu/ml的菌液备用；菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8°c,可在24小时内使用。2.1.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验

12、应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。2.2培养基适用性 检查控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均 应进行培养基的适用性检查。控制菌检査用培养基的适用性检查项目包括 促生长能力、抑制能力及指示特性的检查。各培养基的检查项目及所用的 菌株见表lo表1控制菌检査用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特性52.2.1液体培养基促生长能力检査 分别接种不大于loocfu的试验菌 （表1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及 不大于规定的最短培养时间下培养，与对照培养基管比较，被检培养基管 试验菌应生长良好。2.2.2固体培养基促生能力检査 用涂布

13、法分别接种不大于loocfu的 试验菌（表1）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检査规定 的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，被检培养基与对照培养 基上生长的菌落大小、形态特征应一致。2.2.3培养基抑制能力检査 接种不少于loocfu的试验菌（表1）于被 检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检査规定的培养温度及不小于规 定的最长培养时间下培养，试验菌应不得生长。2.2.4培养基指示特性检査用涂布法分别接种不大于loocfu的试 验菌（表1）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的 培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，被检培养基上试验菌生长 的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。6培养 基销毁失效、检测用过培养基（无论是否有菌生长）均按废物进行高压蒸汽 灭菌处理。参照实验室废弃物管理规程（文件编号：smp10qc014（00）。相关文件