第七章 蛋白质检验

1、1第七章第七章 蛋白质检验蛋白质检验 人人类白蛋白分子类白蛋白分子 2n本章内容概要：本章内容概要：第二节第二节 体液蛋白质测定体液蛋白质测定第一节第一节 概述概述31 1、掌握掌握血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆蛋白质（前血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆蛋白质（前白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能；血清总蛋白和白蛋白的白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能；血清总蛋白和白蛋白的测定方法和原理。测定方法和原理。2 2、熟悉熟悉急性时相反应蛋白的概念和种类；血清球蛋白和纤维蛋急性时相反应蛋白的概念和种类；血清球蛋白和纤维蛋白原的测定方法白原的测定方法3 3、了解了解其他蛋白质的来源和生理功能

2、；尿液蛋白和脑脊液蛋白其他蛋白质的来源和生理功能；尿液蛋白和脑脊液蛋白的检测的检测 。n本章教学要求：本章教学要求：4第一节第一节 概概 述述p机体蛋白质机体蛋白质：p体液蛋白质的检测：体液蛋白质的检测： 机体主要的机体主要的 生物大分子生物大分子含量：人体固体成分的含量：人体固体成分的45%种类：种类：10万，万，30005000种种/单细胞单细胞功能：生长，代谢、血凝、运输、免功能：生长，代谢、血凝、运输、免疫、信息传递、维持血浆胶体渗透压疫、信息传递、维持血浆胶体渗透压等等疾病发生疾病发生体液蛋白质体液蛋白质异常异常5要判断异常要判断异常首先要清楚正常的血浆蛋白质组成，功能及分类及特点首

3、先要清楚正常的血浆蛋白质组成，功能及分类及特点一、血浆蛋白质的组成、功能及分类一、血浆蛋白质的组成、功能及分类n组成：组成：种类：种类：1000种种 500种种 200种种含量：含量：g mg g来源：肝脏是蛋白质主要的加工厂来源：肝脏是蛋白质主要的加工厂6n功能：功能：营养作用，修补组织蛋白;维持血浆胶体渗透压：白蛋白维持75%80%的血浆渗透压；作为PH缓冲系统的一部分：酸性或碱性蛋白质；作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、药物等的载体；体液免疫防御系统：作为免疫球蛋白与补体等免疫分子；催化作用：酶的本质；代谢调控作用；作为底物，酶或中间产物抑制或激活组织蛋白酶；参与凝血与纤维蛋白溶解

4、；：除因子外均可7n分类：分类： 依据依据来源来源、分离方法分离方法和和生理功能生理功能来源来源肝生成：肝生成：绝大多数血浆蛋白质绝大多数血浆蛋白质其他组织细胞生成：其他组织细胞生成：免疫球蛋白免疫球蛋白和和蛋白类激素蛋白类激素8分离方法分离方法盐析法：白蛋白盐析法：白蛋白/球蛋白球蛋白（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液）半饱和的硫酸铵溶液）电泳法：电泳法：醋酸纤维素薄膜电泳：醋酸纤维素薄膜电泳：5种种琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳：13种种聚丙烯酰胺凝胶电泳：聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种种SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：300种种分分辨辨率率增增高高-+纤维蛋白原纤维

5、蛋白原醋酸纤维素薄膜醋酸纤维素薄膜9即时可用的蛋白质电泳标准即时可用的蛋白质电泳标准 10功能分类功能分类:11二、个别血浆蛋白质二、个别血浆蛋白质n结构：结构： MW=54000MW=54000，四个相同亚基构成的四聚体。，四个相同亚基构成的四聚体。n理化性质：理化性质：p p4.74.7，肝细胞合成，肝细胞合成，半寿期半寿期12 12 小时小时。n测定方法：测定方法：免疫比浊法免疫比浊法免疫扩散技术免疫扩散技术。（一）前白蛋白（一）前白蛋白（PAPA）急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 12n功能：功能：营养指标，载体功能（甲状腺素营养指标，载体功能（甲状腺素维生素）。维生素）。n临床意义临

6、床意义：敏感性高的指标；敏感性高的指标； 降低：营养不良，肝功不全，降低：营养不良，肝功不全， 急性炎症，恶急性炎症，恶性肿瘤，性肿瘤， 肝硬化及肾炎时。肝硬化及肾炎时。n参考值参考值： 200200400mg/L 400mg/L 。13n结构结构：585585个个aaaa残基构成的单链多肽，残基构成的单链多肽， MW=66458MW=66458，含，含17个个二硫二硫键。键。n理化性质理化性质：pI=4pI=45.85.8，肝细胞合成但不储存，半衰期为，肝细胞合成但不储存，半衰期为15-19 15-19 天，占总蛋白的天，占总蛋白的40%40%60%60%，p p7.47.4时带负电。时带负

7、电。n测定方法测定方法：色素结合法：色素结合法: :溴甲酚绿（溴甲酚绿（BCGBCG），溴甲酚紫（），溴甲酚紫（BCPBCP）, ,盐析等。盐析等。（二）白蛋白（二）白蛋白（ALBALB）急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 14n功能功能：营养作用，载体功能（高亲和力），维持血浆渗透压：营养作用，载体功能（高亲和力），维持血浆渗透压和正常和正常p p值。值。n临床意义临床意义：合成受食物影响，敏感性较低。：合成受食物影响，敏感性较低。降低降低: :在营养不良，肝功不全，急慢性肝疾病时在营养不良，肝功不全，急慢性肝疾病时; ;增高增高: :少见少见, ,假性升高。假性升高。n参考值参考值：35-5

8、0 g/35-50 g/15n结构：结构：394394个个aaaa残基构成的单链多肽，含残基构成的单链多肽，含101012%12%的糖的糖MW=5.5 MW=5.5 万。万。n理化性质理化性质：pIpI值为值为4.84.8，占，占1-1-球蛋白区带显色的球蛋白区带显色的90。n测定方法：测定方法：免疫化学法，电泳（酸性凝胶电泳或等电聚焦电免疫化学法，电泳（酸性凝胶电泳或等电聚焦电泳），利用蛋白酶抑制能力测定等。泳），利用蛋白酶抑制能力测定等。（三）（三）1-1-抗胰蛋白酶（抗胰蛋白酶（AATAAT）急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 16n功能功能：蛋白酶抑制物（具有：蛋白酶抑制物（具有9090

9、的抑制蛋白酶活力）。如的抑制蛋白酶活力）。如糜蛋白酶，弹性蛋白酶，但此抑制作用有明显的糜蛋白酶，弹性蛋白酶，但此抑制作用有明显的p p依赖性。依赖性。n临床意义：临床意义：降低：血浆降低：血浆AATAAT仅见于胎儿呼吸迫综合症。仅见于胎儿呼吸迫综合症。升高：炎症、术后，某些激素治疗后。升高：炎症、术后，某些激素治疗后。n参考值：参考值： 0.83 0.831.99g/L 1.99g/L 17n结构：结构：181181个个aaaa残基构成的单链多肽，残基构成的单链多肽， MW=4MW=4万，万，含含45%45%的糖，的糖，其中唾液酸占其中唾液酸占11%11%12%12%。n理化性质：理化性质：p

10、I pI 值值2.72.73.53.5，肝合成，脓毒症时粒细胞和单核，肝合成，脓毒症时粒细胞和单核细胞及某些肿瘤组织也可合成。细胞及某些肿瘤组织也可合成。 位于位于1-1-球蛋白区带。球蛋白区带。n测定方法：测定方法：免疫化学法（扩散免疫化学法（扩散, ,浊度）浊度）, ,化学法（间接法），化学法（间接法），ELISAELISA法等法等（四）（四）1-1-酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAGAAG） 急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 18n功能：功能：与免疫防御功能有关，机制不详；抑制血小板凝集与免疫防御功能有关，机制不详；抑制血小板凝集影响胶原纤维形成；参与脂类运输。影响胶原纤维形成；参与脂类运输

11、。n临床意义：临床意义：升高：急性炎症，组织损伤，风湿，肿瘤，升高：急性炎症，组织损伤，风湿，肿瘤，AMI AMI ，溃结时；，溃结时；降低：营养不良降低降低：营养不良降低, , 严重肝损伤和雌激素作用。严重肝损伤和雌激素作用。n参考值：参考值：.25.252.0g/L 2.0g/L 。19n结构：结构：590590个个aaaa残基构成的单链多肽，残基构成的单链多肽， MW=6.5万万，含万万，含4%4%的糖。的糖。n理化性质理化性质：pI pI 值值.7-.7-.8.8，在白蛋白和，在白蛋白和1-1-球蛋白之间。球蛋白之间。胎儿肝卵黄囊合成，成人量微，升高由于肿瘤细胞合成。胎儿肝卵黄囊合成，

12、成人量微，升高由于肿瘤细胞合成。n测定方法：测定方法：免疫化学法（扩散免疫化学法（扩散, ,火箭电泳）火箭电泳）,ELISA,ELISA等等（五）（五）甲胎蛋白甲胎蛋白(AFP)(AFP)20n功能：功能：胎儿血浆主要蛋白质，调节肝细胞生长和脑细胞发胎儿血浆主要蛋白质，调节肝细胞生长和脑细胞发育；抑制细胞和体液的免疫反应；维持正常妊娠，防止母婴育；抑制细胞和体液的免疫反应；维持正常妊娠，防止母婴排斥。排斥。n临床意义：临床意义：胎儿产前监测（羊水或母血）胎儿产前监测（羊水或母血）增高：原发性肝癌患者诊断和鉴别（增高：原发性肝癌患者诊断和鉴别（80%80%原发增高），原发增高）， 其他其他癌症也

13、可见增高。癌症也可见增高。n参考值：参考值：20-100g/L(20-100g/L(成人成人) ) 5g/L( 5g/L(新生儿新生儿) ) 21n结构：结构： 两对肽链两对肽链形成四聚体，有变异体。形成四聚体，有变异体。n理化性质：理化性质：肝合成，肝合成， pI pI 值为值为4.14.1，电泳位，电泳位a2 -a2 -球蛋白区带球蛋白区带n测定方法：测定方法：电泳法，免疫化学法（扩散电泳法，免疫化学法（扩散, ,浊度）浊度）, ,化学法等化学法等（六）（六）结合珠蛋白结合珠蛋白(Hp) (Hp) 急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 22n功能：功能：与红细胞中释出自由与红细胞中释出自由Hb

14、 Hb 结合结合, ,防止防止Hb Hb 从尿中丢失保存从尿中丢失保存铁铁, , 急性溶血后一周再生恢复。急性溶血后一周再生恢复。高效的过氧化物酶。高效的过氧化物酶。需铁细菌的天然抑菌剂。需铁细菌的天然抑菌剂。n临床意义：临床意义：升高：急性时相反应；升高：急性时相反应；降低：血管内溶血时；雌激素作用。降低：血管内溶血时；雌激素作用。n参考值参考值：0.5-2.2 g/L0.5-2.2 g/L23n结构：结构： MW=62MW=6280 80 万万, ,分子量最大，由四个相同的亚基组分子量最大，由四个相同的亚基组成，含糖量约。成，含糖量约。n理化性质：理化性质：肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，

15、半寿期肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，半寿期5 5 天。天。n测定方法：测定方法：免疫化学等免疫化学等（七）（七）2-2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG) (AMG) 24n功能：功能：与多种分子和离子结合，影响蛋白水解酶活性（主要与多种分子和离子结合，影响蛋白水解酶活性（主要的蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶的作用）。的蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶的作用）。n临床意义临床意义：婴幼儿及儿童比成人高；：婴幼儿及儿童比成人高；升高：雌激素，低蛋白血症可使其含量升高；升高：雌激素，低蛋白血症可使其含量升高；降低：胰腺炎及前列腺癌时。降低：胰腺炎及前列腺癌时。n参考值：参考值：1.31-2.93g/L

16、1.31-2.93g/L25n结构：结构： MW=12-16 MW=12-16 万万, 1046, 1046个个aaaa残基构成的单链多肽，含残基构成的单链多肽，含糖约，每分子铜蓝蛋白可结合个铜原子。糖约，每分子铜蓝蛋白可结合个铜原子。n理化性质理化性质：肝合成：肝合成, ,巨噬细胞和淋巴细胞合成少量；巨噬细胞和淋巴细胞合成少量；pI pI 值值为为4.44.4， 具遗传基因多态性具遗传基因多态性。n测定方法测定方法：免疫化学（扩散或比浊）等：免疫化学（扩散或比浊）等（八）（八）铜蓝蛋白铜蓝蛋白(CER) (CER) 急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 26n功能：功能：具氧化酶活性且起抗氧化剂

17、作用，铜的无毒代谢库具氧化酶活性且起抗氧化剂作用，铜的无毒代谢库n临床意义：临床意义：增加增加感染感染, ,创伤创伤, ,肿瘤肿瘤; ; 降低降低-营养不良，严重肝病及肾综营养不良，严重肝病及肾综; ;协助诊断协助诊断Wilson Wilson 病病n参考值：参考值：0.21-0.53g/L0.21-0.53g/L27n结构结构： MW=7.7 MW=7.7 万万, ,单链糖蛋白，含糖约。单链糖蛋白，含糖约。n理化性质：理化性质：肝细胞合成，肝细胞合成， pI pI 值为值为5.5-5.9,5.5-5.9,半寿期半寿期7 7 天，可天，可逆结合多价离子如逆结合多价离子如Fe,Cu,Zn,Co

18、Fe,Cu,Zn,Co 等，一分子等，一分子TRF TRF 可结合两个三可结合两个三价铁。价铁。n测定方法：测定方法：免疫扩散法，放免法和免疫比浊法等。免疫扩散法，放免法和免疫比浊法等。（九）（九）转铁蛋白转铁蛋白(TRF) (TRF) 急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 28n功能：功能：运输铁。运输铁。n临床意义：临床意义：血血TRF TRF 浓度受铁供应调节，缺铁浓度受铁供应调节，缺铁TRF TRF 升，铁治升，铁治疗后恢复。可用于贫血的诊断和对治疗的监测。疗后恢复。可用于贫血的诊断和对治疗的监测。降低降低: :急性时相反应、慢性肝病、营养不良及蛋白丢失时；急性时相反应、慢性肝病、营养不良

19、及蛋白丢失时；升高：妊娠或雌激素会使其降低升高：妊娠或雌激素会使其降低; ;缺铁性低色素贫血。缺铁性低色素贫血。n参考值：参考值： 2.5-4.3 g/L (2.5-4.3 g/L (成人成人) ) 1.30-2.75 g/L (1.30-2.75 g/L (新新生儿生儿) )29n结构：结构： MW=11800MW=11800， 100100个个aaaa残基构成的单链多肽，分子中含残基构成的单链多肽，分子中含一对二硫键，不含糖。一对二硫键，不含糖。n理化性质：理化性质： pI pI 值为值为5.75.7，淋巴细胞合成，存在细胞表面，特，淋巴细胞合成，存在细胞表面，特别是淋巴和肿瘤细胞。释放入

20、血循环。半衰期别是淋巴和肿瘤细胞。释放入血循环。半衰期107 107 分钟，几乎分钟，几乎由肾小管回收。由肾小管回收。n测定方法：测定方法：放射免疫化学等。放射免疫化学等。（十）（十）2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG) (BMG) 30n功能：功能：分子量小，可自由通过肾小球滤过膜，在肾小管分子量小，可自由通过肾小球滤过膜，在肾小管几乎全部重吸收，可监测肾小管功能；是几乎全部重吸收，可监测肾小管功能；是HLAHLA链的轻链链的轻链部分。部分。 n临床意义：临床意义：增高：肾功能衰竭，炎症及肿瘤时。增高：肾功能衰竭，炎症及肿瘤时。n参考值：参考值：1.0 1.0 2.5 mg/L 2.5 mg/

21、L （血浆）（血浆） 31n结构：结构： MW11.5-14 MW11.5-14 万万，分子含个相同的亚基，亚基间靠，分子含个相同的亚基，亚基间靠非共价键连接成圆盘状多聚体。非共价键连接成圆盘状多聚体。n理化性质：理化性质：肝合成，肝合成， pI pI 值为值为6.26.2，电泳位于，电泳位于 r r 区带区带。n测定方法：测定方法：半定量沉淀法（早），免疫化学法。半定量沉淀法（早），免疫化学法。（十一）（十一）C-C-反应蛋白质反应蛋白质(CRP) (CRP) 急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白 32n功能：功能：结合多糖，磷脂和核酸；激活补体，抗凝。结合多糖，磷脂和核酸；激活补体，抗凝。n临

22、床意义：临床意义：第一个认定的急性时相反应蛋白第一个认定的急性时相反应蛋白, ,是急性时相是急性时相反应的一个敏感指标，在、创伤、感染、外科手术反应的一个敏感指标，在、创伤、感染、外科手术时含量迅速升高，达到正常的时含量迅速升高，达到正常的2000倍。倍。n参考值：参考值： 8.0mg/L 8.0mg/L （血浆）（血浆） 33三、疾病时的血浆蛋白质三、疾病时的血浆蛋白质n急性时相反应蛋白：急性时相反应蛋白：在急性炎症或某些组织损伤时，有些在急性炎症或某些组织损伤时，有些血浆蛋白质含量会增高，有些会降低，这种现象称为血浆蛋白质含量会增高，有些会降低，这种现象称为急性时急性时相反应相反应。而这些

23、血浆蛋白质被称为。而这些血浆蛋白质被称为急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白。（一）炎症、创伤（一）炎症、创伤 前述除了甲胎蛋白、前述除了甲胎蛋白、2 2 微球蛋白和微球蛋白和 2 2- -巨球蛋白巨球蛋白以外再加上纤维蛋白原的九种蛋白质以外再加上纤维蛋白原的九种蛋白质34n急性时相反应蛋白分类：急性时相反应蛋白分类：升高：升高：其他种蛋白质。其他种蛋白质。降低：降低：前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白35n急性时相反应机制：急性时相反应机制： 当机体受到损伤或炎症时释放小分子蛋白质导致肝细胞当机体受到损伤或炎症时释放小分子蛋白质导致肝细胞中上述蛋白质的合成增加或减少。中上述蛋白

24、质的合成增加或减少。n急性时相反应的应用：急性时相反应的应用： 急性时相反应时急性时相反应时, ,血浆蛋白质的变化和创伤的时间进程有血浆蛋白质的变化和创伤的时间进程有关，可用于鉴别急性、亚急性和慢性病理状态。关，可用于鉴别急性、亚急性和慢性病理状态。3637（二）（二）肝脏肝脏疾病：疾病：（三）（三）肾脏肾脏疾病：疾病：肾病早期肾病早期严重肾脏严重肾脏选择性蛋白质丢失选择性蛋白质丢失非选择性蛋白质丢失非选择性蛋白质丢失（四）（四）风湿风湿病：病：免疫球蛋白，免疫球蛋白，1 1- -酸性糖蛋白，结合珠蛋白及酸性糖蛋白，结合珠蛋白及升高升高（五）（五）遗传性遗传性缺陷：缺陷：多由于编码相应蛋白质的

25、基因发生突变或缺失。多由于编码相应蛋白质的基因发生突变或缺失。非典型的急性时相反应，非典型的急性时相反应，急性肝炎急性肝炎慢性肝硬化慢性肝硬化 见表见表8-38-33839第二节第二节 体液蛋白质测定体液蛋白质测定总蛋白测定总蛋白测定个别个别蛋白质的测定蛋白质的测定蛋白分离测定技术蛋白分离测定技术p发展趋势发展趋势: :p测定体液标本测定体液标本: :血浆血浆：普遍：普遍尿液，脑脊液和胸腹水等尿液，脑脊液和胸腹水等：有选择性的组织病变检查：有选择性的组织病变检查40免疫化学法特异定量个别蛋白质免疫化学法特异定量个别蛋白质p体液蛋白质的测定方法概括：体液蛋白质的测定方法概括：常规：免疫浊度法、免

26、疫扩散法，免疫电泳法，常规：免疫浊度法、免疫扩散法，免疫电泳法，微量：放射免疫测定（微量：放射免疫测定（RIARIA），酶免疫测定法（），酶免疫测定法（ELA/ELISAELA/ELISA）41电泳测定：电泳测定：定量化学测定定量化学测定TPr，Alb电泳电泳 组成图谱组成图谱 半定量半定量 定量定量染料结合法，染料结合法，UVUV法，折光法等法，折光法等42一、血清总蛋白测定n假设：假设：、 纯多肽链，含氮量平均为纯多肽链，含氮量平均为16 % 16 % 、各种蛋白质与化学试剂反应性一致，仅为相对定量、各种蛋白质与化学试剂反应性一致，仅为相对定量43n测定依据：蛋白质测定一般利用蛋白质以下的

27、结构或性质测定依据：蛋白质测定一般利用蛋白质以下的结构或性质1 1、元素组成测定：、元素组成测定：含含N N稳定；稳定；2 2、重复的肽链结构：、重复的肽链结构：具有多个肽键；具有多个肽键；3 3、酪氨酸和色氨酸与、酪氨酸和色氨酸与Folin-Folin-酚试剂反应酚试剂反应显色显色或或UV UV 吸收；吸收；4 4、与色素结合的能力：、与色素结合的能力：与染料以离子键或共价键连接；与染料以离子键或共价键连接；5 5、沉淀后借浊度测定：、沉淀后借浊度测定：光度计测定；光度计测定；6 6、光折射测定：、光折射测定：折射仪测定。折射仪测定。44n方法方法：1.1.凯氏定氮法参考方法凯氏定氮法参考方

28、法2.2.双缩脲法双缩脲法( ( 推荐推荐) ) 3.3.酚试剂法酚试剂法4.4.散射比浊法散射比浊法5.5.染料结合法染料结合法6. UV 6. UV 法法. .折光测定法折光测定法451.凯氏定氮法参考标准方法凯氏定氮法参考标准方法(0.05mg N 0.3g pro)消化消化用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵；（耗时）用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵；（耗时） 蒸馏蒸馏用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发；用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发； 吸收吸收用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使HH+ + ）滴定滴定用已标定的无机酸滴用已标定的无机酸滴（使（使H+ 恢复），恢复），计算总

29、氮量计算总氮量定蛋白定蛋白（总氮量总氮量- -非蛋白氮）非蛋白氮）6.25=6.25=蛋白含量蛋白含量纳氏试剂：碘化汞和碘化钾的碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶态化合物，其色度与氨氮含纳氏试剂：碘化汞和碘化钾的碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶态化合物，其色度与氨氮含 量成正比。量成正比。 n原理：原理：46n评价：评价：优点：准确度高，精密度优点：准确度高，精密度高，灵敏度高，是公认的参高，灵敏度高，是公认的参考方法。考方法。缺点：操作复杂，费时，缺点：操作复杂，费时，不适合常规检测，血清各蛋不适合常规检测，血清各蛋白含氮量会有所变化尤其是白含氮量会有所变化尤其是疾病时。疾病时。 n应用：应用：标

30、准蛋白的标定标准蛋白的标定及校正其它常规方法及校正其它常规方法472.双缩脲法双缩脲法n原理：原理： 蛋白质中的肽键蛋白质中的肽键（-CONH-CONH-）在在碱性碱性溶液中能与溶液中能与Cu2+作用而产生作用而产生紫红色络合物紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。条件：至少含两个肽键（条件：至少含两个肽键（-CONH-CONH-）基团才能和）基团才能和CuCu2+2+形成络合物形成络合物, ,氨基酸及二肽无反氨基酸及二肽无反 应应, ,三肽以上才能反应。三肽以上才能反应。 双缩

31、脲生成 加热加热NH322H180022222N 端端C 端端48n评价：评价：优点：简便，准确，重复性好，优点：简便，准确，重复性好，10g-120g/L10g-120g/L线性好，线性好，特异性与精密度好，批内特异性与精密度好，批内CV%CV%2%2%，显色稳定。，显色稳定。缺点：灵敏度较差，对蛋白质含量低的体液标本不适缺点：灵敏度较差，对蛋白质含量低的体液标本不适合。合。 n应用：应用：常规推荐方法。手工或上机使用。常规推荐方法。手工或上机使用。49二、血清白蛋白测定p方法方法：1.1.染料结合法染料结合法( ( 推荐推荐) ) 2 2. .免疫化学法免疫化学法3.3.电泳法电泳法4 4

32、. .盐析法盐析法501.1.染料结合法染料结合法( ( 推荐推荐) )n原理原理: : 血清血清ALBALB可通过可通过离子键或疏水键离子键或疏水键与包括与包括染料染料在内的各种在内的各种有机离子结合有机离子结合, ,而而GLBGLB很少结合外源性染料很少结合外源性染料, ,可在可在不分离不分离ALBALB与与GLBGLB的情况下直接测定的情况下直接测定ALBALB。染料染料BCGBCGBCPBCP优点优点 缺点缺点 易于和非人源性白蛋白结合易于和非人源性白蛋白结合 与白蛋白结合特异性较差与白蛋白结合特异性较差 与与非人源性白蛋白结合力弱非人源性白蛋白结合力弱 与白蛋白结合特异性好与白蛋白结

33、合特异性好 在在3030秒内测可提高特异性秒内测可提高特异性51n应用及评价应用及评价: : 严格控制反应时间的严格控制反应时间的BCGBCG法法既适合既适合手工手工也适合也适合自动自动化分析。化分析。临床上推荐使用临床上推荐使用。522 2. .免疫化学法免疫化学法n原理及特点原理及特点:n应用：应用：特异性高特异性高,但成本较高但成本较高,费时费时,生化检验用的不多生化检验用的不多.53p参考范围参考范围: :成人成人353555g/L.55g/L.p临床意义：临床意义：白蛋白升高：白蛋白升高：白蛋白降低：白蛋白降低：丢失过多丢失过多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成减少白蛋白合成减少 水肿水肿 先天性先天性ALBALB缺乏病缺乏病真性升高：未见真性升高：未见假性升高：机体明显失水，或治疗输入过多白蛋白假性升高：机体明显失水，或治疗输入过多白蛋白54三、血清球蛋白测定三、血清球蛋白测定p方法方法：间接法间接法: :TP-ALB=GLBTP-ALB=GLB直接法直接法: :乙醛酸比色法乙醛酸比色法(GLB(GLB中