常用缓冲液配置.

1、实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCI (pH7.4, 7.6, 8.0) 组份浓度：1 M Tris-HCI配制量：1 L配制方法：1. 称量 121.1 g Tris 置于 1 L 烧杯中。2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解PH 值值浓浓 HCI7.4约约 70ml7.6约约 60ml8.0约约 42 ml值。4. 将溶液定容至 1 L。5. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的pH 值随温度的变 化差异很大，温度每升咼lMTris- HCi Buffer (PH7.4, 76 8.0)100ml500

2、mM EDTA(PH8.O20ml1C,溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。2) 10XE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L配制方法：2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定容至 1 L 后，咼温咼压火菌。4. 室温保存。3) 1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量 181.7 g Tris 置于 1 L 烧杯中。2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调

3、节 pH 值至 8.8。4. 将溶液定容至 1 L。5. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的pH 值随温度的变 化差异很大，温度每升高 C,溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。4) 3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1. 称量40.8g NaAc 3H2O置于100-200ml烧杯中， 加入月40ml的去离子水搅拌溶解2. 加入冰醋酸调节 pH 值至 5.23. 加去离子水将溶液定容至 100ml4 咼温咼压火菌后，室温保存。5) PBS Buffer组份浓度： 137 mM NaCl

4、, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mMKH2PO4配制量：1 L配制方法：应】sgKCIP P 2g2gNa2HPO4L42gD.27g2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将 pH 值调节至 7.4，然后加入去离子水将溶液定容至 1 L04. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和 0.5 mM MgCl2。6)10 M 醋酸铵组份浓度：10 M 醋酸铵配制量：100 ml配制方法：1. 称量 77.1 g 醋酸铵置于 100200 ml 烧杯

5、中，加入约 30 ml的去离子水搅拌溶 解。2. 加去离子水将溶液定容至 100 mlo3. 使用 0.22 mm 滤膜过滤除菌。4. 密圭寸瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7) 苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离， 而异戊醇则有助于消除抽提过 程中出现的气泡。2. 配制方法： 将 Tris-HCI 平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 :1)混合均匀 后，移入棕色玻璃瓶中 4C保存。8)10% (W/V) SD

6、S组份浓度：10% (W/V)SDS 配制量：100ml配制方法：1.称量 10g 高纯度的 SDS 置于 100-200ml 烧杯中，加入约80ml 的去离子水，68C加入溶解2滴加浓盐酸调节 pH 值至 7.23将溶液定容至 100ml 后，室温保存。9)2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH 配制量：100 ml配制方法：1. 量取 80 ml去离子水置于 100200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放 热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取 8 g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待 NaOH 完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100ml。4. 将溶

7、液转移至塑料容器中后，室温保存。10) 2.5 N HCl组份浓度：2.5 N HCl 配制量：100 ml配制方法：1. 在 78.4 ml 的去离子水中加入 21.6 ml 的浓盐酸(11.6 N)，均匀混合。2. 室温保存。11) 5 M NaCl组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1. 称取 292.2 g NaCI 置于 1 L 烧杯中，加入约 800 ml 的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至 1 L 后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4C保存。11) 20% (W/V) Glucose组份浓度：20% (W/V) Glucose配制量：100 m

8、l配制方法：1. 称取 20 g Glucose 置于 100200 ml 烧杯中，加入约 80 ml的去离子水后，搅拌 溶解。2. 加去离子水将溶液定容至 100 ml。3. 高温高压灭菌后，4C保存。12) Solution 1(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl (pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mMGlucose 配制量：1 L配制方法：IM Tris-HCI( PH8.0)25ml(K5M EDTA (PH8.0)20ml20 % Glucose ( LHM)45mJdH2O910ml3.使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml

9、的 RNase A (20mg/ml)。13) Solution 11(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1% (W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于KOAcI47gCH3COOH57.5mf500ml 烧杯中 10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2加灭菌水定容至 500ml，充分混匀3.室温保存， 此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意： SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌14) Solution III(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：2. 加入 300 ml 去离子水后搅拌溶解。3

10、. 加去离子水将溶液定容至 500 ml。4. 咼温咼压火菌后，4 C 保存。15) 0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取 186.1 g Na2EDTA2H2O，置于 1 L 烧杯中。2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌。3. 用 NaOH 调节 pH 值至 8.0 (约 20 g NaOH)。注意：pH 值至 8.0 时，EDTA 才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至 1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16) 1 M DTT组份浓度：1 M DTT 配制量：20 ml 配制方法：1. 称取

11、3.09 g DTT，加入到 50 ml 塑料离心管内。2. 加 20 ml 的 0.01 M NaOAc (pH5.2)，溶解后使用 0.22 mm滤器过滤除菌3. 适量分成小份后，-20C保存。17) 10 mM ATP组份浓度：10 mM ATP 配制量：20 ml配制方法：1. 称取 121 mg Na2ATP 3H2O， 加入至U50 ml 塑料离心管内。2. 加 20 ml 的 25 mM Tris-HCl (pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，-20C保存。一.常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺 （Spermidine） :溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积

12、为10ml。分装成小份贮存于-20C。1mol/L 精胺（Spermine）:溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分 装成小份贮存于-20C。10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate :将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至 1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml 牛血清蛋白（BSA）:力卩 100mg 的牛血清蛋白（组分 V 或分子生物学试 剂级，无 DNA 酶）于 9.5ml 水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清 蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml， 然后

13、分装成小份贮存于-20C。1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）:在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加32.4ml 水，分成小 份贮存于-20C。或转移 100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾（potassium acetate :溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中， 加水定容 到 100ml。1mol/L 氯化钾 （KCl） :溶解 7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容 到 100ml。3mol/L 乙酸钠（sodium acetate :溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约90ml 水中， 用冰 乙酸调溶液的 pH

14、至 5.2， 再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（0.5mol/L），混合后形 成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g的 Na2EDTA 2H2O 和 20g 的 NaOH， 并溶于 水中， 定容至 1L。1mol/L HEPES: 将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用NaOH 调 pH （6.8- 8.2），然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl :力卩 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT :溶解 250mg 的 IPGT （异丙基硫代-&D-半乳

15、糖苷）于 10ml 水 中，分成小份贮存于-20C。1mol/LMgCI2:溶解 20.3g MgCI2 6H2O 于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/L PMSF :溶解 174mg 的 PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20Co20mg/ml 蛋白酶 K （proteinase K）：将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中，轻 轻摇动，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装 成小份贮存于-20C。10mg/mlRnase （无 DNase）（ DNase free

16、RNase :溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解 后于水浴中煮沸 15min，使 DNA 酶失活。用 1mol/L 的 Tris HCl 调 pH至 7.5, 于-20C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L 氯化钠（NaCI）:溶解 29.2g 氯化钠于足量的水中，定容至 100ml。10N 氢氧化钠（NaOH）:溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中（磁力搅 拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10% SDS （十二烷基硫酸钠）：称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 的水的烧杯 中

17、，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L 山梨（糖）醇（Sorbitol）:溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积 为 100ml。100%三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水, 用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5% X gal （5-溴-4-氯-3-吲哚&半乳糖苷）：溶解 25mg的 X gal 于 1ml 的 二甲基甲酰胺（DMF ），用铝箔包裹装液管，贮存于-20Co成分及终浓度成分及终浓度配制配制 100 同溶液各成分的出虽同溶液各成分的出虽2% 聚旗糖聚旗糖（Rcoll* 400 型）

18、型） 工聚工聚乙烯毗咯垸酗乙烯毗咯垸酗 （PVP-4O）2%BSA（组组分分 V水水2g2g加水至恿体积为加水至恿体积为 100ml-20C贮存。成分及裟浓度成分及裟浓度配制配制 10ml 溶液徐溶液徐成分的用量成分的用量.5mol/LTrisClOOmmot 儿儿 MgC12I00mnioi/L DTT2mmot/L ATPSmmol/L 盐酸收精胺（可选）盐酸收精胺（可选）0.5mg/ml BSA 组分组分 V ）（可选）（可选） 水水5ml 1 nial/L 贮液贮液Lml 1 nicl/L 贮液贮液 Ind lnkd/L 贮液贮液200ul 100 mmol/L 贮液贮液 50ul 1

19、miDDRU 贮液贮液 0.5ml 10 mg/mL 贮贮液液 2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20C。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs 贮液，-80C可贮存至少 6 个月。 10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度成分及终浓度配制溶液丼成分的出鲤配制溶液丼成分的出鲤lOmmol/L dATP2ul 100 mniol/L dATP 贮液贮液lOmmol/L dCTP2ul IOOinmol/LdCTP 贮液贮液lOnunoVL dGTP2ul K)O inmol/LdGTP 贮液贮液lOm

20、mol/LdTTP2u1 100 mmol/L dTTP 贮液贮液水水12ul成分厘终浓度成分厘终浓度配制配制 Wml 溶液於咸分的用量溶液於咸分的用量质呈浓度为质呈浓度为 20%聚乙二醇聚乙二醇2.5mol/L 氯化讷氯化讷 水水50J111 5 mol/L嵐化油嵐化油 威威处处 1 川休川休航化航化补足补足 lOOmi成少及终浓度成少及终浓度配制配制【L 溶液各成分的用量溶液各成分的用量3OOmmol/L 柠機酸柠機酸：钠钠（】水水3mol/L 氯化钠氯化钠水水88.2g I753g 补足补足 1L加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积 100ml，用磁力搅拌器搅拌溶 解。溶解柠檬酸

21、三钠（二水）和氯化钠于约0.9L 水中，加几滴 10N NaOH 溶液 调 pH 为 7.0,用水补足体积至 1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加 100ul DEPC 于 100ml 水中，使 DEPC 的体积分数为 0.1%。在 37C温浴至少 12h,然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min，以使残余的 DEPC 失活。DEPC 会与 胺起反应，不可用 DEPC处理 Tris 缓冲液。甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器 轻轻搅拌 1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1 号滤

22、纸过滤除去树脂后分成 小份，充氮气于-80C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffe）按照下表所给定的体积，混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二 钠（双碱）贮液，获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4 H2O）贮液：溶解 138g 于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷酸氢 二钠（Na2HPO4）贮液:I mol/L磷酸磷酸二氢钠二氢钠 Uni）1 mol/L磷酸磷酸氢二钠氢二钠（讪）（讪）最终最终 pH值值87712300K501506J8151856.2溶解 142g 于7752256373

23、52656.4685315t,56253756.6565435675104906.845055063906107.03306707.12807207.2成分及终浓度圈制limniJ各成分的用量lOrnrtxjVL Trii UC1 litimoLL EDTA*1!1L Ltml/L Trii HCi tplf7.4 ti.U 251?) )200ul 0.5JUOIALEDTA (pEi 8.09&呂mlTris 缓冲液（Tris-HCI buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中， 再根据所要求的pH （25C下）加一定量的 浓盐酸浓盐酸的体积浓盐酸的体积(ml)pH8

24、+6142128J3S46566671376908-68+48.28.07+87.67.47.2(11.6N),用水调整终体积至 1L 二电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液成分股终浓息成分股终浓息配制配制 IL溶液卜成分的用就溶液卜成分的用就2mol/LTris 碱碱JLmcVL乙酸乙酸100 nimcl/l-liDTA 水水24空空57J ml 的的冰乙嚴冰乙嚴(17-4 mol/L) 200ml 的的 0.5molZLEDTA (pH 8.0) 补足补足 IL成分及终浓度成分及终浓度配制配制 IL 涪液各战分的用星涪液各战分的用星445 mmoI/LTris 碱碱445 mniol/

25、L 硼酸盐硼酸盐10 nimol/L EDTA 水水54g27.5g 硼酸硼酸20 ml 的的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0) 补足补足 IL染料1%溴酚蓝(bromophenol blue)加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中， 搅拌或涡旋混合直到完全溶解1%二甲苯青 FF (xyle ne cyan ole FF)溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到 100ml010mg/ml 的溴化乙锭(ethidium bromide)小心称取 1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml 水， 用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4C贮存。凝胶上样液（gel loading solutions）成分及终谀度成分及终谀度配制配制 10ml 溶液各成分用輦溶液各成分用輦0.3 N 氢氧化钠氢氧化钠6 mmol/L EDTA貽聚蕊糖貽聚蕊糖（400型）型）叮叮 5%涣甲酚緑涣甲酚緑0.25%二二甲苯青甲苯青 FF水水300ul 10N氮嶽化钠氮嶽化钠1 120ul