石斛实验方案

1、实验方案一、镇痛实验（一）、扭体法1、动物：昆明小鼠，雄性，18-22g2、实验药物：旧石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、旧石斛水提（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、消炎痛（5mg/kg）3、试剂：生理盐水、0.6%醋酸溶液（新鲜配制）4、仪器：鼠笼、电子天平、灌胃针及注射器、秒表5、方法：1）将96只小鼠随机分为八组：每组12只，分别为：空白对照组，消炎痛组（阳性组），旧石斛榨汁（高低剂量）、毛石斛榨汁（高低剂量）、旧石斛水提（高低剂量）。2）小鼠按0.1ml/10g给药或蒸馏水，空白对照组以蒸馏水灌胃，

2、消炎痛阳性组以消炎痛溶液灌胃，其余各组分别以同体积高低剂量的石斛提取液灌胃。1次/d，连续5天。3）最后一次给药，如上。给药后30min，各组小鼠腹腔注射0.6%醋酸液0.2ml/只，记录15min内各组小鼠扭体反应次数。4）计算药物镇痛百分率,将所得结果进行统计学处理。药物镇痛百分率=（对照组平均扭体反应次数-给药组平均扭体反应次数）/对照组平均扭体反应次数×100%6、注意事项：1）醋酸有挥发性,宜用前新鲜配制,浓度为0.6-0.9%均可,实验前须作预实验2）每只动物腹腔注射部位和操作技术力求一致.（二）、热板法1、动物：昆明小鼠，雌性，18-22g2、实验药物：旧石斛榨汁（高剂

3、量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、旧石斛水提（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、消炎痛（5mg/kg）3、试剂：生理盐水、0.6%醋酸溶液（新鲜配制）4、仪器：热板测痛仪、电子天平、灌胃针及注射器、秒表5、方法：1）将96只小鼠随机分为八组：每组12只，分别为：空白对照组，消炎痛组（阳性组），旧石斛榨汁（高低剂量）、毛石斛榨汁（高低剂量）、旧石斛水提（高低剂量）。2）小鼠按0.1ml/10g给药或蒸馏水，空白对照组以蒸馏水灌胃，消炎痛阳性组以消炎痛溶液灌胃，其余各组分别以同体积高低剂量的石斛提取液灌胃。1次/d，连续5天。

4、3）筛选小鼠。接通电源，温度控制在55。将小鼠放于55的恒温热板上，记录小鼠痛阈值（疼痛反应发生的时间），测定2次痛阈值，以5-30d内不出现疼痛反应（舔足）者弃之不用。4）最后一次给药，如上。给药后30min，将各组小鼠置于55恒温热板上，立即开始计时，以小鼠疼痛发生为痛阈潜伏期5）计算痛阈提高百分率，将所得结果进行统计学处理。痛阈提高百分率=（用药后痛阈值-用药前平均痛阈值）/用药前痛阈值×100%6、注意事项：1）小鼠个体差异较大,宜选用痛阈值在5-30s内者为合格,不合格者弃之不用。小鼠不能连续进行测定。2）室温对本实验有一定影响，15-20为宜，过低小鼠反应迟钝，过高小鼠易

5、于敏感易引起跳跃，影响结果准确性。3）正常小鼠放入热板后易出现不安、举前肢、舔前足、踢后肢等现象，这些动作不能作为疼痛指标，只有舔后足才作为疼痛指标。二、镇静实验（一）、对小鼠自主活动的影响1、动物：昆明小鼠，雌雄各半，18-22g（小鼠曾做镇痛实验，自然饲养两日） 各组的扭体（雄性）1-6号+热板（雌性）7-12号小鼠2、实验药物：旧石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、旧石斛水提（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、戊巴比妥（5mg/kg）3、试剂：生理盐水4、仪器：XZC-4型小动物自主活动测定仪、电子天平、

6、灌胃针及注射器5、方法：1）将96只小鼠随机分为八组：每组12只，分别为：空白对照组，戊巴比妥组（阳性组），旧石斛榨汁（高低剂量）、毛石斛榨汁（高低剂量）、旧石斛水提（高低剂量）。2）小鼠按0.1ml/10g给药或蒸馏水，空白对照组以蒸馏水灌胃，戊巴比妥阳性组以戊巴比妥溶液灌胃，其余各组分别以同体积高低剂量的石斛提取液灌胃。1次/d，连续3天。3）实验前小鼠禁食不禁水12h，最后一次给药，如上，安定组以安定溶液灌胃，给药后30分钟，将各组小鼠置于小鼠自主活动测定仪内（除可待因组），适应3分钟后测定5分钟内小鼠活动次数（包括活动次数与站立次数）。5）将结果进行统计学处理6、注意事项：小鼠自主活动

7、前禁食12h，使其增加觅食活动；小鼠放入自主活动仪中有一个适应过程，各组间实验条件应力求一致，实验进行时尽量保持安静，避免影响小鼠活动。(二)、对小鼠睡眠时间的影响1、动物：昆明小鼠，雄性，25g（小鼠曾做镇痛实验，自然饲养4日） 2、实验药物：旧石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、旧石斛水提（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、3、试剂：生理盐水，0.4%戊巴比妥钠4、仪器：手表、电子天平、灌胃针及注射器5、方法：1）将96只小鼠随机分为八组：每组12只，分别为：空白对照组、阳性对照组、旧石斛榨汁（高低剂量）、

8、毛石斛榨汁（高低剂量）、旧石斛水提（高低剂量）。2）小鼠按0.1ml/10g给药或蒸馏水，空白对照组、阳性对照组以蒸馏水灌胃，其余各组分别以同体积高低剂量的石斛提取液灌胃。1次/d，连续3天。3）最后一次给药，如上，给药后60min，除空白对照组外，各组腹腔注射0.4%戊巴比妥钠0.1ml/10g，空白对照组夫妻那个注射等量生理盐水。记录各组动物睡眠时间（以小鼠翻正反射消失1min以上为入睡指标，从翻正反射消失至恢复时间为睡眠持续时间）。5）将结果进行统计学处理6、注意事项：实验前要进行预试，找出戊巴比妥的阈剂量；实验观察指标除睡眠时间外，还可以记录入睡潜伏期，阈下剂量小鼠睡眠个数及睡眠百分率

9、；天气冷时，动物不易苏醒，注意保温。三、镇咳实验（一）、小鼠氨水引咳法1、动物：昆明小鼠，雌雄各半，18-22g（小鼠曾做镇痛实验，自然饲养2日） 扭体（雄性）7-12号+热板（雌性）1-6号小鼠2、实验药物：旧石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、旧石斛水提（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、氢溴酸右美沙芬（5mg/kg）3、试剂：浓氨水4、仪器： 500ml玻璃钟罩、橡皮管、超声雾化器（或空气压缩机+玻璃喷雾头）、电子天平、灌胃针及注射器等5、方法：1）将96只小鼠随机分为八组：每组12只，分别为：空白对照组

10、，右美沙芬（阳性组），旧石斛榨汁（高低剂量）、毛石斛榨汁（高低剂量）、旧石斛水提（高低剂量）。2）小鼠按0.1ml/10g给药或蒸馏水，空白对照组以蒸馏水灌胃，右美沙芬阳性组以右美沙芬溶液灌胃，其余各组分别以同体积高低剂量的石斛提取液灌胃。1次/d，连续3天。3）最后一次给药，如上，给药后1h后，将各组小鼠放入玻璃钟罩内（除安定组外），打开通过橡皮管与之相连的超声雾化器，将浓氨水均匀地喷入玻璃钟罩内，喷雾10s，立即取出小鼠，观察和记录小鼠的咳嗽潜伏期和2min内咳嗽次数。5）将结果进行统计学处理6、注意事项：咳嗽潜伏期是指喷雾氨水开始时间至发生咳嗽所需的时间，小鼠咳嗽表现以其腹肌收缩（缩胸）

11、，同时张大嘴为准，有时可有咳声，需与喷嚏区别，需仔细观察；每鼠氨水喷雾量应一致；四、祛痰实验（一）、小鼠酚红排泄法1、动物：昆明小鼠，雌雄各半，18-22g（小鼠均做镇痛实验，再做过镇静或镇咳实验，自然饲养2日）2、实验药物：旧石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、毛石斛榨汁（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、旧石斛水提（高剂量：2g/kg、低剂量0.5g/kg）、氯化铵（5mg/kg）3、试剂：生理盐水、0.5%酚红生理盐水溶液、5%碳酸氢钠溶液4、仪器： 721型分光光度计、电子天平、灌胃针及注射器、秒表、鼠笼、手术剪、眼科镊、试管架、离心管、蛙板、丝线等5、方法

12、：1）将192只小鼠随机分为八组：每组24只，分别为：空白对照组，氯化铵（阳性组），旧石斛榨汁（高低剂量）、毛石斛榨汁（高低剂量）、旧石斛水提（高低剂量）。2）小鼠按0.1ml/10g给药或蒸馏水，空白对照组以蒸馏水灌胃，氯化铵阳性组以氯化铵溶液灌胃，其余各组分别以同体积高低剂量的石斛提取液灌胃。1次/d，连续3天。3）禁食不禁水12h，最后一次给药，如上，给药后30min，有腹腔注射0.5%粉红溶液0.5ml/只。30min后，颈椎脱臼处死小鼠，仰位固定于手术板上，剪开颈前皮肤，分离器官，剥去气管周围组织，剪下至甲状软骨至气管分支处的一段气管，放进盛有3ml生理盐水的试管中冲洗，再加入5%碳酸氢钠溶液0.1ml，离心。取上清液，用721型分光光度计（波长546n