爱乙梅实验室快速检测ppt课件

1、预防艾滋病、梅毒、乙肝母婴阻断实验室检测1.乙肝五项实验室快速检测。2.HIV实验室快速检测。3.梅毒螺旋体抗体非特异性反响检测TRUST。4.梅毒螺旋体抗体检测(ELISA法) 。5.乙肝人免疫球蛋白。 试剂称号：乙型肝炎病毒外表抗原、外表抗体、e抗原、e抗体、中心抗体检测试剂盒胶体金法 检测原理：HBsAg, HBeAg检测试纸条采用双抗体夹心法，试纸条含有被事先固定于膜上测试区(T)的多克隆抗体和控制区(C)的相应抗体。HBsAb检测试纸条采用双抗原夹心法，试纸条含有被事先固定于膜上测试区(T)的乙肝外表抗原和控制区(C)的相应抗体。测试时，血清/血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛细

2、效应下向上层析。如标本中含有相应的待测物质，在测试区内T出现一条红色条带,那么是阳性结果。如标本中不含有相应的待测物质，那么测试区内T将没有红色条带，那么是阴性结果。无论相应的待测物质能否存在于标本中，一条红色条带都会出如今质控区内C。质控区内C所显现的红色条带是断定能否有足够标本，层析过程能否正常的规范，同时也作为试剂的内控规范。HBeAb, HBcAb检测试纸条采用竞争抑制法，试纸条含有被事先固定于膜上测试区(T)的单克隆抗体和控制区(C)的相应抗体。测试时，血清/血浆标本滴入试剂板加样处，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体，那么同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争与预包被

3、在乳胶颗粒上的相应抗原反响。如标本中没有相应的抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原那么同膜上测试区(T)的单克隆抗体全部结合。强阳性标本，测试区内T将没有红色条带，弱阳性标本，测试区内T将有一条非常弱的红色条带，阴性标本，测试区内T将会出现明显的红色条带。无论相应的抗体能否存在于标本中，一条红色条带都会出如今质控区内C。质控区内C所显现的红色条带是断定能否有足够标本，层析过程能否正常的规范，同时也作为试剂的内控规范。标本搜集：标本搜集后应尽快分别出血清或标本搜集：标本搜集后应尽快分别出血清或血浆以防止溶血。检测时应尽量运用新颖的血浆以防止溶血。检测时应尽量运用新颖的标本。标本假设不能及时送检，可

4、在标本。标本假设不能及时送检，可在2-8冷藏冷藏3天。长期保管需冷冻于天。长期保管需冷冻于-20，忌，忌反复冻融。反复冻融。操作步骤：在进展测试前必需先完好阅读运操作步骤：在进展测试前必需先完好阅读运用阐明书，运用前将试剂板和血样标本恢复用阐明书，运用前将试剂板和血样标本恢复至室温至室温20-30。1.从原包装铝箔袋中取出试剂板，在小时内从原包装铝箔袋中取出试剂板，在小时内应尽快地运用。应尽快地运用。2.用吸管汲取血清用吸管汲取血清/血浆标本，逐滴每孔血浆标本，逐滴每孔2-3滴参与试剂板的五个加样孔中。滴参与试剂板的五个加样孔中。3.等待红色条带的出现，测试结果应在等待红色条带的出现，测试结果

5、应在15分分钟时读取。钟时读取。20分钟后断定无效。分钟后断定无效。检验结果断定：阳性检验结果断定：阳性+：两条红色条带：两条红色条带出现，一条位于测试区出现，一条位于测试区T内，另一条位内，另一条位于质控区于质控区C。阳性结果阐明：标本中含。阳性结果阐明：标本中含有待测物质。有待测物质。阴性阴性-：仅质控区：仅质控区C出现一条红色条出现一条红色条带，在测试区带，在测试区T内无红色条带出现。阴内无红色条带出现。阴性结果阐明：标本中检测不出待测物质。性结果阐明：标本中检测不出待测物质。无效：质控区无效：质控区C未出现红色条带，阐明未出现红色条带，阐明不正确的操作过程或试纸条已蜕变损坏。在不正确的

6、操作过程或试纸条已蜕变损坏。在任何情况下，应重新测试。假设问题依然存任何情况下，应重新测试。假设问题依然存在，应立刻停顿运用此批号产品，并与当地在，应立刻停顿运用此批号产品，并与当地供应商联络。供应商联络。留意：测试区留意：测试区T内的红色条带可显现出内的红色条带可显现出颜色深浅的景象。但是，在规定的察看时间颜色深浅的景象。但是，在规定的察看时间内，不论该色带颜色深浅，即使只需非常弱内，不论该色带颜色深浅，即使只需非常弱的色带也应判为阳性结果。的色带也应判为阳性结果。 强阳性+：仅质控区C出现一条红色条带，在测试区T内无红色条带出现。阳性结果阐明：标本中含有待测抗体。弱阳性+：质控区C出现一条

7、红色条带，在测试区T内有非常弱的红色条带出现。弱阳性结果阐明：标本中含有少量待测抗体。阴性 -：两条红色条带出现，一条位于测试区T内，另一条位于质控区C。阴性结果阐明：标本中检测不出待测抗体。无效：质控区C未出现红色条带，阐明不正确的操作过程或试纸条已蜕变损坏。在任何情况下，应重新测试。假设问题依然存在，应立刻停顿运用此批号产品，并与当地供应商联络。本卷须知：1. 乙肝两对半血清/血浆检测试剂板适用于测试血清/血浆标本。2. 由于在技术上和操作上能够出现的失误，同时也由于标本中存在干扰物,试剂结果有能够错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。3. 乙肝两对半血清/血浆检测试剂板只是定性的挑选乙肝

8、病毒血清标志物的存在，但不能确定其在标本中的含量。4. 测试结果应在15分钟时读取，20分钟后断定无效。HIV实验室快速检测试剂称号：艾滋病毒试剂称号：艾滋病毒1/2 型抗体快速检测胶体金法型抗体快速检测胶体金法检测原理：检测原理：HIV1/2 试剂盒采用高度特异性的抗体抗原反响及免疫试剂盒采用高度特异性的抗体抗原反响及免疫层析分析技术来定性检测血液中能否含有层析分析技术来定性检测血液中能否含有HIV1/2抗体，试剂盒中抗体，试剂盒中含有被事先固定于膜上测试区含有被事先固定于膜上测试区(T)的重组的重组HIV 抗原和质控区抗原和质控区(C)的相的相应抗体。测试时，血标本滴入试剂盒加样孔应抗体。

9、测试时，血标本滴入试剂盒加样孔S内，血标本中的内，血标本中的HIV1/2抗体与预包被在膜上的重组抗原抗体与预包被在膜上的重组抗原-乳胶结合物反响。然后，乳胶结合物反响。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析，在测试区混合物随之在毛细效应下向上层析，在测试区T与固定在膜上的与固定在膜上的重组重组HIV抗原反响。假设血液中含有抗抗原反响。假设血液中含有抗HIV-1或或HIV-2抗体，在测抗体，在测试区内试区内T会出现一条红色条带，阐明是阳性结果。假设在测试区会出现一条红色条带，阐明是阳性结果。假设在测试区内内T没有出现红色条带，那么血液中不含有抗没有出现红色条带，那么血液中不含有抗HIV1/2 抗体

10、，抗体，阐明是阴性结果。无论抗阐明是阴性结果。无论抗-HIV1/2抗体能否存在于血液中，混合物抗体能否存在于血液中，混合物都会继续向上层析至质控区都会继续向上层析至质控区C，质控区的相应抗体与乳胶结合物，质控区的相应抗体与乳胶结合物反响出现一条红色条带。质控区内反响出现一条红色条带。质控区内C所显现的红色条带是断定层所显现的红色条带是断定层析过程能否正常的规范，同时也作为试剂的内控规范。析过程能否正常的规范，同时也作为试剂的内控规范。结果断定：结果断定：阳性阳性+：两条红色条带出现。一条位于测试区内：两条红色条带出现。一条位于测试区内T，另一条位于质，另一条位于质控区内控区内C。阴性阴性-：仅

11、质控区：仅质控区C出现一条红色条带，在测试区内出现一条红色条带，在测试区内T无红色条无红色条带出现。带出现。无效：质控区无效：质控区C未出现红色条带，阐明不正确的操作过程或试剂盒已蜕未出现红色条带，阐明不正确的操作过程或试剂盒已蜕变损坏。在任何情况下，应重新测试。假设问题依然存在，应立刻停顿运用变损坏。在任何情况下，应重新测试。假设问题依然存在，应立刻停顿运用此批号产品，并与当地供应商联络。此批号产品，并与当地供应商联络。留意：由于样本中抗留意：由于样本中抗-HIV 抗体滴度的不同，测试区抗体滴度的不同，测试区T内的红色条带会内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为

12、断定样本中抗显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为断定样本中抗体滴度高低的根据。体滴度高低的根据。 标本搜集：标本搜集：血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽能够立刻便用血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽能够立刻便用，抗凝血应在，抗凝血应在24小时内运用以防止融血。血清小时内运用以防止融血。血清/血浆标本的搜集：血血浆标本的搜集：血清清/血浆标本由静脉采血后离心获得，标本在血浆标本由静脉采血后离心获得，标本在2-8可保管一周。如可保管一周。如长期保管需冷冻。防止反复冻融。长期保管需冷冻。防止反复冻融。操作步骤：在进展任何测试前必需先完好阅读运用阐明，运用

13、前将检操作步骤：在进展任何测试前必需先完好阅读运用阐明，运用前将检测试剂盒和全血测试剂盒和全血/血清血清/血浆标本恢复至室温血浆标本恢复至室温20-30，取出反，取出反响缓冲液并放置响缓冲液并放置20分钟使其恢复至室温。分钟使其恢复至室温。1从原包装铝箔袋中取出试剂盒留意：在翻开铝箔袋前应先恢复从原包装铝箔袋中取出试剂盒留意：在翻开铝箔袋前应先恢复至室温。在至室温。在1小时内应尽快地运用，特别是在室温高于小时内应尽快地运用，特别是在室温高于30 或是或是在高度潮湿的环境中应尽快地运用。在高度潮湿的环境中应尽快地运用。在一小时内测试将会得到最正确效果。在一小时内测试将会得到最正确效果。2将试剂盒

14、置于干净平坦的台面上，用吸管汲取指尖血或静脉血后将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管汲取指尖血或静脉血后滴入滴入1滴全血滴全血/血清血清/血浆约血浆约25ul于加样孔于加样孔S中，随后参与中，随后参与1 滴滴缓冲液于加样孔缓冲液于加样孔S 中。切勿将指尖血直接滴入加样孔内。中。切勿将指尖血直接滴入加样孔内。3等待红色条带的出现，在等待红色条带的出现，在15分钟左右读取测试结果。关键要留意分钟左右读取测试结果。关键要留意，在红色条带出现以前，背景要明晰，特别当样本中含有低滴度的抗，在红色条带出现以前，背景要明晰，特别当样本中含有低滴度的抗-HIV1/2抗体，会导致出现的抗体，会导致出现的T线颜色

15、很淡，此时更需留意背景要线颜色很淡，此时更需留意背景要明晰。在明晰。在20分钟后读取的结果无效。分钟后读取的结果无效。 本卷须知：本卷须知： HIV1/2乳胶层析法检测试剂盒仅用于体外诊断，并适乳胶层析法检测试剂盒仅用于体外诊断，并适用于检测全血用于检测全血/血清血清/血浆样本中的抗血浆样本中的抗-HIV1/2抗体。这抗体。这项测试仅表示样本中抗项测试仅表示样本中抗-HIV1/2 抗体的存在，而不能作抗体的存在，而不能作为机体感染为机体感染HIV-1或或HIV-2的规范。为了确保结果的准的规范。为了确保结果的准确性，可对样本用确性，可对样本用ELISA 或或WesternBlot 作进一步的作

16、进一步的分析。同一切的诊断试剂一样，检测结果必需结合内科医分析。同一切的诊断试剂一样，检测结果必需结合内科医生得出的其它临床病症进展诊断。生得出的其它临床病症进展诊断。 假设测试结果呈阴性并有临床病症存在，可建议运用其他假设测试结果呈阴性并有临床病症存在，可建议运用其他临床方法进展测试。阴性结果并不能排除感染临床方法进展测试。阴性结果并不能排除感染HIV-1或或HIV-2的能够性。的能够性。梅毒螺旋体抗体非特异性反响检测梅毒螺旋体抗体非特异性反响检测TRUST 检测方法：甲苯胺红不加热血清学实验检测方法：甲苯胺红不加热血清学实验TRUST 实验原理：采用性病研讨所实验室玻片实验实验原理：采用性

17、病研讨所实验室玻片实验VDRL抗抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成。将可溶性抗原原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成。将可溶性抗原先吸附于适当大小的颗粒性载体的外表，然后与相应抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体的外表，然后与相应抗体作用，在适当的电解质存在的条件下，出现凝集景象，既作用，在适当的电解质存在的条件下，出现凝集景象，既可定性检测，又能半定量测定。该方法简便，敏感度较高可定性检测，又能半定量测定。该方法简便，敏感度较高，在临床检验中被广泛运用。，在临床检验中被广泛运用。 标本搜集：用无抗凝管抽取静脉血标本搜集：用无抗凝管抽取静脉血2-3ml，离心，离心1500-3000转转/分分别

18、出血清。不能立刻测定的标本分分别出血清。不能立刻测定的标本应保管于应保管于 2-8的冰箱，于的冰箱，于3内检测，超越内检测，超越3天应分别出天应分别出血清于血清于2-8的冰箱，一周内检测终了。的冰箱，一周内检测终了。 操作步骤：操作步骤： 1 分别汲取分别汲取50ul梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸片的两个圆圈中。片的两个圆圈中。 2 取待检血清取待检血清50ul不需灭活置于纸片的另一圆圈中不需灭活置于纸片的另一圆圈中。 3 用公用滴管和吸头垂直分别滴加用公用滴管和吸头垂直分别滴加TRUST试剂试剂1滴于上滴于上述血清中。述血清中。 4 按每分钟按每分钟10

19、0转摇动转摇动8分钟，肉眼察看结果。分钟，肉眼察看结果。 结果断定：结果断定： 1 阳性反响阳性反响+：可见中等或较大的红色：可见中等或较大的红色凝集物。凝集物。 2 弱阳性反响弱阳性反响+：可见较小的红色凝集物。：可见较小的红色凝集物。 3 阴性反响阴性反响：可见均匀的红色抗原颗粒而无凝集物：可见均匀的红色抗原颗粒而无凝集物。 本卷须知本卷须知 ： 1.操作前请仔细阅读操作规程。操作前请仔细阅读操作规程。 2.试剂盒存放于试剂盒存放于2-8摄氏度环境中；运用前将试剂盒置于摄氏度环境中；运用前将试剂盒置于室温下平衡，实验应在室温室温下平衡，实验应在室温23-29条件下进展。条件下进展。 3.批

20、号不同的试剂盒不能混用。批号不同的试剂盒不能混用。 4.待测标本必需符合要求，溶血标本不能进展检测。待测标本必需符合要求，溶血标本不能进展检测。 5.如做半定量实验，可将待检血清用生理盐水作倍比稀如做半定量实验，可将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后按上述定性方法进展实验，以呈现明显凝集反响释，然后按上述定性方法进展实验，以呈现明显凝集反响的最高稀释度作为该血清的凝集效价。的最高稀释度作为该血清的凝集效价。 6.本实验系非特异性反响需结合临床进展综合分析，必本实验系非特异性反响需结合临床进展综合分析，必要时作特异性密螺旋体实验进展确认。要时作特异性密螺旋体实验进展确认。 7.运用后一切物品，应

21、按传染源处置。运用后一切物品，应按传染源处置。 8.TRUST抗原在运用前必需充分摇匀。抗原在运用前必需充分摇匀。 检测方法：酶联免疫吸附实验检测方法：酶联免疫吸附实验ELISA 实验原理：双抗原夹心法实验原理：双抗原夹心法 用精制的基因工程表达的酶毒螺旋体特异性抗原用精制的基因工程表达的酶毒螺旋体特异性抗原色被酶粒板及标志辣根过氧化酶，同时参与待测色被酶粒板及标志辣根过氧化酶，同时参与待测血清或血浆与酶标志抗原以血清或血浆与酶标志抗原以TMB显色。本方法适显色。本方法适用于献血员挑选，婚检和临床诊断梅毒螺旋体感用于献血员挑选，婚检和临床诊断梅毒螺旋体感染。染。 标本搜集：用肝素锂抗凝管抽取静

22、脉血标本搜集：用肝素锂抗凝管抽取静脉血23ml，离心，离心15003000转分转分15分钟分别出分钟分别出血浆，不能立刻测定的标本应保管于血浆，不能立刻测定的标本应保管于28于于3日内检测，超越日内检测，超越3天应分别出血浆于天应分别出血浆于28的冰的冰箱内保管，一周内检测终了。箱内保管，一周内检测终了。梅毒螺旋体抗体检测梅毒螺旋体抗体检测(ELISA法法) 操作步骤：操作步骤： 1取出酶标板条固定于板架上，按顺序编号，室温平衡取出酶标板条固定于板架上，按顺序编号，室温平衡18-25备用。备用。 2加样：分别在相应孔中参与加样：分别在相应孔中参与100ul阴、阳性对照血清和阴、阳性对照血清和待

23、测样本。待测样本。 3温育：覆上封板模，置温育：覆上封板模，置37温育温育60分钟。分钟。 4洗涤：小心将封板膜揭掉，运用冼板机吸干孔内液体，洗涤：小心将封板膜揭掉，运用冼板机吸干孔内液体，用洗涤液充分洗涤用洗涤液充分洗涤6遍，最后一次尽量扣干。遍，最后一次尽量扣干。 5加酶：分别在每孔中参与酶标志抗原加酶：分别在每孔中参与酶标志抗原100ul。 6温育：覆上封板模，置温育：覆上封板模，置37温育温育30分钟。分钟。 7显色：每孔加显色剂显色：每孔加显色剂A、B各各50ul，轻拍混匀，轻拍混匀37避光避光显色显色30分钟。分钟。 8测定：每孔加终止液测定：每孔加终止液50ml，混匀，于，混匀，

24、于450nm处，用处，用空白孔调零的测定各孔空白孔调零的测定各孔OD值。值。 结果断定：结果断定： 样本样本OD值值S/C.o.1者为梅毒螺旋体抗体反响阳性。者为梅毒螺旋体抗体反响阳性。 样本样本OD值值S/C.o.1者为梅毒螺旋体抗体反响阴性。者为梅毒螺旋体抗体反响阴性。 阴性对照阴性对照OD均值均值0.1或阳性对照或阳性对照OD均值均值0.5时，时，实验无效，应重新实验。实验无效，应重新实验。 本卷须知：本卷须知： 1 加样加样 应将所加物加在板孔底部，防止加在孔壁上部，应将所加物加在板孔底部，防止加在孔壁上部，并留意不可溅出，不可产生气泡并留意不可溅出，不可产生气泡. 2 保温保温 抗原抗体反响的完成需求一定温度和时间。普通抗原抗体反响的完成需求一定温度和时间。普通采用采用37使抗原抗体经分散到达反响的终点。使