水通道蛋白5在鼻息肉组织中的表达及意义

1、水通道蛋白5在鼻息肉组织中的表达及意义李成文1张国胜1（通讯作者）田军2（1潍坊医学院 山东潍坊261042； 2潍坊市人民医院耳鼻喉科 山东潍坊 261041）【摘要】目的 探讨水通道蛋白5（aquaporin-5,aqp-5）在鼻息肉组织中的表达， 分析其在该病变中的作用机制。方法 选择正常下鼻甲组织24例和鼻息肉组织 32例，采用免疫组织化学技术检测aqp-5在下鼻甲和鼻息肉组织中的表达及分 布情况。结果免疫组化染色显示aqp-5在鼻息肉和正常下鼻甲组织中均有不同 程度的表达；固有层腺体中aqp-5的阳性细胞表达率，下鼻甲组显著高于鼻息肉 组，差异有统计学意义（pv0.05）；血管及血管

2、内皮中aqp5的阳性细胞表达率， 下鼻甲组显著低于鼻息肉组，差异有统计学意义（pv0.05）。结论aqp-5在鼻 息肉组织中的异常表达与鼻息肉的形成密切相关。【关键词】鼻息肉 水通道蛋白 免疫组织化学【中图分类号】r765【文献标识码】a【文章编号】2095-1752 （2012） 32-0024-02鼻息肉是耳鼻喉科的常见病和多发病，成年人的发病率较高，其发病有 着极其复杂的因素1。临床上最常见的病理类型是水肿型，约占总数的85% 90%,组织学表现为炎性细胞浸润、血管扩张、间质水肿及腺体增殖亢进，因此 对鼻息肉水肿机制的研究具有重要的临床意义。水通道蛋白（aquaporins, aqps）

3、是近年新发现的一种膜蛋白，是一族 广泛存在于原核和真核牛物细胞膜上选择性高效转运水分子的特异孔道，其在体 内液体转运和腺体分泌方面具有重要作用。己有报道指出aqp1、aqp2、aqp3 及aqp8与鼻息肉组织水肿的发牛密切相关。aqp5是否在鼻息肉的形成中起一 定作用，国内外文献报道较少。木研究利用免疫组织化学技术检测aqp5在鼻息 肉中的表达和分布，以探讨aqp5与鼻息肉形成的关系。1材料与方法1.1临床资料鼻息肉组：32例，其中男20例，女12例，年龄3748岁，标本取自 2011年4月2012年4月在昌乐县人民医院耳鼻喉科住院行鼻内镜下鼻息肉切 除患者，术前2周未行鼻用糖皮质激素、抗组胺

4、类药物治疗，术后病理证实为鼻 息肉组织。下鼻甲组：24例，其中男16例，女8例，年龄4056岁，标本来自 同一时期慢性肥厚性鼻炎患者行下鼻甲部分切除术的下鼻甲黏膜。1.2实验方法1.2.1免疫组化染色材料 美国santa cruz公司生产的羊抗人aqp-5,链 霉素抗生物素蛋白过氧化物酶(streptavidinperoxidase, sp)免疫组化试剂盒购 自北京中山生物技术公司，抗体均以0.1mol/l的磷酸盐缓冲液(phosphate-buffor silutlon,pbs,ph 7.4)稀释，浓度为 1:100。1.2.2免疫组化染色 所有标本经4%多聚甲醛固定48h后，石蜡包埋， 连

5、续切片，制成厚约5μm切片，脱蜡、梯度酒精脱水，3%甲醇双氧水漂洗 除去内源性过氧化物酶活性，微波修复抗原，37°c滴加一抗，4°c过俊，加入sp, 37°c反应20minz pbs冲洗，二氨基联苯胺(diamionben zidene,dab)显色，苏木 精复染，脱水、二甲苯透明、中性树胶封片，显微镜下观察。用已知人肾曲小管 阳性切片为阳性对照，用pbs缓冲液代替一抗同步染色作为阴性对照。1.3阳性结果判定及统计学分析阳性细胞表达为棕黄色，每一标本做连续切片，选其中23张结构背 景清晰，阳性表达好的切片作为统计分析对象，低倍镜下观察每张切片的阳性细

6、 胞表达区域，从中随机观察10个高倍镜视野(&times;200),手工计数鼻息肉与 下鼻甲组织的各层结构的阳性细胞表达数。用spss17.0软件对数据进行t检验, 以p<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1aqp-5在鼻息肉与下鼻甲黏膜组织中的分布aqp-5在阴性对照均不着色，在阳性对照片中见人肾曲小管胞浆呈明显 棕黄色。下鼻甲组织的上皮细胞层、黏膜下腺体及血管中均有aqp5的表达，但 主要表达于黏膜下腺体，血管及其内皮表达较少。鼻息肉组织的上皮细胞及固有 层均有aqp-5表达，但主要表达于固有层毛细血管及其内皮细胞。2.2aqp-5在鼻息肉与下鼻甲黏膜组织中的表达aqp-

7、5在鼻息肉和下鼻甲组织中均有不同程度的表达，aqp-5阳性细胞 表达率在固有腺体中鼻息肉组织较下鼻甲组织低，差异有统计学意义(p<0.05)； 而在血管及血管内皮中鼻息肉组织较下鼻甲组织高，差异有统计学意义(p< 0.05)；在上皮细胞中鼻息肉组织较下鼻甲组织低但差异无统计学意义(p>0.05)； 见表1表1鼻息肉和下鼻甲组织中aqp-5的阳性表达(x-&plusmn;s)注：采用t检验，与下鼻甲组织比较，*p<0053讨论鼻息肉是一种以极度水肿的鼻黏膜在中鼻道形成单发或多发息肉为特 征的良性病变组织，其病因和发病机制至今尚未阐明，但作为种独特的炎性水 肿组织，

8、其水肿形成的机制可能存在多种因素2。有学者认为鼻息肉组织水肿3 是由于鼻黏膜血管通透性增加所致。水通道蛋白(aquaporins, aqps)是一类与水的通透有关的蛋白,是快 速跨膜运输水的专用通道，目前在哺乳动物已发现至少13种水通道蛋白，即 aqp0aqp124o介导自由水分子的跨生物膜转运是其基本功能，由于其活化 能较低，转运速度快，不受质膜分子组成、温度等生物因素的影响，因此只要流 体静水压或渗透压梯度不同，就可以有水分子顺渗透压梯度通过水通道蛋白5。 实验证实aqp5蛋白有265个氨基酸组成，分子量为27kd,具有高度选择性水通 透性，跨膜水转运是其最基本的生理功能。从目前的研究来看

9、，aqp5主要表达 于哺乳动物唾液腺、泪腺和呼吸道粘膜下腺等组织，被认为与机体各种腺体的分 泌功能密切相关。近年来随着对aqps研究的不断深入，aqps与鼻息肉组织水 肿发病机制的关系也越来越得到人们的关注。本研究发现，aqp-5在鼻息肉和正常下鼻甲组织中均有不同程度的表达, 但分布不同。aqp-5在下鼻甲组织的上皮细胞、黏膜下腺体和血管中均有表达， 但主要表达于腺体，血管表达较少。表明aqp-5在维持下鼻甲黏膜下腺体正常分 泌功能方面具有重要的意义。aqp-5在鼻息肉组织中的表达及分布提示其病理改 变与水通透性有关：©aqp-5在毛细血管及内皮细胞中的高表达，使血管通透性 增加，血

10、浆渗出，导致组织间液增多，促进鼻息肉的形成。腺体上皮细胞的腔 膜是跨膜水转运的限速屏障，而aqp-5在腺体中的低表达，使液体转运失去了限 速屏障的作用，导致运输通道发生障碍，不利于液体在腺体上皮细胞内的转运， 从而分泌和渗出到组织间隙中的液体大量积聚，造成局部组织水肿，随着水肿的 加剧，局部组织张力增高，易造成上皮破裂和损伤。按照tos的鼻息肉形成的“上 皮破裂”学说，也有助于鼻息肉的形成。aqp-5在鼻息肉的发生过程中可能并非孤立地发挥作用，其在鼻息肉形 成过程中的具体调控机制有待进-步明确。本实验从病理学的角度出发，证实了 aqp-5在鼻息肉组织中的表达，从其在鼻息肉和下鼻甲组织中的不同的

11、表达量并 结合下鼻甲的功能可以推测出aqp-5的正常的表达对保持机体局部组织适当的 水分及维持正常的生理渗透压具有重要的作用。而通过研制水通道蛋白抑制因子 来抑制其过多的表达或通过控制水通道蛋白的表达量来平衡液体的分泌和吸收， 可能为鼻息肉的治疗及防止术后复发提供一种新的治疗手段。参考文献杨禧禧内窥镜鼻窦外科鼻鼻窦鼻息肉病与变态反应j 国外医学耳鼻喉科 学分册，1995,19 (2)： 75-792meltzer eo. the phama cological basis for the treatment of perennial allergic rhinitis and non2 all

12、ergic rhinitis with topical corticosteroidsj .aiiergy/1997/52(suppl36):33-40.张欣欣，郭永清，张文杰，等na +通道与鼻息肉形成关系的初步研究中华耳鼻咽喉科杂志，2000, 35 (5)： 359-3624 yung-chang chenmelissa a,cadnapaphomchaietal.ciinical update on renal aquaporins j .biology of the cell,2005,97:357371.5 verkman as, vanhoek an, ma xetal water transport across mammalian cell mem