无菌检查法演示实验ppt课件

1、无菌检查法演示实验无菌检查法演示实验抗生素室抗生素室 易大为易大为辽宁省药品检验所辽宁省药品检验所提纲提纲1.定义定义2.常见检验种类常见检验种类3. 4.培育基及培育基的适用性检查培育基及培育基的适用性检查5.稀释液以及冲洗液稀释液以及冲洗液6. 无菌检查法实例无菌检查法实例7.方法学验证实验方法学验证实验1.定义定义:系指用于检查药典要求无菌的药系指用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他种品、医疗器具、原料、辅料及其他种类能否无菌的一种方法。类能否无菌的一种方法。 的意义的意义: 仅阐明了供试品在该检验条件下未发仅阐明了供试品在该检验条件下未发现被微生物污染。现被微生物污染

2、。 2.常见检验种类 注射剂 (水针、粉针、油乳注射剂 眼用以及非注射产品 手术、烧伤、严重创伤面给药制剂 无菌封装的原料药 医疗器具和医用资料3.培育基培育基 硫乙醇酸盐流体培育基硫乙醇酸盐流体培育基 3035 红色氧化层红色氧化层h深度的深度的1/5， 100水浴加热除去氧化层，水浴加热除去氧化层， 时间不超越时间不超越20分钟分钟 改良马丁培育基改良马丁培育基 2328沸水浴加热10min灭菌后放置灭菌后放置3天的培育基天的培育基4. 培育基的适用性检查培育基的适用性检查 无菌性检查无菌性检查 每批培育基随机取不少于每批培育基随机取不少于5支瓶支瓶,培育培育14天天,应无菌生长。应无菌生

3、长。灵敏度检查灵敏度检查 硫乙醇酸盐流体培育基硫乙醇酸盐流体培育基 12ml，9支，支，4种菌，种菌，35 培育培育3天；天； 改良马丁培育基改良马丁培育基 9ml，5支，支，2种菌，种菌，25 培育培育5天。天。结果判别结果判别:空白管应无菌生长空白管应无菌生长,加菌管均加菌管均生长良好生长良好菌液制备菌液制备100 cfu/ml 的菌悬液的菌悬液生孢梭菌生孢梭菌64901铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌10104枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 63501金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌26003硫乙醇酸盐流体培育基灵敏度检查硫乙醇酸盐流体培育基灵敏度检查 实验实验5.稀释液以及冲洗液稀释液以及冲洗液0.1%

4、蛋白胨水溶液蛋白胨水溶液 稀释液稀释液假设蛋白胨溶液浑浊，应过滤假设蛋白胨溶液浑浊，应过滤聚山梨酯聚山梨酯80-0.1%蛋白胨水溶液蛋白胨水溶液 非水溶液制剂供试品的冲洗非水溶液制剂供试品的冲洗十四烷酸异丙酯十四烷酸异丙酯 膏剂和粘性膏剂和粘性油剂的溶剂油剂的溶剂 ，膜滤除菌，膜滤除菌6.供试品的无菌检查供试品的无菌检查明确检验数量明确检验数量 与检验量与检验量 根据供试品的情况，确定检样数量根据供试品的情况，确定检样数量批出厂批出厂or上市抽检；上市抽检；固体制剂固体制剂or液体制剂；液体制剂；直接接种法直接接种法or薄膜过滤法薄膜过滤法参考药典附录参考药典附录90-91页表页表1，表，表2

5、，表，表3 检验流程：取规定量供试品 例如：红霉素眼膏无菌检查十四烷酸异丙酯溶解 0.1%蛋白胨水溶液萃取 取水相作为供试液薄膜过滤 0.5%聚山梨酯80-0.1%胨水溶液冲洗薄膜加培育基培育14天 上市抽检样品 膏剂和粘性油剂供试品 规格：2.5g：12.5mg红霉素 薄膜过滤法阳性对照添加1/2最小检验量 根据以上的检品信息，查表3确定最少检验数量以及最少取样量知信息： 本品装量2.5g ：300mg M 5g 最少检验数量 供试品 + 阳性对照： 10 + 5 = 15 支 每支最少取样量 ：150mg 每支实践取样量：1g左右 约为装量的2/5 合计的接入量15克左右 十四烷酸异丙酯的

6、用量约为供试品总接入量的1倍2倍左右。 作用：溶解膏剂中的凡士林，使红霉素分散均匀。 十四烷酸异丙酯实践用量25ml 萃取液：0.1%蛋白胨水溶液200ml 冲洗液：检细菌、检真菌、阳性对照 0.5%聚山梨酯80-0.1%胨水溶液2100ml 阴性对照：冲洗液400ml小结：小结：薄膜过滤法：薄膜过滤法： 阳性对照添加阳性对照添加1/2最小检验量最小检验量 检验数量：检验数量： 15支，每支取样支，每支取样1克，总接入量克，总接入量15克克冲洗液用量：冲洗液用量：2100ml，700ml/筒筒阳性对照阳性对照金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌100 cfu 供试品供试品阴性对照阴性对照硫乙醇酸盐流体

7、培育基硫乙醇酸盐流体培育基改良马丁培育基改良马丁培育基结果判别结果判别 规定温度，培育规定温度，培育14天天供试品供试品a.无菌生长，同时阳性管有菌生长无菌生长，同时阳性管有菌生长 符合规定符合规定 b.有菌生长有菌生长 不符合规定不符合规定 c.实验结果无效，须复试实验结果无效，须复试 设备环境缘由设备环境缘由 实验过程染菌实验过程染菌阴性管有菌生长阴性管有菌生长 无菌操作不当无菌操作不当d.阳性管规定时间内无菌生长阳性管规定时间内无菌生长 23天内天内 须重新进展方法验证须重新进展方法验证7.方法学验证实验方法学验证实验 当供试品为新的产品或供试品的组分、检验条件发生改动时， 需进展方法学

8、验证 直接接种法 6个菌株 调查供试品能否有抑菌作用 薄膜过滤法 选择供试品对其生长有抑制造用的菌株做方法学调查调查冲洗量以及其他灭活方法的效果直接接种法直接接种法 方法学验证实验方法学验证实验 取红霉素眼膏一支，无菌操作取出全部内容取红霉素眼膏一支，无菌操作取出全部内容物，移入含适宜乳化剂的稀释液中，充分物，移入含适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，作为供试液；混合，作为供试液；量取一定体积供试液相当于固体取样量量取一定体积供试液相当于固体取样量150mg置相应的培育基中；置相应的培育基中；(改良马丁改良马丁接入相应的实验菌接入相应的实验菌 黑曲霉黑曲霉 or 白色念珠白色念珠菌菌同时做阳性对照

9、同时做阳性对照25培育培育35天，逐日察看天，逐日察看结论1:红霉素对黑曲霉生长无抑制造用.红霉素对白色念珠菌生长无抑制造用. 薄膜过滤法薄膜过滤法调查冲洗量调查冲洗量 方法学验证方法学验证实验实验 实验菌：实验菌： (1)生孢梭菌生孢梭菌64901 (2)铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌10104 (3)枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 63501 (4) 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌26003 总取样量：总取样量：15g / 每株实验菌每株实验菌123+:对看管; 1:没有冲洗; 2:冲洗液体积200ml; 3:冲洗液体积400ml.35,培育24小时. +:对看管; 1:没有冲洗; 2:冲洗液体积200ml.35,培育48小时.12结论2:红霉素对生孢梭菌生长无抑制造用.红霉素对铜绿假单孢菌生长无抑制造用. :对看管对看管; 1:没有冲洗没有冲洗; 2:冲洗液体积冲洗液体积200ml; 3:冲洗液体积冲洗液体积400ml.35,培育培育72小时小时. 123结论3:红霉素对枯草芽孢杆菌有抑制造用.每筒加样量5g(相当于红霉素25mg), 冲洗液体积400ml,枯草芽孢杆菌48小时后可见微弱生长,72小时生长良好.3. 在该检验条件下,冲洗400ml,三天内可检出枯草芽孢杆菌.+:对看