第五章 黄酮类化合物

1、 D-D-葡萄糖、葡萄糖、D-D-半乳糖、半乳糖、 D-D-木糖、木糖、L-L-鼠李糖、鼠李糖、 L-L-阿拉伯糖、阿拉伯糖、D-D-葡萄糖醛酸等。葡萄糖醛酸等。*OHOOOO2*OOOOOOOO47+ 有有 交叉共轭体系交叉共轭体系 无无黄酮（黄酮（灰黄灰黄黄色黄色） 二氢黄酮二氢黄酮黄酮醇（黄酮醇（灰黄灰黄黄色黄色） 二氢黄酮二氢黄酮查耳酮（查耳酮（黄黄橙橙黄色黄色） 二氢查耳二氢查耳花色素类（颜色随花色素类（颜色随pH而改变）而改变） 黄烷醇类黄烷醇类 异黄酮（无或微黄色）异黄酮（无或微黄色） 红色（红色（pH 8.8.5）OOOOOO47+2OOHRH R=H 二氢黄酮R=OH 二氢黄

2、酮醇黄酮类化合物溶解性（极性）规律黄酮类化合物溶解性（极性）规律:三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元3 - O - 糖苷糖苷 7 - O - 糖苷（平面性分子）糖苷（平面性分子）花色素花色素(平面性分子平面性分子,离子型离子型) 非平面性分子非平面性分子 平平面性分子面性分子黄酮苷黄酮苷(亲水性亲水性) OOH+Cl（二）碱性：（二）碱性： -吡喃酮环吡喃酮环1-氧原子氧原子 微弱碱性（孤对电子，接受质子）微弱碱性（孤对电子，接受质子） 仅溶于强的、浓酸仅溶于强的、浓酸+水水 （浓硫酸）（浓硫酸） 烊烊 盐（呈色）盐（呈色） 应用应用 初步鉴别黄酮母核类型：黄酮、黄酮醇初步鉴别

3、黄酮母核类型：黄酮、黄酮醇 黄黄橙色，并有荧光橙色，并有荧光 二氢黄酮二氢黄酮 橙红（冷）、紫红（热）橙红（冷）、紫红（热） 查耳酮查耳酮 橙红橙红洋红洋红 异黄酮（二氢）异黄酮（二氢） 黄色黄色 橙酮橙酮 红红洋红洋红四显色反应四显色反应一、显色反应（一）还原反应一、显色反应（一）还原反应反应类型反应类型 鉴别特征鉴别特征 鉴别意义鉴别意义 备注备注 盐酸盐酸-镁粉镁粉 黄酮、二氢黄酮、黄酮、二氢黄酮、 红红紫红紫红 黄酮类特征性黄酮类特征性 假阳性假阳性 反应反应 黄酮醇、二氢黄酮醇黄酮醇、二氢黄酮醇 红红紫红紫红 鉴别反应鉴别反应 （花色素）（花色素） （最常用）（最常用） 查耳酮、橙酮

4、、查耳酮、橙酮、 （-） 儿茶素类、异黄酮儿茶素类、异黄酮 （-） 四氢硼钠四氢硼钠 二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇 红红紫红紫红 二氢黄酮类特有二氢黄酮类特有 还原反应还原反应 其它黄酮类其它黄酮类 （-） 钠汞齐反应钠汞齐反应 黄酮、二氢黄酮黄酮、二氢黄酮 红红 异黄酮、二氢异黄酮异黄酮、二氢异黄酮 红红 黄酮醇类黄酮醇类 黄黄淡红色淡红色 二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类 棕黄色棕黄色与金属盐类试剂络合反应与金属盐类试剂络合反应反应类型反应类型 鉴别特征及鉴别意义鉴别特征及鉴别意义 备备 注注 锆盐锆盐 枸橼酸枸橼酸 锆盐锆盐-枸橼酸枸橼酸 3-OH或或3，5 -二二OH 黄色黄色 黄

5、色不褪黄色不褪 PPC(ZrOCl2) 5-OH 黄色褪去黄色褪去 示示 氨性氯化锶氨性氯化锶(SrCl2) 邻二酚羟基邻二酚羟基 绿、棕乃至黑色绿、棕乃至黑色 三氯化铁三氯化铁(FeCl3) 酚羟基酚羟基 紫、蓝、绿紫、蓝、绿三氯化铝三氯化铝 3-OH，4-C=O 黄色黄色 （AlCl3） 5-OH，4-C=O 鲜黄色荧光鲜黄色荧光 PPCTLC 邻二酚羟基邻二酚羟基 （4或或7，4黄酮醇，天蓝色荧光）黄酮醇，天蓝色荧光）示示（三）（三） 硼酸显色反应硼酸显色反应 硼酸硼酸 5 - 羟基，羟基，4 - 羰基黄酮羰基黄酮 黄色，绿色荧光（草酸液）黄色，绿色荧光（草酸液） （H3BO3） 6-羟

6、基，羟基，4 - 羰基查耳酮羰基查耳酮 黄色，无荧光（枸橼酸）黄色，无荧光（枸橼酸） 反应类型反应类型 鉴别特征及鉴别意义鉴别特征及鉴别意义 备备 注注黄酮醇黄酮醇 黄色黄色 O 棕色棕色 稀氢氧化钠稀氢氧化钠 邻三酚羟基黄酮类邻三酚羟基黄酮类 暗绿暗绿蓝绿色纤维状蓝绿色纤维状 邻三酚羟基鉴别邻三酚羟基鉴别氨蒸气或碳酸钠溶液氨蒸气或碳酸钠溶液 颜色变化颜色变化 TLC、PPC（四）（四） 碱性试剂反应碱性试剂反应氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 黄酮黄酮 黄黄 橙色橙色 查耳酮、橙酮查耳酮、橙酮 红红 紫红紫红 二氢黄酮二氢黄酮 黄黄橙色（冷）橙色（冷） 深红深红 紫红（较长时间或加热）紫红（较长时间

7、或加热）母核类型鉴别 五氯化锑五氯化锑 (SdCl5)： 查耳酮特征性显色反应查耳酮特征性显色反应 (红或紫红色沉淀红或紫红色沉淀) 黄酮、二氢黄酮、黄酮醇类呈橙色。黄酮、二氢黄酮、黄酮醇类呈橙色。Gibbs反应：酚羟基对位活泼质子的特征（蓝反应：酚羟基对位活泼质子的特征（蓝 或蓝绿色）或蓝绿色） （五）与五氯化锑反应（五）与五氯化锑反应（六）其他显色反应（六）其他显色反应Gibbs试剂是试剂是2,6-二氯（溴）苯醌氯亚胺，二氯（溴）苯醌氯亚胺，它在弱碱性条件下可与酚羟基对位的活泼氢缩合它在弱碱性条件下可与酚羟基对位的活泼氢缩合成蓝色化合物成蓝色化合物 方法方法： 双相色谱双相色谱 第第I向向

8、 醇性展开剂醇性展开剂 第第II向向 水性展开剂水性展开剂（BAW、水饱和正丁醇）、水饱和正丁醇） （28%HAc、3%NaCl、1%HCl） 正相色谱正相色谱 反相色谱反相色谱固定相（水）极性固定相（水）极性 流动相流动相 （ *有认为是吸附原理）？有认为是吸附原理）？Rf规律：极性小的化合物规律：极性小的化合物Rf大大 极性大的化合物极性大的化合物Rf大大 苷元（苷元（0.7以上）以上） 单糖苷单糖苷 双糖苷（双糖苷（0.7以下）以下） 苷元中，平面型分子苷元中，平面型分子 非平面型分子非平面型分子 Rf规律与左边相反规律与左边相反母核相同，母核相同，2 2-OH 3 3-OH 4 4-O

9、H 5 5- OH黄酮黄酮 主要应用：苷元的分离鉴别主要应用：苷元的分离鉴别 黄酮苷及花色素类的分离鉴别黄酮苷及花色素类的分离鉴别 （二）薄层色谱（二）薄层色谱（TLC） 1硅胶薄层色谱硅胶薄层色谱 主要用于极性较小的黄酮类化主要用于极性较小的黄酮类化 合物（黄酮苷元）的分离鉴别，其色谱行为可参合物（黄酮苷元）的分离鉴别，其色谱行为可参 考硅胶柱色谱。考硅胶柱色谱。 2聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱 可用于黄酮苷及游离黄酮的分离可用于黄酮苷及游离黄酮的分离 鉴别，其色谱行为可参考聚酰胺柱色谱。鉴别，其色谱行为可参考聚酰胺柱色谱。 3纤维素薄层色谱纤维素薄层色谱分配原理，其色谱行为可参考纸色谱分配

10、原理，其色谱行为可参考纸色谱 各种色谱的检识顺序：各种色谱的检识顺序： 日光下观察日光下观察多数黄酮有黄色斑点多数黄酮有黄色斑点 紫外光下观察紫外光下观察多数黄酮呈黄绿色荧光斑点多数黄酮呈黄绿色荧光斑点 氨蒸气熏氨蒸气熏多数黄酮有颜色变化多数黄酮有颜色变化 喷显色剂（喷显色剂（2%AlCl3甲醇液）甲醇液）多数黄酮黄色变深，荧光多数黄酮黄色变深，荧光 加强加强 一提取方法一提取方法 溶剂法溶剂法 溶剂法溶剂法 关键关键 溶剂的选择溶剂的选择 选择依据选择依据 黄酮类成分的存在状态（游离、苷）及溶解性黄酮类成分的存在状态（游离、苷）及溶解性 溶剂的溶解性能溶剂的溶解性能 提取方法（煎煮法、渗漉法

11、、回流法等）的选择提取方法（煎煮法、渗漉法、回流法等）的选择 溶剂 提取原理 游离黄酮 黄酮苷 备 注 乙醇乙醇 溶解范围广溶解范围广 + + （甲醇）（甲醇） 苷、苷元均可溶苷、苷元均可溶 （9095%） ( 60%） 甲醇毒性大甲醇毒性大沸水沸水 多糖苷易于水多糖苷易于水 + 成本低、安全成本低、安全,水溶性杂质多水溶性杂质多 碱性水或碱性水或 稀氢氧化钠溶出能力强稀氢氧化钠溶出能力强 碱性乙醇碱性乙醇 酚羟基的酸性酚羟基的酸性 + + 石灰水除杂质效果好石灰水除杂质效果好二二.分离方法分离方法（一）溶剂萃取法（一）溶剂萃取法 黄酮与杂质黄酮与杂质分离依据：成分之间分离依据：成分之间 苷与

12、苷元苷与苷元 之间的极性（分配系数之间的极性（分配系数K）差异）差异 苷元与苷元苷元与苷元 分离工艺：分离工艺： 原料的提取浓缩液（水溶液）原料的提取浓缩液（水溶液） 依次以石油醚、乙醚、依次以石油醚、乙醚、 乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取 石油醚液石油醚液 乙醚液乙醚液 乙酸乙酯乙酸乙酯 水饱和正丁醇水饱和正丁醇 母液母液（脂溶性杂质）（脂溶性杂质） 回收回收 回收回收 减压回（水溶性杂质减压回（水溶性杂质) 苷元苷元 单糖苷单糖苷 多糖苷多糖苷 （二）（二）pH梯度萃取法梯度萃取法 分离依据：分离依据：游离黄酮类化合物的酸性差异（见黄酮酸性规律）游离黄酮类化合物的酸性

13、差异（见黄酮酸性规律） 分离工艺：分离工艺：总游离黄酮的乙醚液总游离黄酮的乙醚液 依次以依次以5%NaHCO3 、5%Na2CO3、0.2 % NaOH、 4% NaOH萃取萃取 5%NaHCO3液液 5%Na2CO3液液 0.2 % NaOH液液 4% NaOH液液 母液母液 酸化酸化 （脂溶性杂质）（脂溶性杂质）7，4-OH黄酮黄酮 7或或4-OH黄酮黄酮 一般一般-OH黄酮黄酮 5-OH黄酮黄酮（三）柱色谱法（三）柱色谱法 吸附原理吸附原理 异黄酮、二氢黄酮（醇）、异黄酮、二氢黄酮（醇）、 氯仿氯仿-甲醇不同比例甲醇不同比例（105，活化），活化） 高度甲基化或乙酰化黄酮（醇）高度甲基化

14、或乙酰化黄酮（醇） 混合溶剂洗脱混合溶剂洗脱 （极性小）（极性小）分配原理分配原理 多羟基黄酮醇或黄酮苷类多羟基黄酮醇或黄酮苷类 氯仿氯仿-甲醇甲醇-水水 （加水失活或不活化）（加水失活或不活化） （极性大）（极性大） （80 ：20 ：1）等比例）等比例1硅胶柱色谱硅胶柱色谱 洗脱规律洗脱规律：与吸附规律正好相反，即吸附能力越强，与吸附规律正好相反，即吸附能力越强， 越难洗脱（薄层越难洗脱（薄层Rf越小）越小） （2） “双重色谱双重色谱”原理原理主要用于解释黄酮苷与苷元聚酰胺色谱现象主要用于解释黄酮苷与苷元聚酰胺色谱现象 正相色谱正相色谱 反相色谱反相色谱聚酰胺：聚酰胺：极性固定相（极性酰

15、胺基团）极性固定相（极性酰胺基团） 非极性固定相非极性固定相（非极性脂肪链）（非极性脂肪链）洗脱剂：洗脱剂：有机溶剂（氯仿有机溶剂（氯仿-甲醇，极性小甲醇，极性小） 含水溶剂含水溶剂（甲醇（甲醇-水，极性大）水，极性大） 先洗脱：先洗脱：游离黄酮（苷元，极性小）游离黄酮（苷元，极性小） 苷苷（极性大）（柱色谱分离）（极性大）（柱色谱分离） Rf值：值： 苷元苷元 苷苷 苷元苷元 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元 1-OH 2-OH 3-OH 4- OH 5- OH黄酮黄酮常用洗脱剂常用洗脱剂：碱水（碱水（0.1mol / L NH3.H2O）；盐水）；盐水（0.5mol / L NaCl）

16、；）； 醇或醇水不同比例。醇或醇水不同比例。分离含邻二酚OH黄酮2+Pb2+Pb2H2S形成的沉淀通 脱 或用硫酸盐、磷酸盐脱 或用阳离子交换树脂脱 。具有邻二酚OH黄酮可与中性Pb(OAc) 形成沉淀 无邻二酚OH黄酮可与碱式Pb(OH)(OAc)形成沉淀2+Pb柠檬果皮2400g(相当于60个柠檬)柠檬果皮2400g(相当于60个柠檬)搅碎成匀浆, 热水浸取,过滤搅碎成匀浆, 热水浸取,过滤滤液滤液浓缩至小体积,加三倍量EtOH,静置一夜浓缩至小体积,加三倍量EtOH,静置一夜过滤, 滤液浓缩, 冷冻干燥过滤, 滤液浓缩, 冷冻干燥水提取液(183g)水提取液(183g)取179.37g取

17、179.37g用500ml水溶解,过滤用500ml水溶解,过滤滤液滤液依次用Hexane, n-BuOH提取依次用Hexane, n-BuOH提取Hexane提取液Hexane提取液n-BuOH提取液n-BuOH提取液水溶性部分水溶性部分(3.6g)(3.6g)(38.55g)(38.55g)(134.47g)(134.47g)水提取水提取有机溶剂萃取有机溶剂萃取n-BuOH提取液提取液(38.55g)溶于溶于1500ml水中水中, 加加220gPb(OH)OAc饱和水溶液饱和水溶液黄色铅盐沉淀黄色铅盐沉淀加加20g 饱和水溶液饱和水溶液,搅拌搅拌1hr 静置静置 过滤过滤滤液滤液6mol/L

18、 HCl调调pH 5.3n-BuOH提取提取(500ml5)n-BuOH提取物提取物水层水层(4.26g 粗黄酮类粗黄酮类)凝胶过滤凝胶过滤(TSK gel-HW-400Fr. A-H Fr. I-PFr. O-R(pH5的酸水洗脱部分的酸水洗脱部分) (pH7的水洗脱液的水洗脱液)(pH9的氨水洗脱部分的氨水洗脱部分)分别反复进行分别反复进行 CC(Wakogel-C-300)并用并用 (70:15:12:3)或或(60:20:15:5)洗脱洗脱或反复重复结晶或反复重复结晶化合物化合物L-1L-11铅盐沉淀法铅盐沉淀法凝胶色谱凝胶色谱硅胶色谱硅胶色谱NaHCO3CHCl3:MeOH:HOAc

19、:H2OSiO2满山红又名杜鹃花，含黄酮类、强心苷类、鞣质、树脂、油脂、挥满山红又名杜鹃花，含黄酮类、强心苷类、鞣质、树脂、油脂、挥发油等成分，性发油等成分，性“苦寒苦寒”，具镇咳、祛痰、平喘作用，临床用于治，具镇咳、祛痰、平喘作用，临床用于治疗慢性支气管炎疗慢性支气管炎 金丝桃苷：金丝桃苷： 槲皮素槲皮素-3-O-D-galapyranoside异金丝桃苷：槲皮素异金丝桃苷：槲皮素-3-O- -D-galafuranoside主要成分：主要成分：杨梅素杨梅素槲皮素槲皮素山柰酚山柰酚: R1=R2=H: R1=OH R2=H: R1=R2=OHOHOOHOOHOHR1R2满山红叶满山红叶EtO

20、H提取提取EtOH提取液提取液浓缩至浸膏浓缩至浸膏, 用沸水提用沸水提水提液水提液聚酰胺色谱聚酰胺色谱1) 水洗水洗2) 乙醇洗乙醇洗水洗液水洗液乙醇液乙醇液(无机盐无机盐) 回收乙醇回收乙醇总黄酮总黄酮乙醚回流乙醚回流乙醚液乙醚液不溶物不溶物放置放置,析晶析晶混合物混合物溶于乙酸乙酯中溶于乙酸乙酯中,用饱和硼酸水溶用饱和硼酸水溶液振摇液振摇硼酸水层硼酸水层HCl沉淀沉淀聚酰胺色谱聚酰胺色谱槲皮素槲皮素杨梅素杨梅素乙酸乙酯提取乙酸乙酯提取提取液提取液加入氯仿加入氯仿沉淀沉淀(混合苷混合苷)15%EtOH 2030% EtOH金丝桃苷金丝桃苷异金丝桃苷异金丝桃苷乙酸乙酯液乙酸乙酯液山柰酚山柰酚聚

21、酰胺色谱聚酰胺色谱OOROOROOR+黄酮类化合物在甲醇中紫外光谱特征黄酮类化合物在甲醇中紫外光谱特征 苯甲酰系统苯甲酰系统 桂皮酰系统桂皮酰系统（带（带II 220280nm） （带（带1 300400nm） 黄酮类化合物结构中的交叉共轭体系黄酮类化合物结构中的交叉共轭体系 黄酮（醇）： 带 II、带I均强母核光谱特征 二氢黄酮类、异黄酮类：带 II强、 带I弱 母核的推断母核的推断 （甲醇） 查耳酮、橙酮：带 II弱、带I强 取代基：OH等，为助色团 依红移规律推断取代基团依红移规律推断取代基团 带带 I I ( 2 4 0 -285nm)（苯甲（苯甲酰系统）酰系统） 带带I(300-40

22、0nm) 桂皮酰系统桂皮酰系统 类类 型型 说说 明明 250-285 304-350 黄酮类黄酮类 -OH越多，越多，带带I带带II越红越红移移 , 、皆皆强强 B环环3,4有有-OH，带，带II为为双 峰 （ 主 峰双 峰 （ 主 峰伴肩峰）伴肩峰） 328-357 黄酮醇类黄酮醇类 (3-OR) 352-385 黄酮醇类黄酮醇类(3-OH) 245-270 270-295 300-400 （肩峰）（肩峰）异黄酮类异黄酮类 二 氢 黄 酮二 氢 黄 酮（醇）（醇） 弱弱强强B环上环上有有-OH, OCH3对对带带I影响不大影响不大 220-270 340-390 查耳酮类查耳酮类 查耳酮查

23、耳酮2-OH使带使带I向红移向红移影响大影响大 370-430(3-4个小峰个小峰) 橙酮类橙酮类 NoImageNoImageNoImage加入试剂加入试剂 带带II 带带I 说明说明 样品样品+MeOH 2 5 0 -285 304-385 两峰强度基本相同，具体位置与两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基母核上电负性取代基(-OH, -OCH3)有关，有关，-OH, -OCH3越多，越多，越长移越长移 +NaOMe 或或+NaOH A 环 有环 有 -OH，红，红移小，无移小，无意义意义 40-60nm（ 不变或增强）不变或增强） 50-60nm（ 下降）下降） 有有4-OH，无，无3-OH 有有3-OH，无，无4- OH 有有3,4-OH或或3,3,4-OH（衰减更快）（衰减更快） 7-OH 带带I，II随加随加NaOMe时间延长，逐渐衰减时间延长，逐渐衰减 320-330nm有小峰有小峰 +NaOAc (未熔融未熔融) 5-20 有有3-OH,4OH也也发生红移，发生红移，但意义不大但意义不大 7-OH 加入试剂加入试剂 带带II 带带I 说明说明 +NaOAc/