乙型肝炎病毒核酸免提取荧光定量PCR方法应用研究

1、    乙型肝炎病毒核酸免提取荧光定量pcr方法应用研究    高洁严 敏付婷 邵中军【摘要】目的：应用免提取荧光定量pcr方法检测乙型肝炎病毒核酸的含量，以研究分析荧光定量pcr方法在乙型肝炎疾病中的防治、确诊、治疗康复及分析病况等的医疗价值。方法：随机将研究数据分成a、b、c 3个小组，采用酶联免疫一吸附剂测定（elisa法）与聚合酶链式反应（pcr法）对乙型肝炎病毒核酸的含量水平进行测定。第1组记为a组：hbsag（阳性）、hbeag（阳性）、hbcab（阳性）的患者。第2组记为b组：hbsag（阳性）、hbeab（阳性）、hbcab（阳性）的患者

2、，第3组记为c组：hbsag（阳性）、hbcab（阳性）的患者，组间进行乙型肝炎病毒核酸的阳性率及乙型肝炎病毒核酸含量的t检验。结果：a组患者乙型肝炎病毒核酸的阳性率为100%，明显高于b组和c组的乙型肝炎病毒核酸的阳性率，组间差异具有统计学意义（p0.05）。c组患者的乙型肝炎病毒核酸的阳性率为51. 83%，与a组的乙型肝炎病毒核酸的阳性率比较差异有统计学意义（p0.0 5），患者的hbv-dna含量为7.7×l07copy/ml，与第a、b组的乙型肝炎病毒核酸的阳性率比较差异无统计学意义（p>0.0 5）。结论：免提取荧光定量聚合酶链式反应（pcr法）所测的乙型肝炎病毒核

3、酸的阳性率比酶联免疫吸附剂测定（elisa法）结果效果更好，在临床中灵敏度高，具有一定的特异性，能够精准的反映出乙型肝炎患者体内核酸的复制状况，在临床上对于研制抵抗病毒的药物以及对于高效的选出最佳的抗病毒药物，并且在患者的康复以及预后都具有良好的临床应用价值。【关键词】乙型肝炎病毒；核酸；免提取荧光定量pcr检测法；elisa法乙型肝炎病毒（hbv）简称乙肝病毒，是一种dna病毒，是乙型肝炎的病原体，对人和猩猩具有极强易感性，且增长率逐年增加，hbv是目前己知的感染人的最小的dna病毒之一，也是最难治愈的病毒之一，它长期潜伏在细胞核中，具有很强的隐蔽性，即使抗病毒治疗也很难完整清除，一旦患者长

4、期使用免疫抑制剂或化疗、放疗将导致机体免疫力低下。hbv感染人体是一个连续、动态的过程，常用的酶联免疫一吸附剂测定（elisa法）检测免疫标志物可以显示病毒的复制状态，但其局限性也非常明显，而免提取荧光定量聚合酶链式反应（pcr法）对于乙型肝炎病毒核酸含量水平的检测过程可将hbv复制过程直接体现出来，该方法在敏感性和特异性方面表现突出。本文通过对乙肝患者血清中的病毒核酸进行研究以期找到其与免疫标志物的相关性进而为hbv-dna检测在乙型肝炎早期诊断、传染性识别、病毒复制及临床治疗效果中提供以参考。1 材料与方法1.1 一般资料样本来源：从2015年乙肝防治示范区的乙型肝炎患者中选取255例，以

5、上255名患者对本次样本实验知情并自愿参加。1.2 试剂与方法（1）以免提取荧光定量聚合酶链式反应（pcr法）对乙型肝炎病毒核酸进行检测，试剂盒从苏州科铭生物技术有限公司采购，扩增仪型号为proflex，检测方法以试剂盒说明书为准并严格执行操作，按照常规方法提取患者血清hbv_dna3。（2）乙型肝炎免疫标志物采用采用酶联免疫一吸附剂测定（elisa法）法进行检测，试剂盒从北京万泰生物药业有限公司采购，酶标仪型号为hbs1096b，检测方法以试剂盒说明书为准并严格执行操作。1.3 统计学分析对所有数据用spss 19.o进行统计和分析。计量资料以（x±s）进行描述，以t检验为检验水准

6、；计数资料记为（%），组间比较以x2检验。差异有统计学意义（p<0.05）。2 结果hbv-dna的检测情况（见表1）。3 讨论乙型病毒性肝炎（ viral hepatitis type b）是由乙型肝炎病毒引起的以肝脏病变为主的一种传染疾病，临床上常出现食欲减退、恶心、呕吐、上腹部不适、肝区疼痛、乏力等主要表现，部分患者还伴有黄疸发热、肝功能损伤等，有些患者甚至会发展成肝硬化、肝癌等危及生命。临床医务工作者为了能够减少乙型病毒性肝炎的发病率同时也为了能够提高疾病的治疗效果，他们以此为研究目的，通过对乙型肝炎病毒核酸阳性率的测定以及平均含量的测量来提高臨床工作效率。本次研究中发现a组患者

7、血清中检测出乙型肝炎病毒核酸的平均含量为7.5xl08copy/ml（阳性率为100%），同时也反映了乙型肝炎病的核酸免提取荧光定量聚合酶链式反应pcr定量检测结果有着相对较高的阳性率，可将hbv的复制过程更为直观的体现出来。而对b组128例患者的血清中对hbv-dna检测结果显示其平均含量为9.5×l07copy/ml（阳性率为52.4%），可明显看出b组较a组阳性率显著减低，同时乙型肝炎病毒核酸的平均含量与a组差异度也较明显（p<0.05），这表明与elisa模式相比，hbv-dna所具有的特异性和敏感性均较高，c组32例患者中对hbv-dna检测结果显示其平均含量为7.7xl07copy/ml（阳性率为51.8%），说明不能仅以elisa法的结果（阴性）就判定体内乙型病毒性肝炎不发生复制，而pcr对于hbv-dna的含量的检测能够对hbv复制状况更精准的判断进而提供给临床更好的服务。另外，在实际诊断中不能片面的将乙型病毒性肝炎的传染性及病情严重程度用hbv-dna的含量去描述（二者不呈正相关），它也不是对治疗效果进行判断的“金指标”，临床医务工作者也应该清醒地认识到这一点。而以pcr法对hbv-dna的定量检测增添了对体内hbv变化的了解的一类新方法，其可将乙型肝炎免疫标志物（两对半）检测的不足有效弥补。综上