蜡样芽孢的检测

1、（第一次课）（第一次课）蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌概述概述 一一 形态与染色形态与染色本菌是革兰氏阳性杆菌，本菌是革兰氏阳性杆菌，1.01.2m35m,菌菌体两端钝圆，有鞭毛，体两端钝圆，有鞭毛，无荚膜，多成短链状排无荚膜，多成短链状排列。列。本菌生长本菌生长6小时以后可以小时以后可以既可以形成芽孢，形成既可以形成芽孢，形成的芽孢小于菌体横径，的芽孢小于菌体横径，位于中心或位于中心或稍偏于一端。稍偏于一端。营养要求不高，在普通营养要求不高，在普通培养基上可生长良好，培养基上可生长良好，最适宜温度为最适宜温度为2835。菌落较大，不透明，表菌落较大，不透明，表面粗糙似毛玻璃状或蜡面粗糙似毛玻璃状或

2、蜡状，边缘常成扩展状。状，边缘常成扩展状。在普通肉汤上培养基呈在普通肉汤上培养基呈浑浊生长，常形成菌膜浑浊生长，常形成菌膜或壁环，震摇易乳化。或壁环，震摇易乳化。 二二 培养特性培养特性 三三 流行病学流行病学蜡样芽胞杆菌病原菌条件致病菌肠毒素肠毒素耐耐热热不耐热不耐热食物中毒食物中毒人或动物人或动物非肠道传染病非肠道传染病eg:结膜炎 呕吐型呕吐型污染食品：污染食品：米饭米饭我国多见我国多见腹泻型腹泻型污染食品：蛋白污染食品：蛋白型食品及果汁型食品及果汁 欧美等国多见欧美等国多见污染途径污染途径：泥土和灰尘昆虫不洁用具不卫生的食品从业人员实验目的实验目的1、掌握蜡样芽孢杆菌检验的主要步骤与方

3、法。掌握蜡样芽孢杆菌检验的主要步骤与方法。2、了解蜡样芽孢杆菌菌落特点和掌握生化反了解蜡样芽孢杆菌菌落特点和掌握生化反应结果的判断方法。应结果的判断方法。u不发酵甘露醇不发酵甘露醇：在甘露醇：在甘露醇-卵黄卵黄-多粘菌素多粘菌素（myp）琼脂平板上生成微粉红色菌落。）琼脂平板上生成微粉红色菌落。u产生卵磷脂酶产生卵磷脂酶：分解：分解myp琼脂中的卵磷脂，琼脂中的卵磷脂，在菌落周围产生粉红色混浊环（沉淀环）。在菌落周围产生粉红色混浊环（沉淀环）。u产生酪蛋白酶产生酪蛋白酶：分解培养基中的酪蛋白，生：分解培养基中的酪蛋白，生成成l-酪氨酸在菌落周围形成透明圈。酪氨酸在菌落周围形成透明圈。实验原理实

4、验原理：蜡样芽胞杆菌具有以下生化特性：蜡样芽胞杆菌具有以下生化特性： u产生溶血素产生溶血素：使胰酪胨大豆羊血琼脂（：使胰酪胨大豆羊血琼脂（tssb）中的血细胞发生中的血细胞发生溶血。溶血。u产生明胶酶产生明胶酶：将明胶水解为多肽再水解为氨：将明胶水解为多肽再水解为氨 基酸而使其由半固体转化为液态状。基酸而使其由半固体转化为液态状。u触酶实验触酶实验: 产生过氧化氢酶分解过氧化氢生产生过氧化氢酶分解过氧化氢生成水和氧气。成水和氧气。u动力和硝酸盐试验动力和硝酸盐试验: 蜡样芽胞杆菌运动活泼蜡样芽胞杆菌运动活泼,能还原硝酸盐为亚硝酸盐。能还原硝酸盐为亚硝酸盐。实验材料实验材料甘露醇甘露醇-卵黄卵

5、黄-多粘菌素（多粘菌素（myp）琼脂平板）琼脂平板营养琼脂培养基营养琼脂培养基l- -酪氨酸营养琼脂培养基酪氨酸营养琼脂培养基胰酪胨大豆羊血琼脂胰酪胨大豆羊血琼脂(tssb)动力动力-硝酸盐生化鉴定管硝酸盐生化鉴定管木糖木糖-明胶生化鉴定管明胶生化鉴定管硝酸盐试剂硝酸盐试剂(1%对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液, 0.2% -萘胺溶萘胺溶 液液) 3%的双氧水的双氧水革兰染液革兰染液 检样检样50g(ml)50g(ml)+450ml+450ml无菌磷酸盐缓冲稀释液无菌磷酸盐缓冲稀释液10-110-6稀释液稀释液30c , 24h形态观察形态观察 菌数测定菌数测定选择性培养基选择性培养基 myp

6、 营养琼脂营养琼脂30c , 24h证实试验证实试验革兰染色革兰染色生长及菌落观察生长及菌落观察鉴别试验鉴别试验生化反应生化反应肠毒素测定肠毒素测定报告报告检验程序检验程序实实验步骤验步骤 1 1 样品的保存和送检样品的保存和送检 待检样品应保持在待检样品应保持在66以下运送并尽可能不使其冷冻。以下运送并尽可能不使其冷冻。对可疑是该菌引起的食物中毒的病人，应取可疑食对可疑是该菌引起的食物中毒的病人，应取可疑食物或病患者的呕吐物、粪便，且立刻在物或病患者的呕吐物、粪便，且立刻在3小时内送检。小时内送检。送达实验室后，应保存于送达实验室后，应保存于4并尽快检验。并尽快检验。实实验步骤验步骤2：样品

7、稀释及计数样品稀释及计数：1ml1ml1ml1ml1ml9ml9ml9ml9ml9ml各稀释度各稀释度0.1ml0.1ml，l l型玻棒均匀涂布型玻棒均匀涂布myp 琼脂平板琼脂平板 计菌落数计菌落数1 每每个稀释度混匀吹打完毕个稀释度混匀吹打完毕 后换用另一只灭菌吸管。后换用另一只灭菌吸管。2 每稀释度接种两个平皿。每稀释度接种两个平皿。 30 ，24h10-110-63 分离培养分离培养 计数后，从每个平板选取5个已计数的菌落分别接种于营养琼脂斜面做纯培养，30培养24h，进行形态观察和证实试验。第二次课第二次课 分类 需氧芽孢杆菌根据芽孢囊膨大与否及芽孢的形状，可将其分为3个群。第一群的

8、芽孢不突出菌体，形成的芽孢为椭圆形或圆柱形；第二类的芽孢囊突出菌体，形成的芽孢为椭圆形；第三群的芽孢囊突出菌体形成的芽孢为球形。 蜡样芽胞杆菌属于第一群。该群内细菌，根据营养型细胞的宽度可以又分为两类，其中宽度0.9m者称大细胞群，该群有蜡样芽胞杆菌、蕈状芽孢杆菌、紫云金芽孢杆菌、炭疽芽胞杆菌、巨大芽孢杆菌。这几种与蜡样芽胞杆菌形态上相似的4个菌种必须用微生物学和生化学试验进行鉴别。4 证实试验证实试验l-酪氨酸琼脂培养基酪氨酸琼脂培养基预预实实验验营营养养琼琼脂脂培培养养基基菌落形态观察菌落形态观察镜检观察菌体镜检观察菌体生生化化实实验验卵磷脂酶实验卵磷脂酶实验l-酪氨酸分解实验酪氨酸分解实

9、验动力与硝酸盐还原实验动力与硝酸盐还原实验革兰染色革兰染色myp琼脂平琼脂平板板溶血实验溶血实验胰酪胨大豆羊血琼脂平板胰酪胨大豆羊血琼脂平板触酶实验触酶实验双氧水双氧水动力动力-硝酸盐生化鉴定管硝酸盐生化鉴定管鉴鉴别别试试验验1 形态观察 本菌革兰染色阳性，呈短链或长链，芽孢位于菌体中央或偏端，不是菌体胀大。1 mypmyp平板上：平板上：粉红色粉红色菌落，菌落周围产生菌落，菌落周围产生粉红色浑浊粉红色浑浊圈。圈。2 l- l-酪蛋白琼脂培养基：菌落周围形成酪蛋白琼脂培养基：菌落周围形成透明圈。透明圈。3 触酶试验：加入过氧化氢后触酶试验：加入过氧化氢后3030秒产生秒产生气泡。气泡。4 ts

10、sb tssb平板上：菌落周围产生的平板上：菌落周围产生的溶血圈。溶血圈。（在菌落（在菌落周围出现一个大小不一的完全透明清楚的宽带）。周围出现一个大小不一的完全透明清楚的宽带）。 紫云金芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌呈现弱得溶血现象，紫云金芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌呈现弱得溶血现象，而炭疽芽胞杆菌通常不溶血。而炭疽芽胞杆菌通常不溶血。5 动力动力- -硝酸盐生化鉴定管：细菌沿穿刺线硝酸盐生化鉴定管：细菌沿穿刺线扩散生长扩散生长，加硝酸盐试剂后培养基变加硝酸盐试剂后培养基变红红。 蕈状芽孢杆菌常常呈绒毛状生长，蜡样和紫云金芽蕈状芽孢杆菌常常呈绒毛状生长，蜡样和紫云金芽孢杆菌通常运动极为活泼，而炭疽芽胞杆菌则不运动。孢杆菌通常运动极为活泼，而炭疽芽胞杆菌则不运动。2 2 实验结果实验结果 实验结果3 计数（表面涂布法）1克样品中含的蜡样芽孢杆菌数：克样品中含的蜡样芽孢杆菌数：myp平板上的菌落数平板上的菌落数证实阳性菌落数证实阳性菌落数挑取的菌落数挑取的菌落数 稀释倍数稀释倍数10举例：将检样举例：将检样1010-4-4稀释液稀释液0