阿昔洛韦棕榈酸酯脂质体凝胶剂的局部透皮试验

1、阿昔洛韦棕榈酸酯脂质体凝胶剂的局部透皮试验摘要目的:对阿昔洛韦前体药物即阿昔洛韦棕榈酸酯所制得的脂质体凝胶剂的透皮效果进行初步研究。方法:采用离体鼠皮的透皮实验方法，并以阿昔洛韦脂质体凝胶、阿昔洛韦凝胶、阿昔洛韦水溶液、阿昔洛韦软膏剂作比较。结果:阿昔洛韦前药脂质体凝胶在皮肤内的滞留多(74.82%)，透皮率小(15.62%)。结论:阿昔洛韦棕榈酸酯脂质体凝胶有望成为高效、安全的新制剂。关键词阿昔洛韦棕榈酸酯；脂质体凝胶；透皮试验中图分类号：R969文献标识码：A文章编号：1001-5213(2000)06-0324-04Topical penetration test of acyclovi

2、r palmitate in vitro from liposomal gelCheng Ying,Tang Ren,Liu Hui, et al(Department of pharmacy,Wuhan General Hospital,Hubei Wuhan 430070)ABSTRACTOBJECTIVE：To study the penetrating absorption of acyclovir palmitate liposomal gels.METHODS：The transdermal penetration with excised mice skin of acyclov

3、ir ointment were compared.RESULTS：The amount of acyclovir palmitate liposomal gel was much higher in the skin, the penetrating absorption amount and the left were lower than the other preparations.CONCLUSIONS：Acyclovir palmitate liposomal gel will be an effective and low toxical drug for virus derma

4、topathy.KEY WORDSacyclovir palmitate;liposomal gels; penetrating absorption脂质体作为新型的皮肤给药载体系统，正日益受到国内外的重视1.2。脂质体在局部应用中能较好地包裹亲水或亲脂性药物；与皮肤角质有高度的相似性，增加药物在皮肤局部的积累，起到缓释作用；有限速膜屏障作用，减少药物的全身吸收，从而减少药物的不良反应。阿昔洛韦(acyclovir,ACV)，临床上常用于水痘、带状疱疹病毒和单纯疱疹病毒引起的皮肤和粘膜感染的治疗3。将阿昔洛韦制成口服脂质体制剂已有报道4。鉴于阿昔洛韦的水溶性、脂溶性均差，为了提高包封率，本文提

5、出先将阿昔洛韦制成亲脂性的前药即阿昔洛韦棕榈酸酯(ACV-C16)，然后将该前药制成皮肤用脂质体凝胶制剂，并采用离体鼠皮透皮实验方法，以阿昔洛韦脂质体凝胶、阿昔洛韦凝胶、阿昔洛韦水溶液、阿昔洛韦软膏剂作比较，对其透皮效果进行了初步研究和评价。1材料仪器1.1材料阿昔洛韦(注射用，湖北科益制药厂，批号：980707)；阿昔洛韦棕榈酸酯(自制，批号：990416)；阿昔洛韦软膏(湖北科益药业有限公司，批号：99010801)；卡波姆-940(上海人民制药厂)；卵磷脂(注射用，上海油脂一厂)；胆固醇(北京海淀区微生物培养基制品厂)；聚乙烯吡咯烷酮(PVP，上海化学试剂采购供应站)；药用甘油(上海制皂

6、厂)；异丙醇(分纯析)；磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.2)；1820 g昆明种雄性小鼠(湖北医科大学提供)。1.2仪器DF-101B型集热式恒温磁力搅拌器(浙江乐清市乐成电器厂)；RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；SHZ-D型循环水式真空泵(河南巩义市英峪仪器厂)；UV-260型紫外分光光度计(日本岛津)；KT-300Y型超声波药品处理机(济宁中冠超声波有限责任公司)；离体鼠皮透皮实验装置(自制)。2方法2.1制备2.1.1阿昔洛韦棕榈酸酯质体凝胶(ACV-C16-Lip)的制备(1) 处方： ACV-C16 190 mg，卵磷脂 500 mg，胆固醇 200 mg，维

7、生素E 10 mg，维生素C 3 mg，卡波姆-940 250 mg，PVP适量，聚三梨酯-80 0.4 ml。(2) 制备： 取ACV-C16 190 mg，卵磷脂500 mg，胆固醇 200 mg，维生素E10 mg共溶于35 ml三氯甲烷中，旋转减压蒸发(45 )挥去三氯甲烷制成干膜。另将维生素C、PVP、聚三梨酯-80溶于36 ml PBS中(pH7.2)，加入上述有干膜的梨形瓶中，旋转蒸发5 min，短时超声振荡3 min，即得ACV-C16脂质体混悬液。称取卡波姆-940 250 mg，加4 ml甘油润湿研匀，并加入到上述脂质体中，加入适量PBS(约7 ml)，搅拌、溶胀

8、2 h后，滴加三乙醇胺适量，调节pH67，最后补足PBS量至50 g，搅匀，即得。2.1.2阿昔洛韦脂质体凝胶(ACV-lip)的制备阿昔洛韦92 mg，其余组分同2.1.1中组分，同上法制得。2.1.3阿昔洛韦凝胶(ACV-gel)的制备称取卡波姆-940 250 mg、甘油4 ml润湿研匀后，倒入40 ml含92 mg ACV和适量PVP的水溶液中，溶胀2 h后，滴加三乙醇胺适量，调节pH67，最后补足PBS量至50 g，搅匀，即得。2.1.4阿昔洛韦溶液剂(ACV-sol)的制备取阿昔洛韦92 mg溶于50 ml蒸馏水中，短时超声使其溶解，即得。2.1.5阿昔洛韦软膏(ACV-oin)市

9、售品，300 mg.（10 g）-1。2.2标准曲线的制备2.2.1ACV的标准曲线的制备精密称取阿昔洛韦对照品100 mg，置于250 ml量瓶中，用异丙醇-水(11)溶解并稀释至刻度。精密量取上述溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3 ml，置100 ml量瓶中，加异丙醇-水稀释至刻度，在(251±1)nm波长处测定吸收度。阿昔洛韦在2.012 g.ml-1范围内线性关系良好。C=0.09498+16.9626A，r=0.999 32.2.2ACV-C16标准曲线的制备精密称取ACV-C16300 mg，置于100 ml量瓶中，用异丙醇-水(11)溶解并稀释至刻度。精密吸取上述溶

10、液0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8，2.0 ml于50 ml量瓶中，加异丙醇-水(11)稀释至刻度，在(257±1)nm处测定吸收度值。ACV-C16在312 g.ml-1范围内线性良好。C=-0.0682+16.2650A，r=0.9995实验表明，ACV在(251±1)nm处有最大吸收5，ACV-C16在(257±1)nm处有最大吸收，空白脂质体和凝胶基质在此两波长处对测定均无干扰。2.3回收率和精密度试验2.3.1ACV的回收率与精密度分别精密称取ACV12.6，34.5，57.3 mg(n=5)按“2.1.2项下”处方组成加入其余成分

11、，用异丙醇-水(11)定容于100 ml量瓶中，短时超声使其溶解充分，过滤。精密量取续滤液2 ml，置100 ml量瓶中，用异丙醇-水(11)稀释至刻度，在(251±1)nm处测其吸收度，并将吸收度值代入“2.2.1项下”的标准曲线中，得ACV的回收率分别为100.42%，100.68%，100.27%，RSD分别为1.73%，0.81%，1.18%。2.3.2ACV-C16的回收率与精密度分别精密称取ACV-C169.5，16.3，27.8 mg(n=5)，按“2.1.1项下”处方组成加入其余成分，用异丙醇-水(11)定容于25 ml量瓶中，短时超声使其溶解充分，过滤。精密量取续滤

12、液1 ml，置100 ml量瓶中，用异丙醇-水(11)稀释至刻度，在(257±1)nm处测其吸收度，并将吸收度值代入“2.2.2项下”的标准曲线中，得ACV-C16的回收率分别为101.02%，101.00%，100.76%，RSD分别为0.42%，0.99%，0.91%。2.4局部透皮试验2.4.1鼠皮制备取体重为1820 g的雄性小鼠，用8%硫化钠溶液脱去背部毛，用生理盐水洗净皮肤，自然饲养1 d，于次日实验前断颈处死，立即剥离背部皮肤，分离皮下组织及脂肪。选用无破损者浸泡于生理盐水中，置冰箱中保存备用。2.4.2样品测定将小鼠皮肤固定在扩散池的一端(扩散池管口 半径D=1.80

13、 cm，横截面积S=10.57 cm2)，使皮肤表层面向给药室。精密称取药品(a.ACV-C16-lip2.0 g，b. ACV-lip2.0 g，c. ACV-gel2.0 g，d. ACV-sol2.0 g，e. ACV-oin0.5 g)分别均匀涂布于鼠皮皮肤表面，装好装置，使皮肤与接收液接触。由于脂质体在生理盐水中不能被破坏，加入异丙醇后，可破坏脂质体结构使药物便于直接进行紫外测定，故接收液采用生理盐水-异丙醇(11)溶液60 ml。然后，将该装置置于恒温磁力搅拌器内，使温度控制在(37±1) ，转速为30 r.min-1，分别在0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0

14、，6.0，8.0 h间隔取样4 ml，同时补充等体积接收液。对不同时间点所取的样品进行紫外检测。2.4.3空白对照实验将固定好的空白鼠皮浸于接收液面下，同“2.4.2项下”方法操作取样，将吸收度值A空白251 nm和A空白257 nm作为对照，以减小鼠皮本身生理性物质所造成的影响。2.4.4药物吸收度值的测定阿昔洛韦棕榈酸酯A=A测257 nm-A空白257 nm，阿昔洛韦A=A测251 nm-A空白251 nm2.4.5残余药量的测定将鼠皮上残余的药物用接收液异丙醇-水(11)洗下，过滤后，取续滤液测定A残值。2.4.6药量的计算累积透皮率修正后浓度 ，皮内滞留率Q滞%=1-Q透%

15、-Q残%其中，Q透%为累积透皮率；C，n为第n次取样药物浓度修正值；V为接收液的体积(60 ml)；Q0为投药量；Cn第n次取样药物实测浓度；Vi为第i次取样体积(4 ml)；Ci为第i次取样实测浓度。3结果与讨论累积透皮率Q透%对时间t的曲线图见图1，表明在1.5 h前ACV-C16-lip的Q透%为零，ACV-lip的Q透%为次，ACV-gel和ACV-0in的Q透%几乎重合，并稍高于ACV-lip，ACV-sol的Q透%最高。但随着时间(t)的增加，ACV-lip的透皮速度明显加快，并大于ACV-gel和ACV-Oin。到达8 h时，Q透%大小依次为ACV的溶液剂脂质体凝胶剂凝胶剂软膏剂

16、前药脂质体凝胶剂。若将不同制剂的Q%对T回归，得回归方程依次为：图1累积透皮率(Q透%)对时间(t)的曲线图 ACV-gel ACV-lip× ACV-C16-lip ACV-oin. ACV-solACV-sol： Q透%=0.000 46+0.044 54t r=0.998 9；ACV-gel： Q透%=-0.012 04+0.042 62t r=0.988 4ACV-lip： Q透%=-0.026 60+0.058 10t r=0.985 8；ACV-oin： Q透%=0.007 99+0.023 04t r=0.997 0ACV-C16-lip Q透%=-0.019 89+0

17、.023 24t r=0.987 6由相关系数可见，r值大小依次为溶液剂软膏剂凝胶剂前药脂质体凝胶剂脂质体凝胶剂。溶液剂与软膏剂线性关系良好，表明ACV从制剂中以零级速率透过皮肤，斜率即为透皮速率。不同时间点测得的药物累积透皮率及相互比较结果见表1和表2。由表2可知，药物在t=8 h时，Q滞%大小依次为：前药脂质体凝胶剂脂质体凝胶剂凝胶剂软膏剂水剂。表明以脂质体作为皮肤给药的载体，可以增加药物在皮内的滞留量，ACV-lip的Q滞%为ACV-gel的2倍，ACV-C16-Lip是ACV-lip的约2倍，是ACV-oin的约6倍，是ACV-sol的约12倍。表1各制剂不同时间点取样所测定的累积透皮

18、量制剂Q透%0.5 h1 h1.5 h2 h3 h4 h6 h8 hACV-gel1.573.054.845.4810.0118.3326.4630.96ACV-lip1.152.083.898.2813.9824.6835.4040.32ACV-C16-lip0003.094.508.1113.1815.62ACV-oin1.942.914.375.747.6110.5615.0218.88ACV-sol3.147.6611.5415.4624.0730.8543.9461.91表2给药8 h后不同制剂Q%值的比较制剂ACV-sol%ACV-lip%ACV-gel%ACV-oin%ACV-C16-lip%Q透61.9140.3230.9618.8815.62Q残31.6420.0