润肺散结胶囊的质量标准研究

1、润肺散结胶囊的质量标准研究梁学政 唐勇琛 吕建伟 陈惠红 王三虎（柳州市中医院545001）【摘要】目的 建立润肺散结胶囊的质量标准。方法 釆用薄层色谱（tlc）法 对方中红参、炮山甲、玄参、灵芝进行定性鉴别；采用高效液相色谱（hplc）法 测定人参皂昔rbl的含量。结果tlc斑点清晰，阴性对照无干扰；人参皂昔rbl 的进样量在2.55020.400μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性（r二0.9995）,平均回收率100.10%, rsd为1.63% （n=6）o结论 鉴别方法专属 性强，定量方法准确可靠，所建标准可用于润肺散结胶囊的质量控制。【关键词】润肺散结胶囊人参皂昔rb

2、l高效液相色谱薄层色谱质量标准 【中图分类号】r927【文献标识码】a【文章编号】2095-1752 （2013） 17-0076-02木文采用薄层色谱（tlc）法对方中红参、炮山甲、玄参、灵芝进行定 性鉴别；采用高效液相色谱（hplc）法测定人参皂昔rbl的含量，为确定该制剂 的质量标准提供理论依据。1仪器与试药lc-20a型hplc色谱仪，包括spd-20a紫外检测器、lc-solution色谱工 作站（日木岛津公司）；电子分析天平（瑞士梅特勒托利多公司）；2fi型三用 紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；kq-200vde型双频数控超声波清洗器（昆 山市超声仪器有限公司）；t200型电子天

3、平（常熟市双杰测试仪器厂）；yoko-pn 型电动喷雾器（武汉药科新技术开发有限公司）；dh64型电热恒温干燥箱（上海 市跃进医疗器械一厂）；hh4数显恒温水浴锅（国华电辭有限公司）。红参对照药材、穿山甲对照药材、玄参对照药材、灵芝对照药材、人参 皂昔rbl对照品；润肺散结胶囊；缺红参、缺炮山甲、缺玄参、缺灵芝的阴性样 品；硅胶g；乙睛、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯净水。2方法与结果2.1定性鉴别：红参的tlc鉴别1>2取胶囊内容物20g,加氯仿100ml,冋流提取lh,弃去氯仿液，药渣挥干溶剂，加水2ml搅拌湿润，加水饱和正丁 醇30ml,超声处理30min,吸取上清液，加

4、3倍氨试液，摇匀，放置分层，取 上层溶液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取红参对照药材 lg,加氯仿40ml,冋流提取lh,弃去氯仿液，药渣挥干溶剂，加水0.5ml搅拌 湿润，加水饱和正丁醇10ml,超声处理30min,吸取上清液，加3倍量氨试液， 摇匀，放置分层，取上层蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照药材溶液。另 取缺红参的阴性样品20g,同法制成阴性对照液。照tlc法试验，吸取上述三种 溶液各5μl,分别点于同一含竣甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶g薄层板上， 以氯仿甲醇水(65:35:10) 10°c以下放置的下层液为展开剂，展开，取出，晾 干，喷

5、以10%硫酸乙醇溶液，在105°c加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供 试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，阴性对照 无干扰。炮山甲、玄参、灵芝的tlc鉴别同上1、3、4。2.2人参皂昔rbl的含量测定2.2.1 色谱条件 色谱柱：diamonsil c18 (250mm×4.6mm,5&流动相a： 0.05%磷酸溶液，流动相b：乙腊，按表1进行梯度洗脫； 流速：0.8 ml.mirvl；检测波长：203nm；柱温：30°c；进样量：20ul；理论塔板 数按人参皂昔rbl色谱峰计算不低于5000,与相邻色谱峰的分离度大于

6、1.5o表1流动相梯度洗脱程序2.2.2对照品溶液的制备精密称取人参皂昔rbl对照品适量，置于 10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为1.020 mg. ml-1的 人参皂昔rbl对照品溶液，备用。2.2.3供试品溶液的制备 取润肺散结胶囊样品内容物约10g,精密 称定，置索氏提取器中，加石油醴(3060°c) 100ml,加热回流2h,弃去石油 k,挥干药渣溶剂，加甲醇提取至无色，合并提取液，水浴蒸干，残渣加水60ml 使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次40ml,合并正丁醇液，蒸干， 残渣加甲醇溶解并定量转移至10ml量瓶中，加甲醇到刻度，摇匀，用0.45

7、um 微孔滤膜滤过，即得。2.2.4阴性样品溶液的制备 取缺红参的样品，按照“2.2.3”项下方法 制备阴性样品溶液。2.2.5阴性干扰实验分别精密吸取人参皂昔rbl对照品溶液、供试品 溶液、阴性样品溶液各20μl,按上述色谱条件进行测定。结果，供试品溶液 在与对照品溶液相同位置上具有同一保留时间的色谱峰，而阴性对照无干扰。色 谱见图lo图1高效液相色谱图a:人参皂昔rbl对照品b:供试品c:阴性对照2.2.6线性关系考察 分别精密吸取人参皂昔rbl对照品溶液2.5、5、10、15、20ul注入液相色谱仪中，测定，以人参皂昔rbl进样量(x, μg)为 横坐标，相应

8、峰面积积分值(y,rrw)为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性冋归, 得线性冋归方程y=268360x+97247, r=0.9995 (n=5),结果表明人参皂昔rbl在 2.55020.400μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性。2.2.7精密度试验 精密吸取人参皂昔rbl对照品溶液20μl,按上 述色谱条件连续进样6次，测得峰面积，以峰面积计算人参皂昔rbl的rsd。结 果，rsd为0.74% (n=6),表明本实验仪器精密度良好。2.2.8稳定性试验精密吸取同一供试品溶液20μl,按上述色谱条 件分别于0、2、4、8、12、24小时重复进样，测得峰

9、面积，以峰面积计算人参 皂昔rbl的rsdo结果，rsd为2.82% (n二6)。表明供试品在24 h内稳定性良好。2.2.9重复性试验 取同一批润肺散结胶囊样品内容物，精密称定6份, 每份约10g,按“223”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定, 计算人参皂昔rbl的含量，结果含量平均值为0.6885 mg. g-1, rsd为2.77%(n=6)o 表明方法的重复性良好。2.2.10加样冋收率试验 取已知含量的润肺散结胶囊样品内容物6份， 每份约5g,精密称定，分别精密加入定量的人参皂昔rbl对照品，按“2.2.3” 项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，计算加样冋收

10、率。结果见 表 2,平均回收率为 100.10%, rsd二 1.63% (n=6)o表2人参皂甘rbl冋收率试验结果2.2.11样品的含量测定 取六批润肺散结胶囊样品(0.26 g/粒)内容 物，每份约10g,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定， 用外标法计算人参皂昔rbl含量。结果，批号为20120810.2012091220121011 20121024、20121105、20121124的润肺散结胶囊中人参皂昔rbl的含量分别是 0.1790、0.1667、0.1609、0.1803> 0.1726、0.1675mg/粒。3讨论在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点且阴性对照无干 扰。就灵芝而言，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色 的主斑点，阴性对照无干扰。另外，点样时发现点样量为10μl吋有拖尾现象， 故最后定为5μl采用乙腊005%磷酸溶液进行二元梯度洗脱。结果表明，在 此条件下人参皂昔rbl能完全分离且峰形对称，阴性无干扰。另外还发现色谱峰 对流速比较敏感，以0.8 ml.min-1时为最佳。参考文献1国家药典委员会编中华人民共和国药典(一部).北京：中国医药科技出 版社,2010： 8、143> 251> 174. 吴彩霞，王昌军