第三篇第十三章水卫生生物学

1、本章内容：本章内容： 第一节第一节 水中的病原微生物水中的病原微生物 第二节第二节 水质生物学指标水质生物学指标 第三节第三节 水的卫生学检验方法水的卫生学检验方法基础知识：基础知识：水体中的微生物主要来源于土壤、以及人类和水体中的微生物主要来源于土壤、以及人类和动物的排泄物。动物的排泄物。其中，能够引起疾病的微生物称之为病原微生其中，能够引起疾病的微生物称之为病原微生物。物。与水有关的微生物感染疾病主要有：霍乱、伤与水有关的微生物感染疾病主要有：霍乱、伤寒、沙眼、血吸虫病、军团病等。寒、沙眼、血吸虫病、军团病等。目前，目前，80%的疾病都与水有关。的疾病都与水有关。水中常见的病原细菌：水中常

2、见的病原细菌： 1 致病性大肠杆菌致病性大肠杆菌 2 伤寒杆菌伤寒杆菌 （沙门氏菌）（沙门氏菌） 3 痢疾杆菌痢疾杆菌 （志贺氏菌）（志贺氏菌） 4 霍乱弧菌霍乱弧菌 5 军团菌军团菌 6 粪链球菌粪链球菌水中常见的病毒：水中常见的病毒： 1 肠道病毒（脊髓灰质炎病毒等）肠道病毒（脊髓灰质炎病毒等） 2 肝炎病毒肝炎病毒 3 轮状病毒轮状病毒 4 冠状病毒（冠状病毒（SARS）水中常见的病原性原生动物及寄生虫：水中常见的病原性原生动物及寄生虫： 1 隐孢子虫和贾第鞭毛虫（两虫）隐孢子虫和贾第鞭毛虫（两虫） 2 溶组织内阿米巴（痢疾阿米巴）溶组织内阿米巴（痢疾阿米巴） 3 蛔虫蛔虫 4 血吸虫血

3、吸虫第二节第二节 水质生物学指标水质生物学指标p水质生物学指标用来评价水中的病原性微生物，预水质生物学指标用来评价水中的病原性微生物，预防流行性传染病爆发。防流行性传染病爆发。p对每种病原微生物进行检测是不切实际的。对每种病原微生物进行检测是不切实际的。p研究发现，水中病原微生物主要来源于人畜粪便。研究发现，水中病原微生物主要来源于人畜粪便。因此检查人畜粪便中通常存在的微生物，作为评价水因此检查人畜粪便中通常存在的微生物，作为评价水受粪便污染的程度。受粪便污染的程度。p这样的微生物称作指示微生物。这样的微生物称作指示微生物。第二节第二节 水质生物学指标水质生物学指标几种常用的指示微生物几种常用

4、的指示微生物p病原细菌指示微生物：病原细菌指示微生物： 细菌总数细菌总数;大肠菌群；粪大肠菌群大肠菌群；粪大肠菌群;粪链球菌粪链球菌;梭梭菌菌/产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌p病毒指示微生物：病毒指示微生物： SC噬菌体；噬菌体；F-RNA噬菌体；脆弱拟杆菌噬菌体噬菌体；脆弱拟杆菌噬菌体;脊髓灰质炎病毒脊髓灰质炎病毒p病原性原生动物：病原性原生动物： 隐孢子虫、贾第鞭毛虫隐孢子虫、贾第鞭毛虫为何选择大肠菌群作为病原细菌指示微生物？为何选择大肠菌群作为病原细菌指示微生物？（1 1）大肠菌群的生理习性与大部分病原菌相）大肠菌群的生理习性与大部分病原菌相似，并且外界存活时间基本一致；似，并且外界存活时间基

5、本一致；（2 2）大肠菌群在人粪便中数量很大。）大肠菌群在人粪便中数量很大。 （3 3）检验技术不复杂。）检验技术不复杂。 大肠菌群大肠菌群第二节第二节 水质生物学指标水质生物学指标大肠菌群的形态和生理特性大肠菌群的形态和生理特性1 1 种类种类 （1 1）大肠埃希氏杆菌（最为常见）大肠埃希氏杆菌（最为常见） Escherichia coliEscherichia coli；E.coliE.coli （2 2）产气杆菌）产气杆菌 （3 3）枸橼酸盐杆菌）枸橼酸盐杆菌 （4 4）副大肠杆菌）副大肠杆菌第二节第二节 水质生物学指标水质生物学指标 大肠菌群大肠菌群 大肠埃希氏杆菌大肠埃希氏杆菌特性特

6、性 兼性好氧兼性好氧革兰氏阴性菌，无芽革兰氏阴性菌，无芽孢，两端钝圆孢，两端钝圆短杆菌短杆菌。大小约。大小约0.50.82.03.0微米。生长温度微米。生长温度1046摄氏度，适宜温度摄氏度，适宜温度37摄氏度，摄氏度，生长生长pH范围范围4.59.0，适宜的，适宜的pH为中性。能分解葡萄糖、甘露醇、为中性。能分解葡萄糖、甘露醇、乳糖等多种碳水化合物，并产酸产乳糖等多种碳水化合物，并产酸产气，所产生的气，所产生的CO2/H2为为1:1。远藤。远藤氏培养基上菌落呈红色、带金属光氏培养基上菌落呈红色、带金属光泽，直径约泽，直径约23mm。 第二节第二节 水质生物学指标水质生物学指标 大肠菌群大肠菌

7、群贾第虫病贾第虫病蓝氏贾第鞭毛虫所致蓝氏贾第鞭毛虫所致贾第虫滋养体贾第虫滋养体虫群隔离虫群隔离免疫缺陷及免疫功能低下者易发生严重感染免疫缺陷及免疫功能低下者易发生严重感染症状：腹泻症状：腹泻96%、上腹痛、上腹痛61%、疲、疲乏乏72%、体重减轻、体重减轻62%、恶心、恶心60%、稀便稀便57%、腹胀、腹胀42%、发热、发热17%急性患者：暴发性腹泻、水样便、急性患者：暴发性腹泻、水样便、 恶臭、腹痛等。恶臭、腹痛等。慢性患者：多见，周期性稀便，很慢性患者：多见，周期性稀便，很 臭，反复发作。臭，反复发作。儿童较易感染，可出现脂肪痢。儿童较易感染，可出现脂肪痢。亚急性患者：间歇性稀便，腹痛等。

8、亚急性患者：间歇性稀便，腹痛等。隐孢子虫病隐孢子虫病隐孢子虫所致隐孢子虫所致寄生部位：寄生部位： 人及哺乳动物的人及哺乳动物的 肠上皮细胞及呼肠上皮细胞及呼 吸道上皮细胞吸道上皮细胞感染途径：感染途径：经口误食被污染的食物或饮水经口误食被污染的食物或饮水感染期：卵囊感染期：卵囊4.临床表现临床表现免疫功能缺陷型隐孢子虫病免疫功能缺陷型隐孢子虫病 ： 症状多而重，持续时间长，直症状多而重，持续时间长，直 至死亡。多有严重腹泻与吸收至死亡。多有严重腹泻与吸收 不良。不良。 霍乱样水泻最常见，数霍乱样水泻最常见，数 十次十次/日。有脱水及酸中毒，体日。有脱水及酸中毒，体 重重 ，恶病质。，恶病质。免

9、疫功能正常型隐孢子虫病免疫功能正常型隐孢子虫病 ： 自限性腹泻，自限性腹泻，510次次/日，可自日，可自 愈。大便量多，水样愈。大便量多，水样/粘液稀便，粘液稀便， 无血便。无血便。 可伴有上腹部疼痛、可伴有上腹部疼痛、 恶心、呕吐、腹胀、厌食、体重恶心、呕吐、腹胀、厌食、体重 减轻等。少数可发热，头疼，婴减轻等。少数可发热，头疼，婴 幼儿可出现脱水及酸中毒。幼儿可出现脱水及酸中毒。第三节第三节 水的卫生学检验方法水的卫生学检验方法 主要内容：主要内容：1 细菌总数的测定细菌总数的测定 2 大肠菌群测定大肠菌群测定 1）发酵法）发酵法 2）滤膜法）滤膜法3）病毒监测方法（蚀斑检验法）病毒监测方

10、法（蚀斑检验法）4）噬菌体监测方法（）噬菌体监测方法（ISO10705）5）原生动物的监测方法（）原生动物的监测方法（USEPA1623） 第三节第三节 水的卫生学检验方法水的卫生学检验方法 细菌总数的测定细菌总数的测定 将定量的水样接将定量的水样接种于营养琼脂培养种于营养琼脂培养基中，在基中，在37温度温度下培养下培养24hr后，计后，计数生长的细菌菌落数生长的细菌菌落数，然后根据接种数，然后根据接种的水样数量就可算的水样数量就可算出每毫升水中的细出每毫升水中的细菌数。菌数。1ml1ml1ml1ml1ml1ml 原水原水9毫升无菌水毫升无菌水1ml1ml1mlCK对照对照先接种稀释水样先接种

11、稀释水样 再倾注培养基再倾注培养基10-210-337培养培养 大肠菌群的测定：发酵法大肠菌群的测定：发酵法第三节第三节 水的卫生学检验方法水的卫生学检验方法水样水样接种接种初步初步发酵发酵产酸产酸产气产气大肠菌群大肠菌群 厌氧芽孢杆菌厌氧芽孢杆菌 好氧芽孢杆菌好氧芽孢杆菌大肠菌群大肠菌群 好氧芽孢杆菌好氧芽孢杆菌阳性管阳性管大肠菌群大肠菌群 革兰氏阴性无芽孢革兰氏阴性无芽孢革兰氏革兰氏染色染色产生产生 典型菌落典型菌落鉴别培养基鉴别培养基 平板分离平板分离产酸产酸产气产气复发酵复发酵三步：（三步：（1）初步发酵试验；初步发酵试验； （2）平板分离）平板分离 ； （3）复发酵试验）复发酵试验

12、大肠菌群的测定：发酵法大肠菌群的测定：发酵法说明：说明：（1）采用含有乳糖的培养基，则分析结果不包括副）采用含有乳糖的培养基，则分析结果不包括副大肠杆菌；采用葡萄藤或甘露醇培养基，则分析结大肠杆菌；采用葡萄藤或甘露醇培养基，则分析结果包括副大肠杆菌果包括副大肠杆菌.因为副大肠杆菌分解乳糖缓慢或因为副大肠杆菌分解乳糖缓慢或不能分解不能分解（2）我国一般采用乳糖培养基）我国一般采用乳糖培养基第三节第三节 水的卫生学检验方法水的卫生学检验方法方法：将水样置于乳糖液体培养基中，方法：将水样置于乳糖液体培养基中，37培养培养24h，观察产酸和产气情况。，观察产酸和产气情况。 如如产酸产气可初步确定有大肠

13、菌群。产酸产气可初步确定有大肠菌群。 产酸：溴甲酚紫作指示剂，培养基由紫色产酸：溴甲酚紫作指示剂，培养基由紫色 变为黄色。变为黄色。 产气：杜氏小管顶端有气泡。产气：杜氏小管顶端有气泡。杜氏小管杜氏小管产酸产气的菌有产酸产气的菌有:1 :1 大肠菌群大肠菌群;2 ;2 厌氧芽孢杆菌厌氧芽孢杆菌;3 ;3 好氧芽孢杆菌好氧芽孢杆菌第三节第三节 水的卫生学检验方法水的卫生学检验方法发酵法测定大肠菌群步骤：发酵法测定大肠菌群步骤： 1 初步发酵试验初步发酵试验（1） 将第一步产酸产气的菌落划线接种在远藤氏培养基或伊将第一步产酸产气的菌落划线接种在远藤氏培养基或伊红美兰培养基表面，红美兰培养基表面，

14、37培养培养24h，目的阻止厌氧芽孢杆菌，目的阻止厌氧芽孢杆菌生长。生长。（2）革兰氏染色）革兰氏染色 取有典型菌落特征的单个菌落进行革兰氏染色。取有典型菌落特征的单个菌落进行革兰氏染色。大肠菌群和好氧芽孢杆菌生长。同时大肠大肠菌群和好氧芽孢杆菌生长。同时大肠菌群有特征性菌落出现。菌群有特征性菌落出现。发酵法测定大肠菌群步骤：发酵法测定大肠菌群步骤： 2 平板分离平板分离第三节第三节 水的卫生学检验方法水的卫生学检验方法大肠菌群：革兰氏阴性菌、不生芽孢、好氧。大肠菌群：革兰氏阴性菌、不生芽孢、好氧。 好氧芽孢杆菌：革兰氏阳性菌、生芽孢、好氧。好氧芽孢杆菌：革兰氏阳性菌、生芽孢、好氧。 将可疑菌

15、落（革兰氏阴性、大肠杆菌特征菌落）将可疑菌落（革兰氏阴性、大肠杆菌特征菌落）移接于乳糖液体培养基中，移接于乳糖液体培养基中，37培养培养24h。 产酸产气者确定为有大肠菌群存在。产酸产气者确定为有大肠菌群存在。最后根据最后根据有大肠菌群的阳性管数查表或通过有大肠菌群的阳性管数查表或通过公式计算。公式计算。发酵法测定大肠菌群步骤：发酵法测定大肠菌群步骤： 3 复发酵试验复发酵试验第三节第三节 水的卫生学检验方法水的卫生学检验方法1、抽滤法过滤定量水样，将细菌截留在滤膜上。、抽滤法过滤定量水样，将细菌截留在滤膜上。 2、将滤膜中没有细菌的一面贴在品红硫酸钠培养基或伊将滤膜中没有细菌的一面贴在品红硫酸钠培养基或伊红美蓝固体培养基上，以培育和获得单个菌落。红美蓝固体培养基上，以培育和获得单个菌落。3、将滤膜上符合大肠菌群菌落特征的菌落进行革兰、将滤膜上符合大肠菌群菌落特征的菌落进行革兰氏染色、镜检。氏染色、镜检。4、将革兰氏染色阴性无芽孢杆菌的菌落接种到含糖、将革兰氏染色阴性无芽孢杆菌的菌落接种到含糖培养基中，根据产气与否来判断有无大肠菌群存在、培养基中，根据产气与否来判断有无大肠菌群存在、5、根据滤膜上大肠菌落数和水样体积，计算结果。、根据滤膜上大肠菌落数和水样体积，计算结果。滤膜法测定大肠菌群步骤：滤膜法测定大肠菌群步骤：第三节第三节 水的卫生学检验方法水的卫生