怎样正确使用细胞培养耗材

1、怎样正确使用细胞培养耗材一、玻璃器材常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管等。无论是初次使用还是培养后重复使用的玻璃器材均需要进行消毒处理。首次使用的玻璃器材应先用自来水初步刷洗，然后用稀盐酸溶液（1% ）浸泡过夜，再用自来水冲洗，最后处理方法与重复使用的器皿的处理。重复使用的玻璃器皿的处理步骤：（1）刷洗。用软毛刷和优质中性洗涤剂刷洗，去除器皿内外表面的杂质。刷洗时注意不要用力 过重，以防损坏器皿内表面光洁度，影响细胞生长；也不能留有死角。器皿数量大时，可使用 超声波清洁装置，冲洗干净后晾干。（2） 清洁液处理。将刷洗晾干后的玻璃器皿放入硫酸-重铬钾清洁液中。清洁液配

2、方如下，见 下表：表清洁液配方名称*清洁液浓度25%（弱液）50%（次强液）75%（强液）重铬酸钾1000g1000g1000g浓硫酸2500mL5000mL7500ML蒸馏水（或废液）7500M15000mL2500mL该清洁液具有高度腐蚀性，操作时必须穿长筒胶靴，戴防酸橡皮手套，围裙和眼镜，以防清洁液溅岀而灼伤。在配液时还需注意将酸缓慢放入水中，以防酸遇水放热产生酸溅岀或使玻璃及陶制容器裂开而使清洁液外泄。切勿将水加入酸中，以防酸溅岀。常用清洁液为75%和50%两种。将玻璃器皿放入时最好装入塑料网袋内，再浸入清洁液中，玻璃瓶内不要残留气泡。一般浸泡1224小时后取岀。在清洁液中取岀的器皿先

3、用自来水冲洗 10次以上，再用单蒸水冲洗三次以上，最后用双蒸水（或去离子水）冲洗12次，晾干，包装杀菌。一般用 121 C磅高压蒸气灭 菌 20 分钟。玻璃滤器使用后及时用自来水冲洗滤器表面的剩余物，然后用单蒸水浸泡，除去滤 板内堵塞杂物，若用滤膜则将滤膜丢弃，加 4N 盐酸浸泡 12 小时以上，用自来水冲洗，再用单蒸水抽滤2次，双蒸水（或去离子水）抽滤冲洗、包装、121 C高压蒸气灭菌 20分钟。也可用5% 洁消精浸泡 20 分钟后，再按上述方法冲洗和灭菌。二、塑料器材 体外培养细胞中塑料器皿的使用越来越多，有进口的，也有国产的。主要有多孔培养板、培养 皿、培养瓶及吸嘴。多孔培养板有 4 孔

4、、 6 孔、 24 孔、 96 孔等规格可供选择。 多数为进口产品， 已消毒灭菌密封包装，使用时只需打开即可。有一次性使用的，也有反复使用的。在我国不少 实验室，由于经费有限，经过清洗和消毒灭菌再使用的较多。塑料器皿若使用后，先用自来水浸泡冲洗、晾干，再用3%HCl 或 2%NaOH 溶液浸泡过夜，用自来水充分冲洗，或先用 2%NaOH 处理之后再用 3%HCl 浸泡 30 分钟，最后用自来水冲洗干 净，并用双蒸水冲洗 3 次以上，晾干。消毒采用紫外线直接照射或辐照灭菌办法。清洗时要防 止产生划痕，以免影响细胞的贴附性。所以，培养要求较高的细胞的塑料器材，最好一次性使 用。三、橡皮器材应选择质

5、软、耐高温、毒性小的橡皮制品 （最好是硅制品 ）做各种瓶或试管的塞子、盖子。新购置 的橡皮制品，用自来水冲洗去除其表面粉粒和污物。先用5%氢氧化钠煮沸 15 分钟，用自来水冲洗 8 次，再用 4% 盐酸煮沸 15 分钟，用自来水冲洗 8 次，单蒸水冲洗 3 次，双蒸水 （或去离子 水）冲洗一次，晾干后包装或置于铝盒内，用121 C高压蒸气灭菌 20分钟。已用过的橡皮制品，先用自来水冲洗干净，然后用洗衣粉加热煮沸10 分钟后，用自来水边冲边用力搅动，以充分洗净残余洗衣粉，然后用蒸馏水煮沸2 次，每次 15 分钟，再用单蒸水冲洗 2次，必要时还要用双蒸水 （或去离子水 ） 冲洗一次，晾干后包装或放

6、于铝盒内，用121 C高压蒸气灭菌 20 分钟。四、金属器材细胞培养中需用多种金属器材，用于解剖、取材、剪切组织及持取物件等，常用的有剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等。新的金属器材，先用纸擦 去表面的油脂，再用洗衣粉煮沸，或用1 %碳酸氢钠煮沸 15 分钟，擦干后再用 95% 酒精纱布擦干，包装或置铝盒内于 121 C高压蒸气灭菌 20分钟。已用过的金属器材，及时用酒精棉球擦干 净，包装入铝盒内于 121 C高压蒸气灭菌 20分钟。五、其他物品纱布先用自来水洗净后，再用单蒸水冲洗，然后用单蒸水煮沸2次，每次 15 分钟，并经常用长镊子翻动，再用单蒸水洗2次，晾干后折成八层包装，用121 C高压蒸气灭菌 20分钟。注射器的针头使用后，立即用自来水（或来苏尔水）冲洗数次，冲洗出针头内的剩余物，以免堵塞针头，然后用单蒸水洗23次，再用95%酒精冲洗3次，包装或置铝饭盒内121 C高压蒸气灭菌 20 分钟。用于细胞培养过程中的各种人工合成培养液、 缓冲液和酶滤液等也需要进行除（灭）菌处理。 缓冲液常用高压蒸气消毒。血清用56 C水浴灭活30分钟。人工合成培养液等酶溶液用过滤除菌。安装滤器时要防止滤膜装偏而导致过滤失效，过滤时力量不能过大、过猛，以免滤膜破裂。滤液量多，用抽滤式或加压式（正压式）过滤装置。滤液量少，可选用2.5cm 直