病原学诊断与防治实用教案

1、2021-11-301Outline Laboratory diagnosis for bacterial infections Morphological - microscopic Molecular Serological Laboratory diagnosis for viral infections Morphological - electron microscopic Isolation Molecular: nucleic acids and proteins Serological Laboratory diagnosis for fungal infections Mor

2、phological - microscopic Isolation第1页/共112页第一页，共113页。2021-11-302第2页/共112页第二页，共113页。2021-11-303Assays Morphological assays Light or electron microscopies Isolation and differentiation Serological assays Antigen-antibody assays Molecular assays Microorganisms gene (DNA & RNA)第3页/共112页第三页，共113页。202

3、1-11-304Principles for Specimen Collection Sterile manipulation, avoid contamination Obtain a specimen from the infected site according to the disease phase before administrating antibiotics Double sera for antibody detections, acute and recovery phase each Positive if the titer of the later specime

4、n is above 4X to the first specimen Transport, and store correctly as soon as possible Store at -4oC for most bacterial specimens, but keep warm for Neisseria meningitidis and Neisseria gonorrhoeae Store at -4oC -70oC for viral specimens第4页/共112页第四页，共113页。2021-11-305Laboratory Diagnosis for Bacteria

5、l InfectionsMorphological Protein and Nucleic acidsAntibody第5页/共112页第五页，共113页。2021-11-306标本的采集(cij)和送检六原则l无菌取材,避免(bmin)杂菌污染l不同期(tngq)不同标本l用抗生素以前l采集病变明显部位l运送注意保存l标本必须新鲜第6页/共112页第六页，共113页。2021-11-307第7页/共112页第七页，共113页。2021-11-308Bacteriological DiagnosisIdentifying the organismMorphological Isolation

6、& cultureBiochemical reaction Serological assaysPathogenesis & antibiotics susceptibilityAnimal experimentVirulence testantibiotics susceptibility 第8页/共112页第八页，共113页。2021-11-309Morphological Non-stained microscopic observation Dark-field microscopy Observing the movement of live bacteria Sta

7、ined microscopic observations Gram stain Acid-fast stain Fluorescence stain 第9页/共112页第九页，共113页。2021-11-3010第10页/共112页第十页，共113页。2021-11-3011第11页/共112页第十一页，共113页。2021-11-3012第12页/共112页第十二页，共113页。2021-11-3013第13页/共112页第十三页，共113页。2021-11-3014第14页/共112页第十四页，共113页。2021-11-3015第15页/共112页第十五页，共113页。2021-11-

8、3016Isolation & Culture: Colony Size Shape Color Surface features Smooth - Rough Transparency Hemolysis第16页/共112页第十六页，共113页。2021-11-3017第17页/共112页第十七页，共113页。2021-11-3018第18页/共112页第十八页，共113页。2021-11-3019分离(fnl)(fnl)培养isolation and isolation and cultivationcultivation 分离培养(piyng)是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传

9、统诊断技术。（图为普通培养(piyng)箱）第19页/共112页第十九页，共113页。2021-11-3020 厌氧罐 厌氧袋第20页/共112页第二十页，共113页。2021-11-3021Biochemical Reactions Sugar Fermentation H2S Test Citrate utilization第21页/共112页第二十一页，共113页。2021-11-3022Serological Assays Detection antibody in the patients serum A current infection should be IgM positiv

10、e A 4-fold or greater rise on antibody titer between the acute serum sample and the convalescent serum sample Major drawbacks A single IgG antibody titer is difficult to interpret because it is unclear whether it represents a current or a previous infection the convalescent sample is usually taken 1

11、0-14 days after the acute sample. By this time, the patient has often recovered and the diagnosis becomes a retrospective one Some exceptions In certain diseases, a single titer of sufficient magnitude can be used as presumptive evidence of a current infection第22页/共112页第二十二页，共113页。2021-11-3023基本原则基本

12、原则用已知抗体检测用已知抗体检测(jin c)未知未知抗原；抗原； 用已知抗原检测用已知抗原检测(jin c)未知未知抗体。抗体。最简易的方法有玻片凝集等试验。最简易的方法有玻片凝集等试验。 常用的方法有：凝集试验、沉淀常用的方法有：凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、试验、补体结合试验、ELISA、免疫荧光等。免疫荧光等。免疫学试验(shyn)第23页/共112页第二十三页，共113页。2021-11-3024Animal experimentlAnimalsMouseGuinea Pig Rabbit Dog MonkeylInoculation routesIntradermal Subc

13、utaneousIntraperitoneal IntravenousIntracranial / intracerebral IntraspinalIntranasal Lavage第24页/共112页第二十四页，共113页。2021-11-3025Virulence Test Median lethal dose, LD50 Median infective dose, ID50 Elek Plate Diphtherotoxin Corynebacterium diphtheriae Enterotoxin enterotoxigenic E. coli第25页/共112页第二十五页，共

14、113页。2021-11-3026Antibiotic Susceptibility Test Method第26页/共112页第二十六页，共113页。2021-11-3027MIC & MBC Minimum Inhibitory Concentration，MIC Minimum Bactericidal Concentration，MBC Bactericidal drugs usually have an MBC equal or very similar to the MIC Bacteriostatic drugs usually have an MBC significa

15、ntly higher than the MIC 第27页/共112页第二十七页，共113页。2021-11-3028第28页/共112页第二十八页，共113页。2021-11-3029Bacterial Proteins, DNA & RNA Antigens (Proteins) Known antibodies Agglutination, coagulation, precipitation, ELISA, Immunofluorescence, radioimmunoassay DNA & RNA PCR Nucleic acid hybridization第29页/

16、共112页第二十九页，共113页。2021-11-3030Detection of Bacterial Antigens Precipitation test Coagglutination test Immunoflorecence, IF McAb technique第30页/共112页第三十页，共113页。2021-11-3031第31页/共112页第三十一页，共113页。2021-11-3032第32页/共112页第三十二页，共113页。2021-11-3033Bacterial DNA & RNA PCR DNA probe & hybridization DNA h

17、ybridization (southern blot) Plasmid fingerprint analysis Restrict multimorphologic analysis第33页/共112页第三十三页，共113页。2021-11-3034第34页/共112页第三十四页，共113页。2021-11-3035第35页/共112页第三十五页，共113页。2021-11-3036PCR第36页/共112页第三十六页，共113页。2021-11-3037分子生物学技术分子生物学技术(jsh) molecular biological techniques 核酸杂交核酸杂交(zjio) nu

18、cleotide hybridization 原位杂交原位杂交(zjio) in situ hybridization 斑点杂交斑点杂交(zjio) dot blot Southern blot Northern blot PCR 技术：多聚酶链反应技术：多聚酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR )第37页/共112页第三十七页，共113页。2021-11-3038 PCR 是一种无细胞的分子克隆 技术(jsh)，能在体外将一个基因或 一段DNA 序列经过多次循 环的DNA复制，在数小时内扩 增上百万倍。既便于基因诊断，又利于 研究。第38页/共112页第三十

19、八页，共113页。2021-11-3039第39页/共112页第三十九页，共113页。2021-11-3040Gene Chip / microarray第40页/共112页第四十页，共113页。2021-11-3041Diagnosis Strategy for Bacterial Infection第41页/共112页第四十一页，共113页。2021-11-3042第第25章章 病毒感染的诊断病毒感染的诊断(zhndun) P238Laboratory Diagnosis for Viral Infection Morphological Isolation & Culture P

20、rotein & Nucleic acids Serological第42页/共112页第四十二页，共113页。2021-11-3043 病毒感染的检测病毒感染的检测(jin (jin c)c)一、标本的采集(cij)与运送 急性期标本； 根据感染性质(xngzh)取不同的标本； 标本置于转运液中； 冷藏快运。第43页/共112页第四十三页，共113页。2021-11-3044Morphological Electron microscopy, EM Immunoelectron microscopy, IEM Light Microscopy Inclusion body Negri

21、 body第44页/共112页第四十四页，共113页。2021-11-3045第45页/共112页第四十五页，共113页。2021-11-3046二、病毒(bngd)(bngd)分离培养 病毒(bngd)(bngd)分离的一般程序是 接种易感动物 出现症状(zhngzhung) 血清学检测标本 杀灭杂菌 鸡胚 病变或死亡 鉴定 细胞培养 细胞病变第46页/共112页第四十六页，共113页。2021-11-3047Isolation and Culture Animal inoculation Chicken egg culture: 914 days Tissue culture Organ

22、culture Tissue culture Cell culture第47页/共112页第四十七页，共113页。2021-11-3048Cell culture第48页/共112页第四十八页，共113页。2021-11-3049第49页/共112页第四十九页，共113页。2021-11-3050Type of Cultured Cells Primary cell culture Passage 2-3 generations Diploid cell culture 2-fold chromosomes, Passage 50100 generations, safe, can be us

23、ed for vaccine manufacture Continuous cell line culture Mutant diploid cells, mostly tumor cells, easy to passage and maintain Not sensitive as diploid cells, may have endogenous viruses, can not be used for vaccine manufacture 第50页/共112页第五十页，共113页。2021-11-3051Indications of Viral Propagation Cytopa

24、thic effect, CPE Hemadsorption Hemagglutination Viral interference Neutralization test, NT第51页/共112页第五十一页，共113页。2021-11-3052第52页/共112页第五十二页，共113页。2021-11-3053第53页/共112页第五十三页，共113页。2021-11-3054（1）原代细胞培养： 动物(dngw)或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞经体外培养后可贴壁或悬浮生长。 （2）二倍体细胞株： 在体外连续培养5060代仍保持其二倍染色体数目的单型细胞。为生产人用疫苗(ymio)的首选

25、细胞株。（3）传代(chun di)细胞系 能在体外连续传代(chun di)、来自癌细胞或发生自发转化、突变的原代细胞或二倍体细胞株。第54页/共112页第五十四页，共113页。2021-11-3055 临床病毒(bngd)(bngd)实验室常用的细胞培养 细胞培养细胞培养常用的名称常用的名称组织来源组织来源 传代数传代数原代原代 HEKPMKRKGPE/CE 人胚肾人胚肾恒河猴肾恒河猴肾兔肾兔肾豚鼠胚豚鼠胚 或鸡胚或鸡胚12 二倍体二倍体 HEL(MRC-5)HDF 人胚肺人胚肺人新生儿包皮人新生儿包皮 2050 异倍体异倍体 Hep-2HeLaA549Vero 人喉癌人喉癌人子宫颈癌人子

26、宫颈癌人肺癌人肺癌非洲绿猴肾非洲绿猴肾 无限无限 第55页/共112页第五十五页，共113页。2021-11-3056识别病毒增殖的方法（1 1）细胞病变效应（CPECPE）：溶细胞型病毒感染细胞后，可出现(chxin)(chxin)细胞团缩、裂解或细胞肿大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。第56页/共112页第五十六页，共113页。2021-11-3057epithelial cells - adenovirusuninfectedearly infectionlate infection第57页/共112页第五十七页，共113页。2021-11-3058Negr

27、i Body第58页/共112页第五十八页，共113页。2021-11-3059（2）红细胞吸附：流感病毒和某些副粘病毒感染(gnrn)细胞后2448小时，细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。（3）干扰现象第59页/共112页第五十九页，共113页。2021-11-3060 病毒量测定（1 1）测定病毒数量可用空斑形成单位（PFUPFU）表示。一个空斑是标本中一个病毒大量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制增殖(zngzh)(zngzh)使局部单层细胞脱落，此即空斑。经染色后空斑可用肉眼观察，计算空斑数即可计数病毒数

28、量。第60页/共112页第六十页，共113页。2021-11-3061PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY第61页/共112页第六十一页，共113页。2021-11-3062PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY第62页/共112页第六十二页，共113页。2021-11-3063PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY第63页/共112页第六十三页，共113页。2021-11-3064三、光学(gungxu)(gungxu)显微镜和电子显微镜1 1、光学(gungxu)(gungxu)显微镜：观察病毒的包涵体第64页/共112页第六十四页，共113页。2021-1

29、1-30652 2、电子显微镜：直接观察(gunch)(gunch)病毒第65页/共112页第六十五页，共113页。2021-11-3066Viral Quantity Determination TCID50 50% tissue culture infectious dose Determine the infectivity of the examined viruses PFU Plaque formation pfu/ml Precisely quantitate the number of the living viral particles第66页/共112页第六十六页，共113

30、页。2021-11-3067第67页/共112页第六十七页，共113页。2021-11-3068Plaque第68页/共112页第六十八页，共113页。2021-11-3069Differences between viral particle (VP), plaque formation unit (PFU) Viral particles (VPs) represent the total number of viral particles (live and dead combined). Due to variations in virus preparations the ratio

31、 of live/dead varies significantly and therefore, VP does not reflect the amount of active virus in the preparation PFU (plaque formation unit) represents the number of infectious or live viruses. It reflects the amount of working viruses in the preparation For most virus preps, the VP/PFU ratio is

32、20:1 to 50:1 Which one better reflects the amount of active virus used? Using VP (viral particles) as the unit will result in significant variations in the amount of actual live viruses used, and using IFU or PFU as the viral unit will give more consistent outcomes. 第69页/共112页第六十九页，共113页。2021-11-307

33、0Proteins and Nucleic Acids Proteins (antigens) Fluoresece-labeled, enzyme-labeled (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) and radio-labeled anitbodies Viral DNA or RNA Gene chip DNA chip / cDNA Microarray第70页/共112页第七十页，共113页。2021-11-3071Virus-specific Antibodies Neutralization test, NT Hemagglut

34、ination inhibition test, HI Complement fixation, CF ELISA Western blot第71页/共112页第七十一页，共113页。2021-11-3072三、病毒感染的血清学诊断方法 P240 P2401 1、中和试验(shyn) (shyn) 2 2、补体结合试验(shyn) (shyn) 3 3 、 红 细 胞 凝 集 和 凝 集 抑 制 试 验(shyn) (shyn) 病毒抗体(kngt) 失去感染性恢复期/早期 4:1，有诊断(zhndun)意义。第72页/共112页第七十二页，共113页。2021-11-3073ELISA fo

35、r HIV antibodyMicroplate ELISA for HIV antibody: coloured wells indicate reactivity第73页/共112页第七十三页，共113页。2021-11-3074第74页/共112页第七十四页，共113页。2021-11-3075Diagnosis Strategy for Viral Infection 第75页/共112页第七十五页，共113页。2021-11-3076Rapid Diagnosis for Viral Infection Morphological EM & IEM, occasionally

36、 Light Microscopy: inclusion body Viral antigens Immunofluorescence Radioimmunoassays ELISA Specific antibodies: IgM Nucleic acids: PCR第76页/共112页第七十六页，共113页。2021-11-3077小 结 细菌感染的微生物学检查法 病原体检查 核酸的检测 抗原、抗体(kngt)的检测 病毒感染的微生物学检查法 电镜及免疫电镜 病毒的分离培养和鉴定 核酸的检测 抗原、抗体(kngt)的检测 真菌感染的微生物学检查法 直接镜检 真菌的分离培养第77页/共112

37、页第七十七页，共113页。2021-11-3078第四节第四节 特异性预防特异性预防(yfng)与治疗与治疗Prevention Principles第78页/共112页第七十八页，共113页。2021-11-3079特异性免疫(miny)的分类 自然(zrn)免疫Natural Immunization 自然(zrn)主动免疫：隐性或显性感染 自然(zrn)被动免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体 人工免疫 Artificial Immunization 人工主动免疫：接种疫苗或类毒素等 人工被动免疫：注射抗毒素或丙种球蛋白等第79页/共112页第七十九页，共113页。2021-11-3080一

38、、人工免疫(rn n min y)(artificial immunization) 用人工的方法给机体(jt)输入抗原性物质（如疫苗、类毒素等）或直接输入免疫效应分子（如抗体、细胞因子等），使机体(jt)获得特异性免疫力的方法。 人工主动免疫 artificial active immunization 人工被动免疫 artificial passive immunization第80页/共112页第八十页，共113页。2021-11-3081人工免疫：采用人工方法将疫苗(ymio)、类毒素等或含有某种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人体，以增强宿主体的抗病能力。人工自动人工自动(zdng)

39、免疫免疫 artificial active immunization疫苗（疫苗（vaccine）类毒素类毒素人工被动免疫人工被动免疫(bi dn min y) artificial passive immunization抗毒素抗毒素抗菌血清抗菌血清血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白第81页/共112页第八十一页，共113页。2021-11-3082人工(rngng)自动与被动免疫比较区区 别别 点点人工自动免疫人工自动免疫人工被动免疫人工被动免疫免疫物质免疫物质接种次数接种次数免疫力出现时间免疫力出现时间免疫力维持时间免疫力维持时间用途用途抗原抗原1 3 次次慢慢(2 4 周周)长长(数月数月数

40、年数年)多用于预防多用于预防抗体或细胞因子抗体或细胞因子1 次次快快(立即出现立即出现)短短(2 3 周周)用于治疗或应急预防用于治疗或应急预防第82页/共112页第八十二页，共113页。2021-11-3083生物制品(shn w zh pn)(biological products)：人工免疫的免疫原、免疫血清、细胞制剂及诊断制剂的生物性制剂。 人工(rngng)主动免疫生物制品 疫苗 类毒素 人工(rngng)被动免疫生物制品 抗毒素 丙种球蛋白第83页/共112页第八十三页，共113页。2021-11-3084疫苗(ymio)（vaccine） 减毒活疫苗（attenuated liv

41、e vaccine） 卡介苗（BCG） 灭活疫苗（inactivated vaccine） 伤寒(shnghn)沙门菌与甲、乙型副伤寒(shnghn)沙门菌混合的三联疫苗 亚单位疫苗（subunit vaccine） 基因工程疫苗（gene engineered vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）第84页/共112页第八十四页，共113页。2021-11-3085第85页/共112页第八十五页，共113页。2021-11-3086第86页/共112页第八十六页，共113页。2021-11-3087类毒素（toxoid） 细菌外毒素经甲醛(ji qun)液处理

42、后，其毒性消失而仍保留抗原性的生物制品 常用的类毒素 白喉类毒素 破伤风类毒素等 白、百、破三联疫苗第87页/共112页第八十七页，共113页。2021-11-3088人工被动免疫(bi dn min y)生物制品 抗毒素（antitoxin） 通常是用细菌类毒素给马多次注射后，取其免疫(miny)血清提取免疫(miny)球蛋白精制而成 常用 破伤风抗毒素 白喉抗毒素 免疫(miny)球蛋白（immunoglobulin）第88页/共112页第八十八页，共113页。2021-11-3089人工主动免疫病毒(bngd)疫苗 减毒活疫苗（attenuated live vaccine） 灭活疫苗（

43、inactivated vaccine） 亚单位疫苗（subunit vaccine） 基因工程疫苗（gene engineered vaccine） 基因工程亚单位疫苗（gene engineered subunit vaccine） 基因工程载体疫苗（gene engineered vectored vaccine） 基因缺失活疫苗（gene deleted live vaccine） 核酸(h sun)疫苗（nucleic acid vaccine）。 合成肽疫苗（synthetic peptide vaccine） 抗独特型疫苗（anti-idiotype vaccine）第89页/共

44、112页第八十九页，共113页。2021-11-3090活疫苗（Living vaccine） 减毒活疫苗 基于基因工程技术的新型活疫苗 遗传重组(zhn z)活疫苗 基因缺失活疫苗 载体活疫苗第90页/共112页第九十页，共113页。2021-11-3091减毒活疫苗(Attenuated vaccine) 自然或人工(rngng)选择法（如Ts株）对人低毒或无毒的变异株，如脊灰、流感、麻疹的减毒株。 优点：模拟自然感染，免疫效果好，局部IgA。 理论上的缺点，实际工作中少见 变异株可能回复到有毒力的野生株 如果机体免疫缺陷，减毒株仍可能引起感染或并发症 可能激活机体内其他病毒的感染 减毒活

45、苗可能引起持续感染 成功的范例：1961年我国应用脊灰疫苗，脊灰发病率大幅度下降。1980年天花病毒灭绝。第91页/共112页第九十一页，共113页。2021-11-3092遗传重组(zhn z)疫苗 将野毒株表面抗原基因与弱毒株其他基因组合(zh)而获得减毒活病毒。 适用于基因组分节段双链RNA病毒，如流感病毒、轮状病毒等。第92页/共112页第九十二页，共113页。2021-11-3093基因(jyn)缺失活疫苗 利用DNA重组技术，定向缺失病毒基因组的某一区段，使病毒丧失毒力而保留(boli)增殖能力和免疫原性。 优点：疫苗株的遗传背景清楚，不易突变回到野毒株。第93页/共112页第九十

46、三页，共113页。2021-11-3094载体(zit)活疫苗 利用DNA重组技术，将编码病毒抗原的基因插入到另一无毒力的载体(zit)病毒，使之高效表达 易建立多价疫苗 载体(zit)病毒常用的有痘苗病毒、腺病毒、HSV-1第94页/共112页第九十四页，共113页。2021-11-3095灭活疫菌（Killed vaccine） 灭活全病毒疫苗 亚单位(dnwi)疫苗 合成肽病毒疫苗 基因工程疫苗 独特型病毒疫苗 核酸疫苗第95页/共112页第九十五页，共113页。2021-11-3096灭活全病毒(bngd)疫苗 物理或化学方法灭活病毒。适用烈性或易变异病毒如乙脑病毒、狂犬病病毒、流感病

47、毒。 优点：生产简单、易保存运输 缺点 需要大量(dling)培养病毒，成本高 无局部抗体，不激活CTL，可激活TDTH 甲醛灭活的麻疹病毒和RSV疫苗可加重疾病，机制不详第96页/共112页第九十六页，共113页。2021-11-3097亚单位(dnwi)疫苗（Subunit） 种类 化学方法制备：如HBsAg和流感HA 基因工程亚单位疫苗 优点 不含病毒核酸，仅有能诱导中和抗体(kngt)的衣壳蛋白或包膜表面抗原。免除了回复突变和交叉复活的可能。 消除肿瘤病毒的潜在的致癌作用。第97页/共112页第九十七页，共113页。2021-11-3098合成肽病毒(bngd)疫苗 人工合成病毒保护性

48、抗原决定簇肽段。 优点 制备容易(rngy)，可大量生产，易保存，副作用少 理论与实践上的缺点 免疫原性弱，使用时需要加佐剂。 不同肽免疫活性有差异。 部分肽只激发B细胞表位，缺乏激发TH细胞的表位。第98页/共112页第九十八页，共113页。2021-11-3099基因工程(jyn gngchng)疫苗 利用DNA重组技术制备(zhbi)的生物制品。如将编码病毒特异抗原的基因用适当的载体将此基因带入大肠杆菌或真核细胞，使之表达。 研发成本高，生产成本低，下游工程复杂。第99页/共112页第九十九页，共113页。2021-11-30100核酸(h sun)疫苗 将病毒基因导入DNA载体(zit

49、)（通常是带有真核表达调控基因的质粒或病毒），将重组DNA导入机体，重组DNA可以在细胞的转录和翻译系统表达出目的蛋白。 优点：同时刺激产生体液和细胞免疫，能诱导CTL活性，易生产，易保存。 理论上缺点：安全性尚待考察。 目前仅在实验研究中，尚未投放市场。第100页/共112页第一百页，共113页。2021-11-30101独特型病毒(bngd)疫苗（Idiotype） 基于Jerne的免疫网络学说，内影像组抗体中含有与抗原(kngyun)一致的表位序列，又称抗独特型抗体疫苗 特别适合于 不能培养或培养困难、产量极低的病原体 直接用病病制备有潜在危险的，如Retrovirus 免疫原性弱，且不能用重组技术生产的抗原(kngyun)第101页/共112页第一百零一页，共113页。2021-11-30102第102页/共112页第一百零二页，共113页。2021-11-30103人工(rngng)被动免疫预防 胎盘丙种球蛋白 人血清(xuqng)丙种球蛋白 特异性免疫球蛋白 乙型肝炎免疫球蛋白第103页/共112页第一百零三页，共113页。2021-11-30104第三节 病毒感染的治疗(zhlio) P243 化学药物 基因制剂(zhj) 天然药物第104页/共112页第一百零四页，共113页。2021-11-30105抗病