病原生物学实验二实用教案

1、细菌细菌(xjn)(xjn)接种技术接种技术 实验实验(shyn)(shyn)目的目的 1 1 掌握常用的细菌接种方法掌握常用的细菌接种方法 2 2 熟悉细菌生长现象的观察方法熟悉细菌生长现象的观察方法 第1页/共35页第一页，共36页。（一）细菌的分离培养和接种（一）细菌的分离培养和接种(jizhng)技术技术接种工具接种工具接种针和接种环接种针和接种环L型涂布棒型涂布棒接种环境接种环境(hunjng)接种罩、超净工作台或无菌室内进行。接种罩、超净工作台或无菌室内进行。第2页/共35页第二页，共36页。接种接种(jizhng)方法方法1. 平板划线接种法：平板划线接种法：目的：使混合的细菌目

2、的：使混合的细菌(xjn)呈单个分散生长，呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获形成单个菌落，以便获得纯菌。得纯菌。方法：方法：分区划线法：适用于含菌分区划线法：适用于含菌量较多的标本。量较多的标本。连续划线法：适用于含菌连续划线法：适用于含菌量较少的标本。量较少的标本。第3页/共35页第三页，共36页。分区分区(fn q)划线划线 划线时接种环与平皿约成划线时接种环与平皿约成30-40度角度角,轻轻接触轻轻接触,以腕以腕力在琼脂力在琼脂(qingzh)表面轻快滑动表面轻快滑动,不能划破琼脂不能划破琼脂(qingzh). 第一次划线应占平皿面积的第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占

3、以后每次划线约占面积的面积的1/41/5. 划线为连续划线划线为连续划线,不能间断不能间断.应占满平皿应占满平皿.划线不能交叉划线不能交叉重复重复. 每次划完后应灭菌每次划完后应灭菌.第4页/共35页第四页，共36页。第5页/共35页第五页，共36页。2.斜面接种法：斜面接种法：用于菌种移种用于菌种移种(y zhn)，以进一步鉴定，以进一步鉴定 和保存菌种。和保存菌种。 第6页/共35页第六页，共36页。3.半固体穿刺接种法：保存菌种或观察细菌的动力和生化(shn hu)反应。4.液体接种法：用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培养基的接种。第7页/共35页第七页，共36页。四四种种(s(s z

4、hzhnn)接接种种方方法法第8页/共35页第八页，共36页。 将上述已接种将上述已接种(jizhng)细菌的培养基细菌的培养基置置37恒温培养箱中孵育恒温培养箱中孵育1824h，观，观察细菌的生长现象。察细菌的生长现象。第9页/共35页第九页，共36页。（二）细菌在培养基上的生长（二）细菌在培养基上的生长(shngzhng)现象现象第10页/共35页第十页，共36页。1. 细菌在固体培养基中的生长细菌在固体培养基中的生长(shngzhng)现象现象 菌落菌落 定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见殖，形成单一肉眼可见(kjin)(kjin

5、)的细菌的细菌集团。集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。堆积物。第11页/共35页第十一页，共36页。菌落菌落(jnlu)与菌苔与菌苔菌落(jnlu)菌苔第12页/共35页第十二页，共36页。2. 细菌在液体培养基中的生长细菌在液体培养基中的生长(shngzhng)现象现象 浑浊：大多数细菌，如浑浊：大多数细菌，如E.c. 沉淀：多见于链状排列沉淀：多见于链状排列(pili)的细菌。的细菌。 菌膜：专性

6、需氧菌（如结核分枝杆菌、枯草杆菌膜：专性需氧菌（如结核分枝杆菌、枯草杆菌）菌） 。第13页/共35页第十三页，共36页。细菌在液体培养基中的生长细菌在液体培养基中的生长(shngzhng)现象现象菌膜菌沉淀(chndin)均匀(jnyn)浑浊对照第14页/共35页第十四页，共36页。3. 细菌在半固体培养基中的生长细菌在半固体培养基中的生长(shngzhng)现现象象 有鞭毛细菌：有鞭毛细菌： 在培养基中沿穿刺在培养基中沿穿刺(chunc)线并向外扩散线并向外扩散生长，穿刺生长，穿刺(chunc)线边缘模糊。线边缘模糊。 无鞭毛细菌：无鞭毛细菌： 只沿穿刺只沿穿刺(chunc)线生长，穿刺线生

7、长，穿刺(chunc)线边缘清晰。线边缘清晰。第15页/共35页第十五页，共36页。细菌在半固体培养基中的生长细菌在半固体培养基中的生长(shngzhng)现象现象有动力(dngl) 现象无动力(dngl) 现象第16页/共35页第十六页，共36页。 肠道致病菌的分离肠道致病菌的分离(fnl)培养培养(1)第17页/共35页第十七页，共36页。 一.肠道杆菌的生物学性状 二.S-S培养基的特性及用途 三.分离培养方法 主要(zhyo)内容第18页/共35页第十八页，共36页。（一）肠道杆菌(gnjn)的生物学性状 埃希菌属：大肠(dchng)埃希菌沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型、丙型副伤寒志

8、贺菌属：痢疾志贺菌肠杆菌科的重要(zhngyo)菌属及代表菌种第19页/共35页第十九页，共36页。1.相似的形态(xngti)染色从形态(xngti)上无法区别第20页/共35页第二十页，共36页。乳糖(r tn)发酵试验 肠道致病菌 肠道非致病菌 多数不发酵乳糖 多数发酵乳糖 初步(chb)鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌第21页/共35页第二十一页，共36页。 +/- - +伤寒杆菌 - - +痢疾杆菌 - 大肠杆菌 硫化氢 乳糖 葡萄糖 菌名 三种细菌的生化(shn hu)反应 第22页/共35页第二十二页，共36页。成成 分分含量（含量（g/Lg/L）作作 用用牛肉膏牛肉膏5 5营养成分

9、营养成分乳糖乳糖1010营养成分，发酵营养成分，发酵蛋白胨蛋白胨5 5营养成分营养成分胆酸钠、胆酸胆酸钠、胆酸- -脱氧胆脱氧胆酸钠盐混合物（三号酸钠盐混合物（三号）3.53.5抑制抑制G+G+、大部分大肠菌群和变形、大部分大肠菌群和变形杆菌杆菌柠檬酸钠柠檬酸钠8.58.5抑制抑制G+G+、大部分大肠菌群和变形、大部分大肠菌群和变形0.1%0.1%煌绿溶液煌绿溶液0.33ml0.33ml抑制抑制G G+ +、大部分大肠菌群和变形、大部分大肠菌群和变形硫代硫酸钠硫代硫酸钠8.58.5检测硫化氢的产生检测硫化氢的产生10%10%柠檬酸铁溶液柠檬酸铁溶液10ml10ml检测硫化氢的产生检测硫化氢的产

10、生1%1%中性红溶液中性红溶液2.5ml2.5ml指示剂指示剂琼脂琼脂1717凝固剂凝固剂（二）SS培养基 （Salmonella Shigella Agar ）第23页/共35页第二十三页，共36页。胆盐抑制胆盐抑制G+,G+,枸橼酸钠和枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌煌绿能部分抑制大肠杆菌, ,致病的沙门致病的沙门(shmn)(shmn)菌和菌和志贺菌能大量生长。志贺菌能大量生长。中性红指示剂和乳糖中性红指示剂和乳糖, ,中中性红遇酸变粉红。性红遇酸变粉红。常用于肠道致病菌的分离常用于肠道致病菌的分离培养。培养。 （二）SS培养基第24页/共35页第二十四页，共36页。细细 菌菌SS平板平

11、板大肠杆菌大肠杆菌粉红色粉红色大菌落大菌落痢疾杆菌痢疾杆菌无色细小，半透明菌落无色细小，半透明菌落伤寒杆菌伤寒杆菌无色细小无色细小 半透明菌落半透明菌落 ( (中间有黑色沉淀）中间有黑色沉淀）SS培养基中菌落(jnlu)特点第25页/共35页第二十五页，共36页。第26页/共35页第二十六页，共36页。 将粪便(fnbin)标本以平板分区划线法接种到SS培 养基。 (每个实验室8个SS平板，每组做好标记，班长用胶布按班级绑好) 放入37温箱中培养24h；取出放4冰箱中保存备用。 （三）粪便标本(biobn)的分离培养第27页/共35页第二十七页，共36页。v1.空气中细菌的检查（每个班2个平皿

12、） v v 原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。v v 方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37 培养24小时，观察(gunch)结果。细菌细菌(xjn)(xjn)在自然界的分布在自然界的分布第28页/共35页第二十八页，共36页。2.2.紫外线对细菌(xjn)(xjn)的影响（每个实验室2 2个培养皿）取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，打开(d ki)一半平皿盖，置于紫外灯下照射30分钟，然

13、后盖好平皿，置37培养24h后取出观察结果。第29页/共35页第二十九页，共36页。 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后(rnhu)同方向旋转60度后再次密涂接种。第30页/共35页第三十页，共36页。 3. 咽喉部细菌的检查（每班咽喉部细菌的检查（每班4个平皿）个平皿） 取血琼脂平板取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm处，受试者用力处，受试者用力(yng l)咳嗽几次；咳嗽几次；盖上平皿盖，置盖上平皿盖，置37温箱中倒置培养温箱中倒置培养24h后取出观察结果。后取出观察结果。第31页/共35页第三十一

14、页，共36页。4.化学消毒剂对细菌化学消毒剂对细菌(xjn)的影响的影响方法：取一普通平皿培养基，方法：取一普通平皿培养基，一部分写上一部分写上“前前”，另一部分，另一部分写上写上“后后”，然后将手指，然后将手指(shuzh)(shuzh)在写在写有有“前前”的部分沾一下，再将的部分沾一下，再将手指手指(shuzh)(shuzh)用酒精进行消毒，在写用酒精进行消毒，在写有有“后后”的部分沾一下。放入的部分沾一下。放入3737温箱培养温箱培养2424小时后观察。小时后观察。 （每个实验室（每个实验室4 4个平皿）个平皿）第32页/共35页第三十二页，共36页。5.5.自选细菌(xjn)(xjn)进行培养(4(4个) )方法方法(fngf)(fngf)：取一普通平皿培养基，用棉签沾取生理盐水后，：取一普通平皿培养基，用棉签沾取生理盐水后，在手机、台面等物品上擦拭，然后涂布在平板上。在手机、台面等物品上擦拭，然后涂布在平板上。第33页/共35页第三十三页，共36页。下次下次(xi c)实验实验 细菌细菌(xjn)的形态学检查的形态学检查 药敏试验药敏试验 肠道致病菌分离培养肠道致病菌分离培养 第34页/共35页第三十四页，共36页。感谢您的观看(gunkn)！第35页/共35页第三十五页，共36页。NoImage内容(