2022年2022年微生物学实验报告

1、精选学习资料 - - - 欢迎下载0.2pm1精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载试验一油镜的使用和细菌的简洁染色法2试验二细菌的革氏染色与芽孢染色4试验三常用培育基的配制6试验四酵母菌霉菌的外形结构观看及酵母死活细胞的鉴别7试验五.微生物大小的测定与显微计数9试验六环境中微生物的检测和分别纯化10试验七细菌鉴定中常用的生理生化反应11试验八（综合试验）化能异养微生物的分别与纯化12课程名称：微生物学试验班级：化生系生命科学本科试验日期：指导老师：黎勇试验一油镜的使用和细菌的简洁染色法2精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载目的要求学习并娴熟把握油镜的使用技术；观看细菌的基本

2、外形；学习观看细菌的运动性的基本方法；基本原理1. n· a=n· sin 2. d= /2n.a3. 目镜可提高放大倍数,但有效放大率取决于镜口率；已经辨论的物体不放大看不清,未辨论物放得再大也看不清；4. 用悬滴法或凹玻片法观看细菌的运动性时,可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区分于颗粒的布朗运动；器材用具显微镜.载玻片.凹玻片.盖玻片.接种环.香柏油.二甲苯.凡士林.吸水纸.擦镜纸；细菌.放线菌等固定装片；培育18 小时左右的b. subtilis.s. arueus 菌斜面培育物；无菌水.生理盐水；方法步骤 ：（一）油镜的使用镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的

3、物,并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置,虹彩光圈开到最大,镜头转开成八字形在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视当心上升载物台（缩短镜头与装片距离,镜头浸入油中,至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）粗调器渐渐下降载物台（亲密凝视视野,当捕获到物像时,立刻用细调器校正）认真观看并绘图取出装片,清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指帮助,快速拭擦一.二次）用清洁擦镜纸认真擦干二甲苯（2-3 次）；（二）细菌的简洁染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观看（三）细菌运动性的观看取干净盖玻片,四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻

4、转观看结果分析1.画一圆圈表示视野,选取所观看的微生物绘图,留意特别结构.外形和排列；（描画时按视野实际大小 5 10 倍绘制）菌名：大肠杆菌菌名：金黄色葡萄球菌放大倍数： 100× 10（× 5）放大倍数： 100× 10（× 5）特别结构：无特别结构：无视野观看下微生物的外形2.油镜使用时为什么必需干燥装片？防止水油分层,光受到折射而影响油镜性能的发挥试验争论首次试验中有几个要点：一为按无菌操作取用菌；二为涂片技术的把握；三为油镜使用技术；凡试验3精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载中同学的所思所想,如无菌操作技术要点.自行处理试验材料.失

5、败与摸索等均可进行争论（如涂片时蒸馏水不宜过多.取用菌时防止菌被灼烫变形.取菌宜少不宜多等均为可以争论的内容）；试验二细菌的革氏染色与芽孢染色目的要求观看细菌菌落的特点；把握简洁染色法.革兰氏染色法的原理及操作步骤；在油镜下观看细菌个体外形；学习环境中微生物的检查方法,并加深对微生物分布广泛性的熟悉器材用具e.colib.subtiliss.aureus.的斜面培育物（18 24 小时）以及菌落平板各一个；染4精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载液：草酸铵结晶紫.划兰氏染液.卢戈氏碘.95%的乙醇.蕃红；无菌水.显微镜.载片.滤纸.液体石蜡为.擦镜纸.接种环；方法内容 ：（一）试验室

6、环境中微生物的检查（二）革兰氏染色法涂片固定冷却结晶紫染色1min水洗碘媒染 1min95%乙醇 30-60s水洗番红复染2 3min水洗干燥油镜镜检（三）芽孢染色涂片固定孔雀绿加热染色（勿干）5min水洗番红复染1min水洗镜检结果分析试验结果被染成紫色者即为革兰氏阳性,被染成红色者为革兰氏阴性；菌体染成红色,芽孢被染成绿色；菌名：大肠杆菌菌名：金黄色葡萄球菌放大倍数： 100× 10（× 5）放大倍数： 100× 10（× 5）染色反应：红色（阴性）染色反应：紫色（阳性）精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载菌名：枯草芽孢杆菌放大倍数： 10

7、0× 10（× 5） 染色反应：紫色（阳性）图 1视野观看下细菌的革兰氏染色反应芽孢（绿色）精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载5精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载图 2枯草芽孢杆菌芽孢外形图试验争论严格把握脱色程度,为成败的关键；如脱色时间过度,就阳性菌初时之紫色脱出,复染成红色,误成阴性,反之脱色时间不足,阴性菌在初染时的紫色未能脱出,复染时不能染成红色,误以为阳性菌；涂片不能厚；卢弋氏碘即用即配；作业1.绘出所观看到到细菌的视野图,并说明染色反应；2.哪些因素会影响到革兰氏染色结果的正确？其中为关键的一步为什么？菌龄及培育条件和染色技术为最主要的

8、,关键为脱色；3.怎样对未知菌进行革兰氏染色,以证明你的结果的正确？与已知菌混合涂片比较；试验三常用培育基的配制目的要求明白培育基的配制原理；明白培育基常规配制程序；明白培育基过程各环节的要求和留意事项；明白半合成培育基的配制原理,学习把握肉膏蛋白胨培育基.马铃薯培育基的配制方法；器材用具等配各种培育基的组成成分,琼脂.1n naoh溶液 1n hcl 天平或台秤高压蒸汽灭菌锅.移液管.试管.烧杯.量筒.锥形瓶.培育皿.玻璃漏斗等；药匙.称量纸.ph 试纸.记号笔.棉花.纱6精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载布.线绳.塑料试管盖.牛皮纸报纸等；方法步骤 一 玻璃器皿的洗涤和包装以小

9、组为单位清洗.控水,按9 个为一组,分别用报纸包好并放入烘箱中等待灭菌； 二 液体及固体培育基的配制过程原料称量（按配方次序）溶解调剂 h过滤澄清分装塞棉塞和包札灭菌分别按教材配方配制牛肉膏蛋白胨.马铃薯液体及固体培育基； 三 培育基的分装用玻璃漏斗, 橡皮管,小玻璃管及弹簧夹制作分装装置选用 15× 150平口试管或150ml 锥形瓶贴上标签分装（至试管高度1/4-1/3,斜面制作用1/5 ,半固体用 1/3 ）要求：每人制作斜面3 支；其余分装至锥形瓶中； 四 棉塞的制作及试管.锥形瓶的包扎分别制作试管及锥形瓶棉塞并塞好好以牛皮纸包装头部； 五 培育基的灭菌培育基用湿热法灭菌；皿

10、用干热法分别灭菌； 六 斜面和平板的制作（下次试验完成） 七 培育基的无菌检查（下次试验完成） 八 无菌水的制备同时制作无菌生理盐水,置锥形瓶中备用；结果分析以斜面接种培育验证培育基配制成效；以平板制作及接种24 小时培育验证灭菌成效；简述移液管包装的留意事项；试验争论灭菌器的灭菌成效必需间隔一段时间,加以验证,主要方法除无菌检查外,仍通过压力试纸同时灭菌来验证其压力与温度；培育基通常成批制作备用；但制作后,其贮藏时间有肯定限制,一般室温条件下不超过三周；冰箱 4条件下可贮藏半年,过期不能用；作业：1.记录培育基的成分和名称2.分析所配制培育基的碳源.氮源.能源及无机盐.维生素的来源； 所配制

11、均为自然培育基,各成分主要来自有机质,微量元素可以由自来水供应；3.什么为自然培育基？什么为半合成.合成培育基？试验四酵母菌霉菌的外形结构观看及酵母死活细胞的鉴别目的要求观看并把握酵母菌霉菌的菌落特点.个体外形.生长及繁衍方式；学习酵母死活细胞的鉴别方法；材料用具酿酒酵母.红酵母.假丝酵母； 酿酒酵母和红酵母菌落平板各一个；酿酒酵母豆芽汁7精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载斜面及酿酒酵母醋酸钠斜面各一支,假丝酵母加盖片培育的平板 ；7.6%孔雀绿染液,0.5%蕃红染液,苏丹黑染液,二甲苯,中性红染液,碘液；目镜测微尺.镜台测微尺；载片及盖片；方法步骤 一 菌落特点的观看 二 个体外

12、形与出芽 三 子囊孢子的观看 四 酵母死活细胞的观看；结果分析描述酿酒酵母霉菌的菌落外形特点；绘图酿酒酵母的菌体.出芽方式及细胞细节；（一）酵母的菌落潮湿,大而隆起,颜色多样,正反面颜色一样,不透亮,边缘整齐；酵母养分细胞酵母出芽芽体酵母死细胞（蓝色）菌名：酿酒酵母放大倍数： 100× 10（× 5） 特别结构：芽（出芽繁衍）（二）霉菌菌落特点：干燥,正反面及中心与边缘不一样；大而疏松；（如右图）8精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载菌名：青霉（penicillium）菌名：毛霉（circinella）放大倍数： 100× 10（× 5）放大倍

13、数： 100× 10（× 5）特别结构：分生孢子梗（帚状分枝）特别结构：孢子囊足细胞菌名：曲霉（ aspergillus）菌名：根霉（rhizopus）放大倍数：模式图放大倍数： 100× 10（× 5）特别结构：足细胞特别结构：假根试验争论作业：1.绘图说明所观看到的酵母菌.霉菌的外形特点；试验五.微生物大小的测定与显微计数目的要求 学习并把握用测微尺测定微生物细胞大小的方法；明白血细胞计数板的构造及计数原理,把握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法；材料用具啤酒酵母；显微镜.目镜测微尺.镜台测微尺；血球计数板；盖玻片,载玻片,滴管,试管,无菌水,9精

14、品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载方法步骤 一 酵母细胞大小测定(1) 目镜测微尺的校正2细胞大小的测定 二显微计数法(1) 镜检计数室(2) 菌悬液制备及加样(3) 计数(4) 清洗计数板结果分析结果记录入表中；1.目镜测微尺的标定结果（精确到零点几小格）精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载物镜倍数（目镜均为10 倍）40 倍2.酵母菌大小测定结果目镜测微尺的格数（小格）镜台测微尺的格数（小格）目镜测微尺的每格的长度（ m）精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载菌号12345678910目 镜 测 微 尺 的长轴格数（小格）短轴酵母大小平均值±（保留小数

15、点后2 位）长轴短轴3.血细胞计数板对酵母菌悬液计数结果试验次数各中格中菌数总菌数稀释倍数平均值菌数 个/ml 123456789试验争论精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载作业：1. 什么更换不同放大倍数的目镜和物镜时,必需用镜台测微尺重新对目镜测微尺校正；2. .依据试验体会说明血细胞计数法的误差主要来自哪些方面？如何削减误差？3. .在滴加菌液时,为什么要先置盖玻片然后滴加菌液？能否先加菌液再置盖玻片？4. .用血球计数板测定微生物数量时,哪些步骤易造成误差？如何预防？运算细胞数目时此法为否可以适用？试验六环境中微生物的检测和分别纯化精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下

16、载目的要求1. 学习并把握各种无菌操作技术,并用此技术进行微生物的划线分别接种2. 学习把握平板菌落计数法基本原理10精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载土壤为微生物生活的大本营,为生物多样性的重要场所,也为发扬微生物资源的重要基地,可以从中分别纯化得到很多的菌株；划线法为常用的分别与纯化方法,通过无菌操作条件下,“渐划渐稀”的效应而得到菌落纯的菌株；平板菌落计数法为将待测样品经过适当稀释,使其中的微生物充分分散形成单个细胞,取肯定量的稀释样液接种到平板上,经过培育,由每个单细胞生长繁衍而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数,依据其稀释倍数和取样接种

17、量即可换算出样品含菌量；这种方法为活菌计数法,广泛应用于生物制品及污染程度（含菌指数）的检测；精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载土壤中菌含量（个/g 土壤）同一稀释度0.13个平板平均菌落数稀释液浓度精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载材料与用品土样 10g,无菌平皿（ 20 套）及无菌水,牛肉膏蛋白胨平板（2 只）；取液器（ 0.5ml 及 1ml 各三支）；无菌有帽试管,三角瓶,无菌涂棒,接种环,记号笔,酒精灯,火柴,试管架方法步骤1.四周环境中微生物的检测平板分 4 个区做好标记用未洗的手指及肥皂洗过的手指（1 次. 2 次. 3 次,或其它）分别在四个区上涂抹倒置

18、到 37培育 24 小时观看结果；2.土壤中微生物分别纯化及平板计数采土样（ 5 20cm）土 10g,装入到已灭菌的牛皮袋（信封）中,封好袋口1.0g 加入 99ml无菌水（三角瓶）中1ml无菌吸管0.5ml 加入到 4.5ml 无菌水试管中,吹吸三次,振荡匀称10 -3 ；同法得104 610土壤溶液精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载-2用接种环沾取10土壤悬液在已经凝固的平板表面进行划线分别精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载分别取各浓度土壤悬液0.1ml 对号匀称地放入已写好稀释度的牛肉膏蛋白胨平板,用无菌涂棒涂匀（多涂几遍） ；每个浓度做3 个平板；结果分析1.

19、 有较大片菌苔生长时,弃用；2. 选择平均菌落数在30 300 之间的平板；只有一个浓度符合此范畴时,以该平均菌落数为准；有两个浓度的平板菌落数在30 300 之间时,按两者的总数平均打算,比值小于2,取平均,比值大于2 就取较少的菌落总数；全部菌落数大于300,取稀释度最高的平均菌落数乘稀释倍数；全部菌落数均小于 30,取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数（即当全部菌落数均不在30300 之间时,此试验的精确度要求下,可以最接近30 或 300 的菌落数乘稀释倍数） ；试验争论土壤中的菌数量在哪个数量级？你分别的微生物主要有哪些种类？为什么？105 数量级,主要为细菌,也有酵母；主要通过其菌落

20、特点来判定；细菌的菌落为潮湿,其正反面颜色一般一样,普遍比较小；酵母的菌落潮湿,大而隆起,颜色多样,正反面颜色一样,不透亮,边缘整齐；而霉菌菌落特点：干燥,正反面及中心与边缘不一样；大而疏松；试验七细菌鉴定中常用的生理生化反应目的要求明白细菌生理生化反应原理,把握细菌鉴定中常用的生理生化反应方法；通过对不同细菌对不同含碳.氮化合物的分解利用情形,明白基代谢多样性；学习不同培育基基中的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；试验原理各种细菌所具有的酶系统不尽相同,对养分基质的分解才能也不一样,因而代谢产物存在差11精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载别；细菌的这种代谢方式可供鉴别细

21、菌之用；用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物,从而鉴别细菌的种属,称为细菌的生理生化反应；有些细菌能发酵葡萄糖,而不能分解乳糖；有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气体；有的细菌就只产酸不产气；在配制培育基时预先加入溴甲酚紫（ h4.4 红色 h6.2 黄色）,当发酵产酸时,培育基由紫色变黄,气体的产生就可由试管中倒置的杜氏小管中有无气泡来判定；大肠杆菌不产生丁二醇,v.p. 试验为阴性；其进行混合酸发酵,故甲基红试验为阳性；产气杆菌就进行丁二醇发酵,v.p 试验为阳性,甲基红试验为阴性；材料用具e.coli,变形杆菌,枯草芽孢杆菌,产气杆菌,粪水中分别的未知菌种斜面,糖发

22、酵培育基；超净工作台,恒温培育箱,试管,移液管,杜氏小管；甲基红试剂.v.p.试剂；试验步骤各取4 支相应的培育基,标记好发酵培育基的名称.所接菌种名及组号,1 支接大肠杆菌,1支接变形杆菌,1 支接未知斜面菌种,1 支不接；1. 糖发酵试验2. 甲基红试验3. v.p. 试验接种后 37分别培育24h.48h.48h,观看试验结果,将试验结果填入表中；试验结果表 71试验结果编号大肠杆菌枯草芽孢杆菌产气杆菌未知菌ck葡萄糖发酵乳糖发酵 甲基红试验v.p. 试验试验争论如：争论通过哪些生理生化反应可以区分大肠杆菌,产气杆菌？大肠杆菌不产生丁二醇,v.p. 试验为阴性；其进行混合酸发酵,故甲基红

23、试验为阳性；产气杆菌就进行丁二醇发酵, v.p 试验为阳性,甲基红试验为阴性；试验八（综合试验）化能异养微生物的分别与纯化 目的要求 1 把握细菌.放线菌.酵母苗和霉菌稀释分别.划线分别等技术；2 学习从样品中分别.纯化出所需菌株；3 学习并把握平板倾注法和斜面接种技术,明白培育细菌.放线菌.酵母菌及霉菌四大类微生物的培育条件和培12精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载养时间；4 学习平板菌落计数法； 基本原理 土壤为微生物生活的大本营,为查找和发觉有重要应用潜力的微生物的主要菌源；不同土样中各类微生物数量不同,一般土壤中细菌数量最多,其次为放线菌和霉菌；一般在较干燥,偏碱性.有机质

24、丰富的土壤中放线苗数量较多；酵母菌在一般土壤中的数量较少,而在水果表皮. 葡萄园. 果园土中数量多些；本次试验从土壤中分别细菌.放线菌和霉菌； 白面曲 发面用的引子 或酒曲或果园土中分别酵母菌；为了分别和确保获得某种微生物的单苗落,第一要考虑制备不同稀释度的苗悬液；各类菌的稀释度因菌源.采集样品时的季节.气温等条件而异；其次,应考虑各类微生物的不同特性,防止样品中各类微生物的相互干扰；细菌或放线苗在中性或微碱性环境较多但细菌比放线萌生长快,分别放线菌时,一般在制备土壤稀释液时添加10%酚或在分别培育基中加相 应的抗生素以抑制细菌和霉菌 如加链霉素25-50 g ml以抑制细菌； 添加制霉菌素5

25、0 gml或多菌灵 30 ml以抑制霉菌 ；酵母苗和霉菌都喜酸性环境,一般酵母菌只能以糖为碳源,不能直接利用淀粉,酵母菌在ph 5 时生长极快；而细菌生长相宜的酸碱度为ph7,所以分别酵母菌时只要选择好相宜的培育基和ph,可降低细菌增殖率,霉菌生长慢,也不干扰酵母菌分别； 如分别霉菌, 需降低细菌增殖率,一般培育基临用前须添加灭过菌的乳酸或链霉素；为了防止菌丝扩散干扰菌落计 数,分别霉菌经常在培育基中加入化学抑制剂；要想获得某种微生物的纯培育,仍需供应有利于该微生物生长繁衍的最适培 养基及培育条件；四大类微生物的分别培育基.培育温度.培育时间见表所示；表 8-1四大类微生物的分别培育条件 材料

26、与用品 1. 菌源选定采土地点舌；铲去表土层2 3cm,取 310cm深层土壤 10g ,装入已灭过菌的牛皮纸袋内封好袋口,并记录用样地点.环境及日期；土样采集后应准时分别,凡不能立刻分别的样品,应储存在低温.干燥条件下,尽量削减其中菌种的变化；从面曲中分别酵母菌；也可用酒曲等替代；2培育基肉膏蛋白胨培育基.马丁氏培育基.高氏合成一号培育基.豆芽汁葡萄糖培育基 制平板和斜面,3无菌水或无菌生理盐水配制生理盐水 分装于 250ml 锥形瓶中, 每瓶装 99ml或 95ml分别霉菌用 ,每瓶内装 10粒玻璃珠；分装试管,每管装约4.5 5ml不超过试管高度的15 ；4其他试剂与用品无菌培育皿.无菌

27、移液管.无菌玻璃涂棒 刮刀 .称量纸.药匙.洗耳球.10酚溶液； 试验步骤 1稀释分别法平板分别菌有倾注法和涂布法两种；本次试验分别细菌.放线菌.霉菌时采纳倾注法,酵母菌分别采纳涂布法： 2(1) 细菌的分别1制备土壤稀释液称取土样 1 g,在火焰旁加入盛有99ml 并装有玻璃珠的无菌水或无菌生理盐 水锥形瓶中振荡10 一 20min ,使土样中菌体.芽孢或孢子匀称分散,制成10稀释度的土壤稀释液；然后按10 倍稀释法进行稀释分别,以制备10-2 稀释度为例,详细操作过程如下：取4.5 ml无菌水试管 6 支,按 10-210-7 次序编号,放置在试管架上；取无菌移液管一支,从移液管包装纸套中

28、间撕口,将包装纸套分成上.下两段,去除下段包装纸套,在移液管上端管口装橡皮头,取出下段移液管纸套放置桌面,以右手拇指.食指.中指拿住移液管卜端的橡皮头,将吸液端口及移液 管外部表面快速通过火焰2 3 次,杀灭撕纸套时可能污染的杂菌,切忌不要用手指去触摸移液管吸液端口及外部；左手持锥形瓶底,以右手掌及小指.无名指夹住锥形瓶上棉塞,在火焰旁拔出棉塞 棉塞夹在于上,不能乱放在桌上 ,将 lml 移液管的吸液端伸进振荡混匀的锥形瓶土壤悬液底部,用手指轻按橡皮头,在锥形瓶内反复吹吸二次 吹吸时留意其次次液面要 高于第一次吹吸的液面 ,然后精确吸取0.5ml10-2 土壤稀释液,右手将棉塞插回锥形瓶上,左

29、手放下锥形瓶,换持一支盛13精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载有 4.5ml 无菌水的试管,依前法在火焰旁拔除试管帽 或棉塞 ,将 0.5m10-2 土壤稀释液注入4.5m1 无菌水试管内,制成l0 -3的土壤稀释液,将此移液管通过火焰再插入原先包装移液管的下段纸套内,以备再用；另取一只未用过的无菌移液管在试 管内反复吹吸三次,然后取出移液管,并将其通过火焰再插入原先包装移液管的下段纸套内,以备再用；盖上试管帽；右手持 10-3 稀释液试管在左手十敲打2030 次；混匀土壤稀释液；再从纸套取出原先的移液管,插入稀释液已摇匀的试管内,再吹吸三次,然后精确吸出o.5ml 10 -3 的

30、稀释液；置其次支装有4.5 m1 无菌水试管,制成10 4 ：土壤稀释液；用同法再制成 10 -5 . 10-6 .10 一 7 的土壤稀释液 为防止稀释过程误差,进行微生物计数时,最好每一个稀释度更换一支移液管 ：最终用的移液管重新放人纸套内；待灭菌后,再洗刷或将用过的移液管放在废弃物筒中用3%-5%来苏尔浸泡l h后再灭菌洗涤；2 倾注法分别取无菌培育皿69 套,分别于培育皿底面按稀释度编号；稀释完毕后,用原先的移液管从菌液浓度最小的 10-7 土壤稀释液开头吸取1ml稀释液,按无菌操作技术加到和应编号的无菌培育皿内；再依同方法分别吸取1mll0-6 .10-56-5的土壤稀释液,各加到和

31、应编号为10.10的无菌培育皿内；将已灭菌的肉膏蛋白胨固体培育基融解,待冷却至4550度左右, 分别倾入到已盛有i0 -5 .10-6 .10-7 土壤稀释液的无菌培育皿内；留意： 温度过高易将菌烫死,且皿盖上冷凝水太多,会影响分别成效；低于45培育基易凝固,平板易显现凝块.高低不平；倾倒培育基时留意无菌操作,要在火焰旁进行；左手拿培育皿,右手拿锥形瓶底部,左手同时用小指和手掌将棉塞拔开,灼烧瓶口用左手大拇指将培育皿盖打开一缝,至 瓶口正好伸入,倾入培育基约12 15 ml,将培育皿在桌面上轻轻转动,使稀释的菌悬液与融解的琼脂培育基混合匀称混匀后静置桌上,待凝；3培育待平板完全冷凝后,将平扳倒

32、置于3537恒温培育箱中,培育2448h 观看结果；(2) 放线菌的分别1) 制备土壤稀释液称取土样 l g ,加入盛有99m1并装有玻璃珠的无菌水或无菌生理盐水锥形瓶中并加人lo 滴-210酚溶液 抑制细菌生长,可用l 的重铬酸钾溶液代替lo%酚溶液成效更好 ；振荡后静置5min,即成 10-4-5土壤稀释液；精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载-32) 倾注法分别按前法将土壤稀释液分别稀释为10.10.10三个稀释度, 然后用无菌移液管依次分别吸取lml精品学习资料精选学习资料 - - - 欢迎下载10-5 .l0 -4 .10-3 土壤稀释液于对应编号的无菌培育皿内,用高氏合成

33、1 号培育基依前法倾倒平板,每个稀释度做23 个平行培育皿；理盐水内,振荡20min,即成 10-2 的面曲稀释液；如选用果园上样,也依前法称取土样,制成 10-2 壤稀释液；-6-5-43) 涂布法分别 依前法向无菌培育皿中倾倒已融解并冷却至 45-50 的豆芽汁葡萄糖培育基,待平板冷凝后,用无菌移液管分别吸取上述 l0 .l0 .10 三个稀释度苗悬液 0.1ml,依次滴加于对应编号已制备好的豆芽汁葡萄糖培育基平板上；右手持无菌玻璃涂棒,左手拿培育皿,并用拇指将皿盖打开一缝,在火焰旁右手持玻璃涂棒于培育皿平板表面将菌液自平板中心匀称向四周涂布扩散,切忌用力过猛将菌液直接推向平板边缘或将培育

34、基划破；4) 培育接种后,将平板倒置于30恒温培育箱中,培育2 3 d 观看结果；2 划线分别法菌种被其他杂苗污染时或混合菌悬液常用划线法进行纯种分别；此法将蘸有混合菌悬液的接种环在平 板表面多方向连续划线,使混杂的微生物细胞在平板表面分散,经培育得到分散成由单个微生物细胞繁衍而成的菌落,从而达到纯化目的； 平板制作方法如前所述；但划线分别的培育基必需事先倾倒好,需充分冷凝待平板稍于后方可使用；为便于划线,一般培育基不宜太薄,每皿约倾倒20ml培育基,培育基应厚薄匀称,平板表面光滑；划线分别主要有连续划线法和分区划线法两种；1 连续划线法连续划线法为从平板边缘一点开头,连续作波浪式划线直到平板

35、的另一端为止,当中不需灼烧接种环上的菌；以无菌操作用接种环直接取平板上待分别纯化的菌落；将菌种点种在平板边缘一处,取出接种, 烧去余外菌体； 将接种环再次通过稍打开皿盖的缝隙伸人平板,在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却然后从接种有菌的部位在平板上自左向右轻轻划线；划线时平板面与接种环面成3040°的角度,以手腕力气在平板表面轻巧滑动划线；接种环不要嵌入培育基内划破培育基,线条要平行密集,充分利用平板表面积,留意勿使前后两条线重叠；划线完毕,关上皿盖；灼烧接种环,待冷却后放置接种架上；培育皿倒置于适温的恒温培育箱内培育 以免培育过程中皿盖冷凝水滴下,冲散 巳分别的菌落 ；培育后在划线甲板上观看沿划线处长出的菌落外形,涂片镜检为纯种后再接种斜面；2分区划线法平板分四区,故又称四分区划线法；划线时每次将平板转动60 一 70°划线,每换一次角度,应将接种环上的菌烧死后,再在上次划线末尾处连续划线；取菌.接种.培育方法与连续划线法相像；分区划线法划线分别的平板分4 个区,其中第四区为单菌落的主要分布区,故其划线面积应最大；为防止第四区内划线与l .2.3 区线条和接触,应使4 区线条与l 区线条和平行,这样区与区间线条夹角最好保持120 度左右；先将接种环沾取少量菌在平板1 区划 3 5 条平行线,取出接种环, 左手关上皿盖 将平板转动6070°,右手把接