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文档简介

1、SOD酶活性测定所需药品：(1) 0.1 mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液：A液：0.1mol/l磷酸氢二钠液B液：0.1mol/l磷酸二氢钠液1毫升B+10.76毫升A(2) 0.026mol/l 蛋氨酸液(Met):现用现配称取0.3879克蛋氨酸，用1号液定容至100毫升。-5(3) 75*10mol/l氯化硝基四氮口坐蓝(NBT)液：现 用现配250毫升称取0.1533克NBT,先用少量蒸馆水溶解，然后定容至-5(4) 1 umol/IEDTA-2 钠和 2*1 Omol/I 核黄素混合液(5) 0.05mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液(6) xx实验步骤：1酶液制备：4/4称

2、取0.5克鲜叶，放入研钵中，加入3毫升5号液和少量石英砂，于冰浴中 研成匀浆。然后用5号液定容至8毫升，于04C、13000g时离心15分钟， 上清液即为酶提取H攵°酶液可在低于°C下的环境中保存2.按下表加入试剂：反应各系统中试剂用量试剂杯号2号液(ml)1.51.51.51.51.51.51.51.53 号液(ml)0.30.30.30.30.30.30.30.34 号液(ml)0.3 0.30.30.30.30.30.30.3 酶液(ul)00025354555655号液(ul)45835试剂摇匀后，迅速遮光处理1号杯，其余杯在25C、光强为 4000勒克司的条件下照

3、光处理15分钟，然后立即遮光。接着在560nm下，以1 号杯作为空白测定其余杯中溶液的光密度。假定2、3号杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率为100%,然后按下式分别计算 其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率。M/N=100/XM2 ' 3号杯中溶液的光密度的平均值N其余杯中溶液的光密度值X其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率然后以酶液量为横坐标，以其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率（x）为纵坐标制作曲线，根据线性好的曲线所得出的函数尖系计算抑制 NBT光 还原的相对百分率为50%时所加入的酶液量，以该酶液量作为1个酶活单位。结果计算：SOD活力按下式计算：A=V*1000*60/ （B*W*T）A酶活力（酶活力单位gFWh）V酶提取液体积（毫升）B个酶活力单位的酶液量（微升）W样品鲜重（克）T反应时间（分）因测定样品数量多时也可用下列简式计算：A= （ D1-D2） *V*100

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