实验一动物蠕虫学粪便检查技术(一)

1、实验一动物蠕虫学粪便检查技术（一）一、实验目的及要求（1）掌握粪便材料的采集、保存的方法及要领。（2）掌握粪便中蠕虫虫卵及虫体检查法的操作技术。（3）在显微镜下能初步识別吸虫卵、绦虫卵、线虫卵和棘头虫卵，掌握其一般特征。二、实验内容（1）粪便采集、保存的方法及要领。（2）粪便中蠕虫虫体检查法。（3）粪便中蠕虫虫卵检查法。（4）蠕虫各纲虫卵的鉴別特征。三、实验材料（1）拟检查的各种家畜的新鲜粪便。（2）各种虫卵的形态挂图。（3）检查粪便使用的各种器材：载玻片，盖玻片，蹑子，平皿，烧杯，漏斗，漏斗架，胶帽吸管，离 心管，试管，玻璃棒，粪筛，纱布，平底管（青霉索小瓶），玻璃珠，火柴棍，特制铁丝圈，虫

2、卵计数 板，普通离心机，光学显微镜等。（4）检查粪便使用药品：50%甘油水,o.lmol/l（或4%）naoh,饱和盐水四、实验方法、步骤和操作要领（一）粪便的采集、保存和送检法供寄生虫检查的粪便应是新鲜而未被污染的，故须从直肠直接采取，除非亲眼看到动物排粪，才可 从地面收集口然排出的粪便，也可向直肠内注入油类促使排便。直肠取粪：大家畜按直检的方法采集，猪、羊可将食指或中指仲入直肠，钩取粪便，或釆集粪堆或 粪球上部或屮间未被污染的部分：从野外釆集的粪样，动物曾在上面践踏过，无诊断价值，但当直肠采 不到粪便吋，这些粪还是可以检查的。但应尽量选择较新排出的粪便且要收集几份样品，采取的粪便按 头编号

3、装入清洁的容器（塑料杯或纸杯）内，粪样尽可能装满，以便排出空气，减少虫卵的发育和孵化。 采粪用具应每采1份，清洗1次，以免互相污染。采取的粪便应尽快检查，不能立即检查时，应放在冷 暗处或冰箱屮保存，若当地不能检查需送检或长期保存吋，可将粪便浸入加温至50-60°c的5%-10%福 尔马林溶液中，使粪便中的虫卵失去生活能力，起固定作用，又不改变形态，还防止微生物的繁殖。注意在操作中，粪便不能互相感染，己经使用过的工具，必须进行消毒，或另换工具，才能检查笫 二个粪样，粪样更不能搞错，特别在大面积普查工作中，一处要做好登好编号，每次检查都要有详细记 录。（二）粪便的初检在采用各种镜检方法z

4、前，必须观察粪便的颜色，稠度，气味，黏液多少，冇无血液，饲料消化程 度等，特别应仔细观察有无虫体、幼山、绦山结片等。（三）虫卵检查法1 直接涂片法（examination of di rect smears）在清洁的载玻片上滴1-2滴水或1滴廿油与水的等量混合液（加廿油的好处是能使标本清晰，并防 止过快蒸发变干），其上加少量粪便，用火柴棍仔细混匀。再用银子去掉大的草棍和渣子等，z后加盖 玻片（不得产牛气泡），置光学显微镜下观察虫卵或幼虫。（图1-1）图1-1直接涂片法示意图另一方法是直接涂片法的改良法叫冋旋法。取23g粪样加清水23倍，充分混匀成悬液。后用 玻璃棒搅拌0.5-lmin,使z成冋

5、旋运动，在搅拌过程屮迅速提起玻璃棒，将棒端附着的液体放于载片 上涂开，加上盖片在镜下检查。检查时多取儿滴悬液。该方法的原理是由于冋旋搅动的结果，可使玻璃 棒端悬液小滴中附有较多量的寄牛虫卵或幼虫。注意事项：做直接涂片时，涂片的厚薄以在载玻片的下面垫上有字的纸时，纸上的字迹隐约可见为 宜。直接涂片法的优点是简便、易行、快速、适合于虫卵星大的粪便检查；缺点是对虫卵含量低的粪便 检出率低。因此在实际工作屮，需多检儿片，以提高检出率。检查虫卵时，先用低倍镜顺序查盖玻片下 所有部分，发现疑似虫卵物时，再用高倍镜仔细观察。因一般山卵（特别是线虫卵）色彩较淡，镜检时 视野宜稍暗一些（聚光器下移）。（二）漂浮

6、法（method involving flotation）其原理是采用比重高丁虫卵的漂浮液，使粪便中的虫卵与粪便渣子分开而浮于液体表面，然后进行 检查。漂浮液通常多采用饱和盐水，其方法简便、经济、易行。饱和盐水漂浮法对人多数线虫卵、绦虫 卵及某些原虫卵囊均有效，但对吸虫卵、后圆线虫卵和棘头虫卵效杲较差。1饱和盐水漂浮法（费勒鹏法）饱和盐水的配制:把食盐加入沸水锅内，搅拌，使之溶解，边搅拌边加食盐，直到食盐不再溶解 而出现沉淀为止（即1000ml沸水中加入约400g食盐），精制盐配制的饱和盐水一般不必过滤，待冷却 后即可使用（冷却后的溶液有食盐结晶析出，即为饱和，其比重为1.18）；粗制盐配制的

7、饱和液可用 滤纸、纱布或棉花过滤后备用。此溶液应保存于温度不低于13°c的情况下，才能保持较高的比重°饱和盐水漂浮方法操作步骤：取粪便5-10克，置于100-200 升的烧杯中，先加入少量饱和盐 水，把粪便调匀，然后加入约为粪便的12倍屋的饱和盐水，并搅拌均匀，用纱布或40目的铜丝筛过 滤于另一干净的烧杯内，滤液静置30-40分钟，此时比饱和盐水比重轻的虫卵，大多浮于液体表面, 再用钳耳或直径0.5-1厘米的铁丝圈蘸取此液膜，并抖落在载玻片上，进行镜检，或者将此滤液直接 倒入试管内，补加饱和盐水使试管充满，加上载玻片（盖玻片应与液而完全接触，不能留有气泡）， 静置30-40

8、分钟，取下盖玻片，贴在载玻片上进行镜检，可以收到同样效果。（图1-2）图1-2漂浮法示意图2试管浮集法将如上法所得的粪便滤液倒入直立的直径1. 52cm的平口试管或青霉素小瓶中，直到液回接近 管口为止，然后用滴管补加粪液，滴至液面突出管口为止，上放清洁盖片，静置30min厉，平移此盖 片于事先放冇一滴廿油水z载片上镜检；也可将粪液置离心管中离心，取上浮物制片镜检。漂浮法注意事项：饱和盐水漂浮法漂浮时间约为30分钟左右较为适宜。时间过矩（少于10分钟）漂浮不完全；时间 辻长（大于1小时）易造成虫卵变形、破裂，难以识别。另外，漂浮液必须饱和；盐类的饱和溶液须保存在不低于13°c的情况下，

9、才能保持较高的比重；否则效果难以保证。 常见虫卵及漂浮比重如下表：寄生虫卵比重漂浮液比重种类比重种类1000ml水中加入比重的试剂吊：（2）猪蛔虫卵1.145饱和盐水3801701.190钩虫卵1.0851.090硫酸锌溶液3301.180毛圆线虫卵1.1151.130氯化钙溶液851.050猪后圆线虫卵1.20以上同上4401.250肝片吸虫卵1.20以上硫代硫酸钠溶液17501.371.39姜片吸虫卵1.20以上饱和硫酸谍9201.26华支睾吸虫卵1.20以上饱和硝酸钠10001.201.40双腔吸虫卵1.20以上本法检出率高，在实际工作中广泛应用，可以检查大多数的线虫卵和绦虫卵。除饱和盐

10、水漂浮液 以外，其他一些漂浮液也町用于一些特殊虫卵的检查。如饱和硫酸锌溶液（饱和度为1000ml水中溶解 920g硫酸锌）漂浮力强，检查猪肺丝虫卵效果较好；饱和硫酸镁溶液（饱和度为1000ml水中溶解440g 硫酸镁）多用于结肠小袋纤毛虫包囊的检查；饱和蔗糖溶液（饱和度为1000ml水中溶解1280g蔗糖） 性温和，可适于多种虫卵和卵囊的漂浮。漂浮法检杳多例粪便时，如用铁丝圈蘸取漂浮液面，则检査完一例，再蘸取另一例时，需先在酒 精灯上烧过铁丝圈后再用之，以免相互污染，影响结果的准确性。另外，如用载玻片或盖玻片蘸取虫 卵，则使用的载玻片或盖玻片一定要干净无汕腻，否则难以蘸取。（三）沉淀法 （se

11、dimentation technique）其原理是利用虫卵比重比水人的特点，让山卵在垂力的作用下，自然沉于容器底部，然后进行检查。 主要用与吸虫病和棘头虫病的诊断，也对用于其它寄牛虫病的诊断。沉淀法对各种蠕虫卵及幼虫均可查 到，特别适用于检查比重大的虫卵（如吸虫卵等）。注意此法粪量少，一次粪检蚁好多看儿片，以提高 检出率。1. 自然沉淀法取粪便约5-10克，放在干净的烧杯内，加水搅拌，充分混匀称悬浮液，然后用40目铜丝筛过 滤至另一干净量杯屮，滤液静止10-15分钟厉，将上清液倒掉，再加水沉淀，再静止10-15分钟, 倒掉上清液，如此反复多次，直至上清液澄清为止，把上清液倒掉，取沉渣做成涂片

12、镜检。（图 1-3）图1-3沉淀法示意图2. 离心沉淀法通常采川普通离心机进行离心，使虫卵加速集屮沉淀在离心管底，然后镜检沉淀物。方法是取5g 被检粪便，直于平皿或烧杯屮，加5倍量的清水，搅拌均匀。经粪筛和漏斗过滤到离心管屮。置离心机 上离心23分钟（电动离心机转速约为2500转/分），然厉倾去管内上层液体，再加清水搅匀，再离心。 这样反复进行23次，直至上清液淸亮为i：,最后倾去大部分上淸液，留约为沉淀物1/2的溶液量，用 胶帽吸管吹吸均匀后，吸取适量粪汁（2滴左右）置载玻片上，加盖玻片镜检。3. 棉纶筛兜集卵法检查较大的虫卵时，虫卵直径再60微米以上，如片形吸虫、姜片吸虫、同盘科吸虫、口本

13、分体吸 虫等的虫卵，可取上述经40目铜丝筛过滤的滤液倒入260目的锦纶筛兜中过滤，反复用水冲洗，直到 洗出液体清澈透明为止，而后挑取兜中粪渣做抹片检查，可获得满意的结果。五、实验报告1. 将观察到的虫卵特征按下表格式添入，并绘出略图。 虫卵形态特征鉴别表虫卵名称大小形态特征颜色卵壳特征卵内容物2.以饱和盐水漂浮法或沉淀法为例简述粪屮虫卵检查法及注意事项。附：参考资料（-）各类蠕虫卵特征描述1.吸虫卵（trematode eggs）吸虫卵多数呈卵圆形或椭圆形，为黄色、黄褐色或灰褐色。卵壳rh 数层卵膜组成，比较厚而坚实。人部分吸虫卵的一端有卵盖，卵盖和卵壳z间有一条不明显的缝（新鲜 虫卵在高倍镜

14、下时可看见）。当毛蝴发育成熟时，则顶盖而出；有的吸虫卵无卵盖，毛呦则破壳而出。 有的吸虫卵卵壳表面光滑；也有的有各种突出物（如结节、小刺、丝等）。新排出的吸虫卵内，有的含 有卵黄细胞所包围的胚细胞。有的则含有成形的毛蝴。（图1-5）图1-5各类蠕虫卵1.吸虫卵2绦虫卵（有梨形器）3线虫卵4棘头虫卵2. 绦虫卵（costode eggs）圆叶目绦虫卵与假叶目绦虫卵构造不同。园叶目绦虫卵中央有一椭圆 形具三对胚钩的六钩呦。六钩蝴被包在一层紧贴着的膜里，该膜称为内胚膜；还有一层膜位于内胚膜z 外，叫外胚膜。内外胚膜z间呈分离状态，中间含有或多或少的液体，并常含有颗粒状内含物。有的绦 虫卵的内层胚膜上

15、形成突起，被称z为梨形器（灯泡样结构）。各种绦虫卵卵壳的厚度和结构有所不同。 绦虫卵大多数无色或灰色，少数呈黄色、黄褐色。假叶日绦虫卵则非常近似于吸虫卵。3. 线虫卵（nematode eggs） 般的线虫卵有四层膜（光学显微镜下只能看见二层）所组成的卵 壳，壳内为卵细胞。但有的线虫卵随粪排至外界时，已经处于分裂前期；有的甚至已含有幼虫。各种线 虫卵的大小和形状不同，常见椭圆形、卵形或近于圆形。卵壳的表面也各有所不同，有的完全光滑，有 的有结节，有的有小凹陷等。各种线虫卵的色泽也不尽相同，从无色到黑褐色。不同线虫卵卵壳的薄厚 不同，蛔虫卵卵壳最厚；其它多数卵壳较薄。4. 棘头虫卵（thorny

16、-head worm eggs） 山卵多为椭恻或t椭恻形。卵的屮央有一反椭恻形的胚 胎，在胚胎的一端具有三对胚钩。胚胎被三层卵膜包着；最里面的一层常是最柔软的；屮间一层常较厚, 人多在两端有显著的压迹；最外一层的构造往往变化较大，有的薄而平，有的厚，并呈现凹凸不平的蜂 窝状构造。（-）牛、马、羊、猪、犬、猫、兔、家禽寄生虫虫卵图（图 1-6）（图 1-7）（图 1-8）（图 1-9）（图 1-10）（图 1-11）（图 1-12）（图 1-13）14111213图1-6牛寄生虫卵1 大片吸虫卵2前后盘吸虫卵3.日本分体吸虫卵4双腔吸虫卵5胰阔盘吸虫卵6东毕吸虫卵7莫尼茨绦虫卵8食道口线虫卵9仰

17、口线虫卵10吸吮线虫卵11指形长刺线虫卵12 古柏线虫卵13 犊新蛔虫卵14 牛艾美耳球虫卵囊图1-7马寄生虫卵1.马副蛔虫卵2.圆线虫卵3.毛细虫卵4.细颈三齿线虫卵5.裸头绦虫卵6.侏儒副裸头绦虫卵7韦氏类圆线虫卵8.柔线虫卵9.马尖尾线虫卵图1-8羊寄生虫卵1 肝片吸虫卵2大片吸虫卵3前后盘吸虫卵4双腔吸虫卵5胰阔盘吸虫卵6莫尼茨绦虫卵7乳突类圆线虫卵8毛尾线虫卵9细颈线虫卵10.奥斯特线虫卵11捻转血矛线虫卵12马歇尔线虫卵13毛圆线虫卵14夏伯特线虫卵15食道口线虫卵16仰口线虫卵17丝状网尾线虫幼虫：a前端b.尾端18小型艾美耳球虫卵粪图1-9猪寄生虫卵1.蛔虫卵2.猪蛔虫卵衣面观

18、3.猪蛔虫卵蛋白膜脱落分裂至两个细胞阶段4.猪蛔虫木受精卵5.刚棘瓠口线虫卵（新鲜虫卵）6.刚棘瓠口线虫卵（已发冇虫卵）7.猪鞭虫卵8.|员|形蛔状线虫卵（未成熟虫卵）9.|员|形蛔状线虫卵（成熟虫卵）10.六翼泡首线虫卵11结节虫卵（新鲜虫卵）12.结节虫卵（已发育虫卵）13.猪棘头虫卵14.球首线虫卵（新鲜虫卵）15.球首线虫卵（已发冇虫卵）16.红色猪圆线虫卵17.鲍杰线虫卵18.猪肾虫卵（新鲜虫卵）19.猪肾虫卵（含幼虫的卵）20.野猪后圆线虫卵21.复阴后圆线虫卵22.兰氏类圆线虫卵23.华枝睾吸虫卵24.姜片吸虫卵25.肝片吸虫卵26.长膜壳绦虫卵27.截形微口吸虫卵1018112图1t0犬寄生虫卵1 犬弓首州虫卵2狮弓州虫卵3犬复孔绦虫卵4毛细线虫卵5毛尾线虫