几种养殖贝类中副溶血弧菌的分离与鉴定

1、几种养殖贝类中副溶血弧菌的分离与鉴定何丽斌，周宸，林克冰(福建省水产研究所，厦门361012)摘要：副溶血弧(vibrio parahaemolyticus)是-种致病性嗜盐菌，常引起人类食物中毒。通过对三种不同 贝类的检测均发现副溶血弧菌，其中泥酣的检出率为37.5%,僧帽牡蛎为28.0%,波纹巴非蛤为33.3%,平 均检出率为30.8%。关键词：泥虬僧帽牡蛎；波纹巴非蛤；副溶血弧菌；分离；鉴定isolation and identihcation of vibrio parahaemolyticus in severalcultured shellfishhe li-bin, zhou c

2、hen, lin ke-bing(fisheries research institute of fujian. xiamen 361012, china)abstract： vibrio parahaemolyticus is a pathogenic halophile, often causing food poisoning of human.1( were found through the identification of three different shellfishes, which mud cam(teillarca granosa) the detection rat

3、e was 37.5%, 28.0% of saccostrea cucullata,33.3% of paphia undulata, the average detection rate was 30.8% keyword: tegillarca g ran os a:sa ccost re a cucullata paphia undukitawibrio /)arahaem()lyticusisoation identificatio n副溶血弧(vibrio parahaemolyticus)是一种嗜盐的革兰阴性致病菌,属弧菌科 (vibrionaceae)弧菌属(vibrio),

4、乂名嗜盐菌、肠炎弧菌。此菌由藤野ill三郎于1950年首次在 h本大阪发牛的暴发性海产食物中毒事件中分离得到；由坂崎氏在1963年正式命名为副溶 血弧菌副溶血弧菌是引起食源性疾病的匝要病原z，可导致患者出现腹泻、腹部痉 挛、恶心、呕吐、发热，其至脱水、昏迷等症状。1998年以來的资料显示，副溶血弧茵引发 的食物中毒的发生规模及人群暴露规模呈明显上升趋势，均己超过沙门氏菌食物中毒，跃居 首位。副溶血弧菌广泛分布于海湾、海岸线区域、盐湖及海产品中，温热地带较多。该菌 引起的食物中毒是近20年才被发现和車视的，是我国沿海地区夏、秋季食物中毒和急性腹泻 的主要病原菌，该菌在海水中可存活47<1,

5、淡水中可牛存2d,夏季海产品的平均带菌率高达 94.8%。在夏秋季节的沿海地区，经常由于食用污染大量副溶血弧菌而又未经良好加工处 理的海产品而引发突发性食物中毒。近些年来，每年都有该菌引起食物中毒的报道，尤其 是在南方和沿海地区较为常见，一般46月和810月两个汛期为发病高峰。引起屮毒的食 品主耍为海产鱼、虫卜、贝类，其次为肉类、家禽和咸蛋，他尔也可由咸菜引起。目前，副溶 血弧菌引起的食物中毒在细菌性食物中毒中的比例鮫高，其危害程度仅次于沙门氏菌、大肠 杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌f，1, iflj在沿海地区的食物中毒病例中，该菌已成为首要病原。近 年來，山于海产品倍受广大消费者青睐，山它引起的食

6、物中毒也时有发生，i大i此，对水产品 进行副溶血性弧菌检验具有重要的实际意义，加强对海产品屮副溶血弧菌的监测具有重要的 公共卫牛意义。1材料与方法1.1样品2003年8月泥ii(tegillarca granosa)> 僧帽牡(saccostrea cucullata)> 波纹巴非蛤(paphia undulata)等取自泉州、厦门、漳州等沿海养殖区。1.2主耍培养基及试剂培养基和试剂：氯化钠结晶紫増菌液、3.5%灭菌盐水、嗜盐菌选择性琼脂、ss琼脂、 氯化钠廉糖琼脂、3.5%氯化钠三糖铁琼脂、嗜盐性试验培养基、生化试验培养基、甲基红 试剂、靛基质试剂、v-p试剂及各种糖发酵管等购

7、自杭州天和微生物试剂有限公司。1.3仪器stomacher-400拍打式匀浆器、olympus bx-50高级系统生物显微镜1.4检验方法参照gb4789.7-1994食品卫生微生物学检验副溶血弧菌检验1.4增菌培养以无菌操作取样品(全肉)25g,加入225ml3.5%灭菌盐水，用匀浆器均质2min,接种丁 嗜盐菌选择性琼脂平板和ss琼脂平板各二皿，同时取10ml加入到100ml氯化钠结晶紫增菌 液中，放t37°c培养8h后，接种上述平板，t3tc培养24h后取出观察。1.4.2分离培养取平板中可疑菌落，转接3.5%氯化钠三糖铁斜而、氯化钠蔗糖琼脂平板及ss琼脂平板, 37°

8、;c培养24h后观察培养特性。1.4.3涂片镜检将三糖铁反应可疑者及ss琼脂上的可疑菌落，进行涂片，革兰氏染色，在油镜下观察 细菌形态。1.4.4嗜盐性试验将上述可疑培养物分别接种于无盐腺水及3%、7%、9%和11%氯化钠腺水，于37°c培养 24h后观察不同盐浓度中的生长情况。1.4.5生化试验取嗜盐性试验可疑菌分别接种于各类生化培养基，放于37°c温箱中。除甲基红、v-p. 靛基质试验培养48h后加试剂观察外，其余均在24h后观察结果。2结果2.1培养特性分离菌在嗜盐菌选择性培养棊上表现为表而隆起，光滑湿润，不透明，边缘不整齐，菌 落蔓延生长;在ss琼脂平板上出现了边缘

9、整齐、扁平圆形、光滑湿润的粘韧性菌落;3.5% 氯化钠三糖铁琼脂斜面上层产碱为红色、底层产酸为黄色，无气泡，不变照(不产h2s),穿 刺线不呈直线(有动力)；在氯化钠蔗糖琼脂上出现边缘整齐、圆形、湿润、半透明的蓝绿色 菌落。2.2菌体形态革兰阴性多形态杆菌或稍弯曲弧菌，两极浓染，无荚膜，无芽胞，有动力。2.3嗜盐性试验分离菌在无盐豚水和11%氯化钠腺水中不生长，而在3%、7%、9%氯化钠腺水中生长 良好，其中3%氯化钠月东水培养液浑浊，表层出现菌膜。2.4主化试验分离菌的生化特性见表1。表1.分离菌生化特征及其与标准別溶血孤菌的比较半固体动力+葡萄糖产酸+葡萄糖产气蔗糖乳糖tt露醇+硫化氢卩基

10、红+v-p靛基质+赖氨酸+鸟氨酸粘氨酸2.5检出情况根据分离菌的形态特性、培养特性及生化特性，可以鉴定分离菌为副溶血弧菌。通过对三种海产品的检测，副溶血弧菌的检出情况见表2。表2.副溶血弧菌在各种贝类中的检出情况种类样品数检出数检出率平均检出率泥蠟8337.5%僧帽牡蛎25728.0%30.8%波纹巴非蛤6233.3%3讨论随着人民牛活水平的不断提高以及观念意识的更新,水产品因其较高的营养价值越来越 受到广大消费者的青睐。副溶血弧菌是一种海洋嗜盐菌，在海产品中牛存十分广泛，食用了 被该菌污染的食品，及冇对能引起食物中毒。副溶血弧菌主要通过未煮熟的海产甜(如蟹类、 贝类、鱼类、海垂、乌贼等)感染

11、人类卩。同时，副溶血弧菌也是许多水产动物的致病菌， 可导致河口石斑鱼(epinephelus salmoides)l9j、大黄鱼(pseudosciaena crocea)l，0j、红鳍笛鯛 (lutjamis sanguineus)(、大菱轉(scophthcibnus maximus)问、海马hippocampus kelloggi)何、 斑节对(penaeus monodon) 114 凡纳滨对虾(litopenaeus vannamei)1151 > 克氏原螯虾 (procambarus clarkii)【、可 口 美青蟹(callinectes sapidus)1171、文蛤(

12、meretrix in so ria) iix|> a 平洋牡wacrassostrea gigas) (,9九孔鲍(haliotis diversicolor)等发生疾病。通过此次检验, 我们从泥酣、僧帽牡蛎、波纹巴非蛤中都分离出了副溶血性弧菌。有资料显示，我国华东沿 海地区海产品中副溶血弧菌的检出率为57.4%66.5%,夏秋季节更高；海产角虾的带菌率 平均为45%48%,夏季高达90%,这已充分说明，目前市场上出售的海产品中，特别是未 冷冻的海产品中副溶血弧菌的污染程度较为严巫，必须引起人们的足够亜视。副溶血弧菌是 弧菌属中霍乱弧菌以外的11种对人类有致病的弧菌0，据资料报道】，弧

13、菌属中副溶血 弧菌引起的腹泻占首位。虽然木试验的样品数量有限，试验结果并不能反映当前帀场的总体 情况，但仍有一定的参考价值。副溶血性弧菌引起的食物中毒一般多发于511月，高峰季 节在79月，具有明显的季节性。副溶血弧菌在外界环境中很容易死亡，当温度为56°c时5 min up nj"将其杀灭，在食醋中仅仅能存imino因此我们在仓用此类食物时-淀要煮熟蒸透, 以确保杀死病原微生物，改变饮食习惯，不生吃食物，并提倡经常食用食醋。副溶血性弧菌的检验步骤并不复杂，但影响检出率的因索较多，以下儿点值得注意：第 一：由于水产品含水较多，体内酶的活力也较旺盛，易于变质。因此，在采好样品

14、后应最短 的吋i'可内送检。若不能及吋送检，千万不能放冰箱保存，因为副溶血性弧菌不耐低温，最好 将样木放碱性蛋口腺水屮。第二：应根据水产品的检验目的采取不同的部位进行检验。如检 测是否带有某种致病菌时，其检样部位应采取胃肠消化道和鲍等呼吸器官，鱼类取肠管和鲤、 虾类取头胸节内的内脏和腹节外沿处的肠管、邂类取胃和鲤条、螺类取腹足肌肉以下的部分、 双売类取覆盖在斧足肌肉外层的内脏和瓣鲍。而当以判断鲜度为ri的时，应取具肌肉部分。 第三：副溶血性弧菌的适宜培养温度为37°c ,且繁殖速度快，因此，应将增菌时i'可控制在6 8h,以避免时间太长，其它细菌大量繁殖而抑制其生长，

15、从而降低检岀率。夏季海产品由于人量混放，互相污染，因此同一样品屮往往存在儿种不同型的副溶血弧 菌，但山于条件所限，未对分离菌株作血清型鉴定，今后应加强这方而的研究。参考文献1 evans a s,brachman p s.bacterial infections of humans epidemiology and controim.new york: plenum press,1991,3:583-595.2j bettina b w. diagnostic procedures for bacterial infectionsrj.washington, dc: american publ

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